MTT法用于中药成分细胞毒性和增殖检测的干扰因素及控制措施

3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法具有操作简单和成本低廉等优点,被广泛应用于中药成分的细胞毒性和对细胞增殖影响等研究。然而,细胞的数量和密度、MTT浓度和作用时间等实验条件会干扰检测结果的准确性。另外,由于中药成分种类繁多而且化学结构复杂,可能导致吸收光谱漂移、形成近似检测波长的吸收峰及干扰细胞代谢的活性等,影响MTT检测结果的准确性。对近年的相关文献进行整理,归纳和分析了影响MTT实验的实验条件、优化措施和质量控制,归类了检测需要注意的某些中药成分,总结了替代MTT法的其他实验及MTT与其他实验的联合应用,对应用中存在的问题进行了探讨和展望,期望为MTT法在中药成分相关实验中的合理应用提供参考。

补肺益肾组分方Ⅲ对大鼠实验性肺动脉高压的改善作用

目的:探讨补肺益肾组分方Ⅲ(ECC-BYPⅢ)对烟雾和细菌诱导的大鼠肺动脉高压(PH)的改善作用,初步阐明其作用机制。方法:SPF级SD大鼠随机分为对照组(n=9)和造模组(n=140)。对照组大鼠常规饲养,造模组大鼠给予香烟烟雾和克雷伯杆菌(Kp),制备PH模型。停止造模后,造模大鼠按照肺功能均匀的原则分为模型组(n=10)和低剂量(3.24 mg·kg^(-1)·d^(-1),n=9)、中剂量(6.48 mg·kg^(-1)·d^(-1),n=10)及高剂量(12.96 mg·kg^(-1)·d^(-1),n=10)ECC-BYPⅢ组。给药大鼠按照组别每天分别给予相应剂量的ECC-BYPⅢ灌胃,对照组和模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃。连续给药4周。第29天检测各组大鼠肺动脉平均压(mPAP)、收缩压(PASP)、舒张压(PADP)和右心肥大指数(RVHI)。取大鼠肺组织,部分采用苏木精-伊红(HE)染色,观察各组大鼠肺组织中肺小动脉周围炎症等病变;部分采用维多利亚蓝染色,测定各组大鼠肺小动脉血管中非肌性血管、部分肌性血管和肌性血管的百分比,肺小动脉管壁厚度占管径的百分比(WT%)及血管腔面积占血管总面积百分比(LA%)。另取大鼠肺组织,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠肺组织中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、内皮素1(ET-1)和前列环素(PGI2)水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠mPAP、PASP和PADP明显升高(P<0.05或P<0.01),RVHI明显增加(P<0.01),肺小动脉周围炎症细胞浸润明显,肺组织中TNF-α和IL-6水平明显升高(P<0.01),肌性血管百分比和肺小动脉WT%明显升高(P<0.01),非肌性血管百分比和LA%明显降低(P<0.01),肺组织中ET-1水平和ET-1/PGI2比值明显升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,高剂量ECC-BYPⅢ组大鼠mPAP和PADP明显降低(P<0.05);与模型组比较,中和高剂量ECC-BYPⅢ组大鼠肺小动脉周围炎症细胞浸润明显改善,中和高剂量ECC-BYPⅢ组大鼠肺组织中TNF-α及IL-6水平、WT%及肌性血管百分比明显降低(P<0.01),LA%明显升高(P<0.01);与模型组比较,中和高剂量ECC-BYPⅢ组大鼠肺组织中ET-1水平明显降低(P<0.05或P<0.01),高剂量ECC-BYPⅢ组大鼠ET-1/PGI2比值明显降低(P<0.05)。与低剂量ECC-BYPⅢ组比较,中和高剂量ECC-BYPⅢ组大鼠WT%和肺组织中ET-1水平明显降低(P<0.05或P<0.01),LA%明显升高(P<0.01);中剂量ECC-BYPⅢ组大鼠肺组织中TNF-α水平,高剂量ECC-BYPⅢ组大鼠肺组织中IL-6水平和ET-1/PGI2比值明显降低(P<0.05)。结论:ECC-BYPⅢ可降低PH,减小肺血管壁厚度,改善管腔狭窄和肺小动脉肌化,改善肺血管重构,其机制可能与减轻肺血管周围炎症反应、改善血管周围收缩血管因子水平/舒张血管因子水平失衡有关。

