大肠杆菌高效表达重组蛋白策略

大肠杆菌表达系统是基因表达技术中发展最早和目前应用最广的经典表达系统。利用该系统表达重组蛋白具有许多优越性,但其表达效率受诸多因素的影响。综述了国内外利用大肠杆菌表达系统高效表达外源蛋白的策略,主要包括选择合适的启动子、改变信号肽结构、提高 mRNA稳定性、提高翻译效率、表达稀有密码子、降低包涵体形成及蛋白降解,利用融合蛋白与分子伴侣、调控发酵条件实现高密度培养等。

Streptomyces hygroscopicus谷氨酰胺转胺酶酶原基因的鉴定及在大肠杆菌中的表达

【目的】鉴定来源于吸水链霉菌的谷氨酰胺转胺酶基因;研究其在大肠杆菌系统的克隆与表达;分析该酶与其同源酶的活性中心氨基酸序列。【方法】从本实验室筛选的吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus;CCTCC M203062)发酵液中,分离纯化得到谷氨酰胺转胺酶酶原(pro-MTGase),测得N-端前十个氨基酸序列并与其它链霉菌来源的相应基因序列比较设计引物,扩增得到pro-MTGase基因,将该基因插入到表达载体pET-20b(+)信号肽pelB下游,构建分泌型表达载体pET/pro-MTG,并转化不同的大肠杆菌宿主BL21(DE3)和Rosetta(DE3)pLysS。【结果】获得了pro-MTGase的完整基因序列,多重碱基序列比对表明其与S.platensis和S.caniferus的pro-MTGase基因同源性高达92%。利用Rosetta(DE3)pLysS通过降温至24℃诱导策略,获得部分胞外表达的酶原。SDS-PAGE显示,胞外表达重组蛋白的分子量约为44kDa,与吸水链霉菌表达的天然酶原相符。诱导4h后发酵液中的重组酶原经胰蛋白酶活化为成熟酶后测得最高酶活为0.24U/mL。【结论】该研究是对吸水链霉菌的谷氨酰胺转胺酶基因的首次报道,也是国内首次利用大肠杆菌实现pro-MTGase的胞外可溶性表达。

徇私枉法犯罪案件争议问题探究

徇私枉法犯罪在司法实践中应当注意以下三个方面:一是主体方面,非司法工作人员在徇私枉法共同犯罪中只能以从犯身份承担刑事责任,同时其也可单独实施本罪的犯罪行为。二是主观方面,本罪的主观故意需要用在案的客观证据加以证实。三是客体方面,是否侵犯到国家司法机关正常工作秩序是判断构成本罪与否的要素之一。

危险驾驶行为的刑法规制

刑法意义上的危险驾驶行为是一种独立的犯罪行为，是指机动车驾驶人员因对其自身驾驶技术过于自信，在自身处于无法安全驾驶状态、机动车处于非正常状态下仍执意进行驾驶，或非正常驾驶机动车，对不特定人的人身、财产及其他合法权益以及公共财产安全形成严重威胁，但未发生损害后果的行为。对危险驾驶行为的判断标准和定罪要件进行理论分析，不但有利于司法实践正确定罪量刑，而且有利于刑法规制的完善。

砥砺前行深根沃土赋新章——记江南大学食品学院的发展模式

“民以食为天”,食品工业关系国计民生,发展食品工业对我国国民经济的持续发展有重要的战略意义。近年来,随着社会经济的发展,中国食品产业及食品科技取得了长足进步。而中国食品工业发展在很大程度上归功于我国近年来在食品科学技术领域人才培养和研究水平的迅猛发展。江南大学食品学院是我国食品工业最著名的学府之一,从成立以来,为我国食品行业培育大批人才,在食品科技领域作出重要贡献。

基于强细胞强组织的高校班团一体化模式研究

班级团支部是高校共青团的"细胞",是提高团的吸引力和凝聚力,扩大团的工作有效覆盖面的基本抓手和首要阵地。针对长期以来班团运行过程中存在班强团弱、职责不清、协同不强等突出问题,本文从"强细胞、强组织"的角度出发,通过岗位设置、运行机制探索,加强发挥组织育人优势,推进班团一体化改革建设。