慢性阻塞性肺疾病所致肺动脉高压的中医药治疗进展

慢性阻塞性肺疾病所致肺动脉高压发病率高、预后不良。查阅近年来关于中医药防治该类肺动脉高压的文献,依次对其作用机制,中成药、自拟复方制剂,中药有效部位或成分的临床研究和基础研究进行了归纳和分析。发现补益类为主的方剂或中药应用时间较长,活血化瘀类为主的方剂或中药应用时间较短。中药的作用复杂,涉及复杂信号通路和生物学功能的调节,抗炎和改善血液高凝状态是其共有的效应。

复合刺激诱导多种呼吸系统疾病急性加重期动物模型的研究进展

基于临床实践的复合因素,如二次打击模式,在呼吸系统疾病急性加重模型的制作中取得了一定进展。本文汇总了复合因素构建的大鼠和小鼠肺纤维化、慢性阻塞性肺疾病和支气管哮喘急性加重模型,从动物品系选择、模型制备方法和主要的组织病理学变化等方面进行比较和分析,阐释每种模型的特征和适用范围,以期为研究者进一步改良和完善模型或合理选择模型提供参考。

三七总皂苷对MCAO大鼠脑组织中性粒细胞浸润及相关炎性因子的抑制作用

目的:研究三七总皂苷(PNS)对MCAO再灌注大鼠脑组织中性粒细胞浸润及其相关炎性因子的抑制作用。方法:制作MCAO再灌注大鼠模型,分别在缺血2 h、再灌注14 h腹腔注射PNS40 mg/kg、20 mg/kg,再灌注22 h,比色法检测缺血脑组织中MPO活性,ELISA法检测TNF-α、IL-1β、ILAM-1、IL-8和MMP-9含量。结果:与假手术组比较,模型组脑组织中MPO活力显著增强,MMP-9、ICAM-1、IL-8、TNF-α、IL-1β含量显著增加(P<0.01～0.05);与模型组比较,PNS 80 mg/kg组MPO活力显著降低(P<0.05),ICAM-1、IL-8、TNF-α、IL-1β含量显著减少(P<0.01),但MMP-9含量,差异不具有显著性(P>0.05);PNS 40 mg/kg组IL-8、IL-1β含量显著减少(P<0.05)。结论:PNS通过抑制TNF-α、IL-1β的表达,减少TNF-α、IL-1β的信号传递,降低ICAM-1以及IL-8含量,抑制了中性粒细胞的黏附、聚集,降低了中性粒细胞的趋化运动,减弱了中性粒细胞在缺血脑组织的浸润和活化,减轻了脑组织的损害。

黄芪总皂苷合三七总皂苷对实验性脑缺血再灌注脑水肿和脂质过氧化的抑制作用

目的:观察黄芪总皂苷合三七总皂苷(TSA+PNS)对实验性脑缺血再灌注脑水肿和脂质过氧化的影响。方法:结扎大鼠的双侧颈总动脉,复制脑缺血再灌注模型,静脉注射给药,观察TSA+PNS对再灌注后脑组织含水量、脑血管对伊文思蓝通透性的影响。结扎小鼠的双侧颈总动脉,复制脑缺血再灌注模型,静脉注射给药,观察TSA+PNS对手术后12、18、24h脑组织SOD活力、CAT活力和MDA浓度的影响。结果:和假手术组比较,模型动物脑组织含水量、伊文思蓝含量和MDA浓度明显升高(P<0.01),SOD活力、CAT活力明显降低(P<0.01);应用TSA+PNS后,可提高SOD活力、CAT活力,降低MDA浓度、脑组织含水量、伊文思蓝含量(P<0.01～0.05)。结论:TSA+PNS对脑缺血再灌注导致的脑组织水肿、脑血管的通透性和脂质过氧化反应有抑制作用,提高SOD活力、CAT活力可能是其重要的作用机制。

TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖及橙皮素、芍药苷的干预

目的：探讨橙皮素和芍药苷对正常培养及TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：首先,0、50、100、150、200μg/mL的橙皮素或芍药苷作用于正常培养条件下的人肺动脉血管平滑肌细胞,24 h及48 h检测药物的细胞增殖抑制率。接着,应用均匀设计制订TGF-β1与BMP的剂量组合,诱导细胞增殖,多元线性回归和单因素方差分析确定诱导细胞增殖的TGF-β1与BMP的优化剂量组合;应用该剂量诱导细胞增殖,MTT和Brd U两种方法检测药物对细胞增殖的影响。结果：150、200μg/mL的橙皮素或芍药苷抑制正常培养条件下的细胞增殖（P〈0.05或0.01）。多元回归方程显示：TGF-β1和BMP-4对细胞增殖的影响相互拮抗,7.5 ng/mL TGF-β及20 ng/mL BMP-4显著增加细胞的增殖（P〈0.05）。12.5-100μg/mL的橙皮素不能显著抑制TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖（P〉0.05）;25-100μg/mL的芍药苷显著抑制TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖（P〈0.05或0.01）。结论：橙皮素和芍药苷均抑制正常肺动脉平滑肌细胞的增殖。芍药苷抑制TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖,具有较高的研究与开发价值。

脾肺气虚证HIV/AIDS患者CD_8^+CD_(38)^+T淋巴细胞及自然杀伤细胞变化的分析

目的:探索HIV/AIDS脾肺气虚证患者T淋巴细胞活化及自然杀伤细胞数量变化。方法:对河南省某地区的HIV/AIDS患者进行调查,筛选出脾肺气虚证患者26例,并在该地区筛选出20例健康人作为对照。采集患者和健康者的抗凝血液。应用流式细胞术检测外周血中CD_8^+T淋巴细胞绝对数量以及CD_8^+CD_(38)^+T和CD_(56)^+CD_(16)^+CD_3^-细胞的绝对数量和百分率。结果:和健康组比较,脾肺气虚组CD_8^+T和CD_8^+CD_(38)^+T细胞数量和百分率均显著升高(P<0.05-0.01);CD_(56)^+CD_(16)^+CD_3^-细胞数量和百分率均显著降低(P<0.01)。结论:脾肺气虚证患者CD_8^+T淋巴细胞显著活化。NK细胞数量明显下降,提示:脾肺气虚证患者的天然免疫功能受到一定的损害。

牡丹皮提取物抑制TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的间质转化和肺成纤维细胞的活化

目的：探讨牡丹皮提取物（丹皮酚、总苷和多糖提取物按照一定比例形成的组合物）对TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的间质转化和肺成纤维细胞的活化的影响。方法：MTT法分析牡丹皮对两种细胞增殖的影响。TGF-β1诱导A549肺泡上皮细胞的间质转化和MRC-5肺成纤维细胞的活化,用不同剂量的牡丹皮干预;圆形度定量法分析细胞形态,免疫细胞化学法检测细胞E-cad和Collagen-I蛋白的表达;双抗体夹心酶联免疫吸附法检测Collagen-I和FN水平。结果：12.5-200μg/m L牡丹皮对A549细胞和MRC-5细胞的增殖没有显著性影响（P〉0.05）。对于A549细胞,与正常组比较,TGF-β1组圆形度和E-cad表达显著降低（P〈0.01）,Collagen-I表达显著升高（P〈0.01）;与TGF-β1组比较,牡丹皮不能显著抑制圆形度的变化（P〉0.05）,但50-200μg/m L牡丹皮能显著抑制E-cad表达的下调（P〈0.05或0.01）,200μg/m L牡丹皮能显著抑制Collagen-I表达的上调（P〈0.05）。对于MRC-5细胞,与正常组比较,TGF-β1组FN、Collagen-I的分泌量显著增加（P〈0.01）;与TGF-β1组比较,100μg/m L和200μg/m L牡丹皮提取物组的上述两种蛋白的分泌量显著减少（P〈0.05或0.01）。结论：牡丹皮提取物抑制TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的间质转化和肺成纤维细胞的活化,提示牡丹皮可能具有抑制肺纤维化的形成和发展的作用。

黄芪总皂苷和三七总皂苷配伍对大鼠局灶性脑缺血的影响

目的:运用线栓制作脑缺血再灌注大鼠模型,观察黄芪总皂苷和三七总皂苷配伍对脑梗塞百分率的影响。方法及结果:应用二因素五水平均匀设计方法,观察到黄芪总皂苷16 mg/kg和三七总皂苷40 mg/kg配伍时,抗脑梗死形成作用最佳,2×2析因设计试验发现该剂量下两药配伍对于大鼠脑梗死有相加的保护作用。结论:黄芪总皂苷和三七总皂苷配伍具有协同的抗脑梗死作用。