以危险方法危害公共安全犯罪中未遂犯的认定

不能犯与具体危险犯的区分,对于客观行为危险性的判断有着极为重要的意义,但目前我国刑法界对于二者判断的标准有很多不同观点。文章通过对具体案例分析,认为应当站在事前角度,通过对危害结果或危险状态没有发生的原因进行分析,考虑该原因不出现可能性的大小。当原因不出现的可能性较大时,即认为行为属于具体危险犯;反之则为不能犯。同时具体危险犯与其他结果犯一样,也应当存在未遂形态。

通过有效科研管理 加强学术人才培育

科学研究是高校主要的职能之一，也是评价高校学术水平及综合影响力的重要因素。科研管理部门对高校所有科研活动进行管理，是重要的职能部门。本文分析现在高校科研管理中普遍存在的问题，在此基础上提出从正确引导项目立项、合理分配和管理科研经费以及制定合理的科研绩效评价体系三个方面加强科研人才的培育。

浅评《清风传家 严以治家》

家教严则家风正,家风正则家庭睦,家庭睦则事业兴。由杜刚、朱世方所著,人民日报出版社于2021年11月出版的《清风传家严以治家》一书,令我深有感悟。《清风传家严以治家》一书从“家风”一词的历史渊源入手,论述了以贪为耻的清廉家风、崇俭抑奢的勤俭家风、淡看名利的淡泊家风、刚正不阿的政治家风、不碰腐败的守法家风.

司法会计鉴定的困境与纾难

随着近年来国内法律法规发生变化,司法会计鉴定报告由鉴定意见类证据转变为证人证言类证据,办案机关也将司法会计鉴定报告和审计报告混淆,使证据证明力受到削弱。对此,国家司法机关应当将司法会计鉴定明确为司法鉴定业务,成为案件证据。并强化鉴定人出庭作证,以增强司法会计鉴定报告的证明力。

看豪德如何做大市场

随着全国转方式调结构步伐的加快，作为服务业“大块头”的市场也成为各地竞相发展的重点。由于竞争激烈，各市场运营状况也大不相同。香港豪德集团自1995年起先后在江西、河南、内蒙古、山东等地投资建设了22家贸易广场。已投入运营的18家豪德光彩贸易广场，家家繁荣、个个红火，成为国内商贸流通业的佼佼者。

＂创＂出来的效果——滨州市滨城区开展创先争优活动侧记

4月6日，滨州市滨城区秦皇台乡段李村党支部书记李美枝正与村里的党员在新建的食用菌场内采摘蘑菇。李美枝告诉笔者，整个食用菌场投料30余万袋，年产值可达100多万元，不但解决了村里30多名群众的就业问题，还带动了周边群众发展食用菌。

一个运输协会带富一个村

作为滨州市首家创办农民运输协会的滨城区旧镇镇董集村，在一无地理优势、二无资金优势的情况下，短短两年多的时间里，从一个典型的贫穷村一跃成为全镇第～经济强村，并荣获“山东省文明村”称号。

一篇篇稿件 一串串故事

我是《支部生活》的忠实读者，在基层从事宣传工作。每当提起与贵刊的交往，心情就十分激动。自第一次投稿以米，我先后在贵刊投稿30余篇，每一篇稿件的发表都有一个动人的故事。

一位水务局长的爱民情怀

眼前这位身材矮小的汉子，穿着一身鲁北地区随处可见的蓝西服，脚蹬一双”解放鞋“，被太阳晒得黝黑的脸上透着忠厚。要不是别人介绍，谁也不会想到他就是滨州城区水务局局长韩文远。

李美枝：党员要经得起困难的考验

2011年11月6日，是滨州市滨城区段李村食用菌厂13产量连续21天超过1000斤的日子。下午6点，段李村党支部书记李美枝从厂里回到家后，多年不喝酒的他破例倒了杯白酒，庆祝自己终于为乡亲们找到了一条致富新路。

做一个走在群众前面的人

去年10月21日上午，笔者第三次来到滨城区秦皇台乡采访张永滨，办公室的同志说他早上7点钟就到联系点薛家村去了。快11点了，张永滨才骑摩托车从村里回来。

牟玉霞：星火燎原写大爱

牟玉霞，一个被许多人牢记的名字。 牟大姐，1241名义工对她的共同称谓。 她使22位重症患者得到了及时治疗，她让21名农村贫困孤寡老人重见光明。

当村官的三条原则

滨州市滨城区秦皇台乡段李村的李美枝当村支部书记的三条原则，值得称道。下面先给大家拉拉他当村官的第一条原则——