TGF-β诱导肿瘤细胞上皮-间充质转化的调节及信号转导机制研究进展

上皮-间充质转化(EMT)是源于上皮细胞的恶性肿瘤细胞获得迁徙和侵袭能力的重要生物学过程。恶性上皮性肿瘤细胞和基质细胞分泌的转化生长因子β(TGF-β)诱导和促进了肿瘤细胞的EMT过程。有研究表明TGF-β借助于Smad依赖性或非Smad依赖性信号转导通路,诱导或抑制EMT过程关键基因的表达;细胞外及细胞膜的多种因子则对上述信号转导过程产生调节作用。结果提示,在TGF-β诱导的肿瘤细胞的EMT过程,涉及一个复杂而精细的信号转导调控网络。

转化生长因子β及骨形成蛋白通路调节肺动脉血管平滑肌细胞异常增殖

转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)超家族由多种细胞因子组成,主要的配体分为TGF-β和骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMPs)两类。近年来发现,TGF-β和BMPs刺激调节肺血管平滑肌的增殖,相互之间存在拮抗,表现为Smads依赖和Smads不依赖2种方式;个体基因的变异可能导致TGF-β和BMPs对肺血管平滑肌细胞增殖产生不同甚至相反的效应。本文就转化生长因子-β及骨形成蛋白通路调节肺动脉血管平滑肌细胞异常增殖进行综述。

丙肝康对大鼠肝纤维化的抑制作用及其机理探讨

目的 :观察丙肝康对大鼠肝纤维化的抑制作用 ,从糖皮质激素的分泌功能及自由基的产生及清除两方面探讨其机理。方法 :用牛血清白蛋白复制大鼠肝纤维化 ,测定血清 AL T、MAO、肝中胶原蛋白含量、尿中 17- OHCS、肝中 GSH、MDA及 SOD活力。结果 :牛血清白蛋白攻击后 ,大鼠 MAO、胶原蛋白升高 ,肝组织已形成了纤维化 ;MDA升高 ;SOD活力、GSH、17- OHCS下降。在攻击的同时 ,给以动物丙肝康 ,可显著降低 MDA、MAO、胶原蛋白含量 ,提高 SOD活力、GSH含量 ,但对 17- OHCS含量没有影响。结论 :丙肝康有抑制肝纤维化的作用并能提高肝组织中自由基清除系统的功能 ,加强肝组织清除自由基及 MDA,减轻自由基对肝组织的损害 ,但对糖皮质激素的分泌功能无保护作用。

橙皮苷对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞活化的影响

目的:探讨橙皮苷对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞合成细胞外基质的影响。方法:12.5~200μmol·L^(-1)的橙皮苷作用于MRC-5细胞,得出不影响细胞增殖的剂量用于后续实验。5 ng·m L^(-1)的TGF-β1作用于MRC-5细胞,诱导细胞大量合成或分泌细胞外基质成分,同时用橙皮苷干预。结果:12.5~50μmol·L^(-1)橙皮苷未发现显著影响MRC-5细胞的增殖(P>0.05)。受到TGF-β1刺激后,MRC-5细胞的Col-I分泌量和α-SMA及FN的合成量均显著增加(P<0.05)。12.5~50μmol·L^(-1)橙皮苷显著减少上述分子的分泌量或合成量(P<0.05)。结论:橙皮苷抑制TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞合成或分泌细胞外基质成分。

烟草烟雾暴露结合基因工程小鼠在COPD药物靶点及机制研究的应用进展

慢性阻塞性肺疾病(pulmonary disease,chronic obstructive,COPD)是一种常见的呼吸系统疾病,严重威胁人类的生命和健康。COPD的形成与发展,决定于内在基因与外在环境因素的共同作用。烟草烟雾暴露结合基因工程小鼠模拟了特定基因在致病条件下的COPD的生物效应。该文查阅近年的研究文献,总结了上述方法在药物靶标、炎症及免疫机制研究的应用及其发现,概括了这种方法的研究流程。该文为COPD的发病机制和药物研究提供了参考。

艾滋病患者中医症状聚类分析及其类别间比较

目的:对服用抗病毒药物艾滋病患者进行流行病学调查,应用聚类分析法处理样本的中医症状数据,进行样本分类。结合其他实验室检查结果,比较类别之间的差异性。方法:采用横断面流行病学调查方法对200例AIDS患者进行了中医证候调查,对53个有序离散型中医症状或体征变量进行Q型聚类,把样本分成多个类别;应用流式细胞术检测患者外周血CD3+T、CD4+T、CD8+T的绝对计数和CD4/CD8比值,分析样本数量较多的类别之间的差异性。结果:有4个类别样本数量不小于8,比较它们之间的差异性。按照CD4T细胞数量排列的顺序,CD4/CD8比值、体重、夜尿次数、消谷善饥、腹泻、腹泻持续时间、感冒频率、自汗和消瘦的平均得分与CD4数值的变化相一致;而病程长短则和CD4T细胞数量的排列顺序相反。53个有序离散型中医症状或体征变量中,平均年龄最大组有40个平均得分最高占总数的75.5%;平均年龄最小组有25个平均得分最低,占总数的47.2%。卡方检验后发现:四类样本间基本证型分布未有显著性差异。结论:长期使用HAART对CD4细胞数量的改善作用受到病程长短的影响,病程越长,效果越差。另外也说明,体重、感冒频率、腹泻次数等某些症状或体征能够在某种程度上反映外周血中CD4细胞数量的变化规律。HAART艾滋病患者中医症状和体征受到年龄的影响,患者年龄大者症状和体征表现得明显,而与患者的CD4T细胞数量的多少没有必然的联系。

中医药科研实验室痕迹化管理模式的构建

将痕迹化管理应用于中医药实验室的管理之中,着重介绍中医药实验室痕迹化模式的构建方式、建设过程中发现的问题,指出应重视中医研究对象痕迹留存的特殊性,提出痕迹化管理在实施过程中应注意成本的控制和客观化的中医研究对象留存。

黄芪总皂苷和三七总皂苷配伍对小鼠实验性脑水肿的影响

目的:运用结扎颈总动脉和迷走神经法,制作脑缺血再灌注模型,观察黄芪总皂苷和三七总皂苷配伍对脑水肿的影响。方法:ip麻醉小鼠,颈正中切口,暴露并分离双侧颈总动脉和迷走神经,用小动脉夹闭双侧颈总动脉和迷走神经10 min,打开动脉夹再灌注10 min,如此重复3次制作脑缺血再灌注模型。分别采用均匀设计分组、2×2析因设计分组,探讨黄芪总皂苷和三七总皂苷配伍对脑水肿的影响。结果:TSA和TSP均具有不同程度抗实验性脑水肿形成的作用或趋势,配伍后作用更佳,黄芪总皂苷32 mg/kg和三七总皂苷80 mg/kg配伍应用,对脑水肿的抑制作用最好。2×2析因实验显示,在该剂量下两药配伍,可明显降低脑含水量,表现出相加的协同作用。结论:黄芪总皂苷和三七总皂苷配伍具有协同的抗脑水肿的作用。

椒目提取物止咳平喘作用的实验研究

椒目是芸香科植物花椒ＺａｎｔｈｏｘｙｌｕｍｂｕｎｇｅａｎｕｍＭａｘｉｍ．的种子。中医认为有平喘作用。已有报导椒目水煎液及榨油对喷雾组织胺引起的豚鼠哮喘有抑制作用［１］，为进一步探讨椒目的药理作用，我们对椒目的水煎浓缩液及乙醇提取物进行了止咳、平喘的药...

小鼠低温游泳脑缺血模型的建立及在注射液量效关系上的应用

目的：建立一种新的脑缺血小鼠模型，用标准的注射液验证模型的可靠性。方法：小鼠分成3组：生理盐水组，尼莫地平组（1．0mg／kg）和三七总皂苷组（120mg／kg）。静脉注射25min后，动物负重5％体重，在10～10．5气的水中游泳5min，取出，断头，记录断头的喘气持续时间。小鼠分别注射尼莫地平0．3、0．7、1．0、1．5mg／kg或三七总皂苷60、80、120、160mg／kg，同上法操作，探讨两种药物的量效关系。结果：和生理盐水组比较，两个药物能显著延长小鼠断头的喘气持续时间（P〈0.01）。尼莫地平的量效关系方程式为：Y=27．74919x＋18．79446；三七总皂苷的量效关系方程式为：Y=0．13347x＋20．51017，二者的量效关系均显著（P〈0．05，P〈0．01）。结论：新的方法能够用于评价药物的抗脑缺血作用。