LY294002在外源性H_2S预处理肝纤维化大鼠肝星状细胞增殖、凋亡中的作用

目的探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)通过PI3K/Akt信号通路对大鼠肝星状细胞增殖、凋亡的调节作用。方法 MTT法分别检测NaHS(H2S的供体)和PI3K/Akt信号通路的特异性抑制剂LY294002对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的增殖、增殖抑制率的影响;采用流式细胞技术检测药物的有效浓度对HSC-T6凋亡的调节。结果低浓度(50μmol/L)的NaHS能够明显促进HSC-T6的增殖(F=955.949,P=0.000),LY294002可抑制HSC-T6的增殖,伴随药物浓度的升高细胞存活率降低(P<0.05),并诱导HSC-T6的凋亡,而二者联合应用诱导HSC-T6凋亡作用增强。结论 H2S可能通过PI3K/Akt信号通路促进HSC-T6的增殖,但对肝星状细胞的凋亡抑制作用并不显著,H2S可协同LY294002共同诱导HSC-T6细胞的凋亡。

H_2S与TNF-a在血管内皮细胞的研究现状

硫化氢(H2S)作为继NO和CO之后的第三类气体信号分子被人们所认知,被研究证实在人体的许多器官组织都有内源性H2S的产生,其对血管内皮的生理学效应也逐步得到认识。肿瘤坏死因子(TNF-α)是一种有效的肿瘤杀伤因子,在血管炎症与免疫应答中的作用十分重要。本文对H2S和TNF-α在血管内皮的不同作用以及二者共同的影响做一综述。

硫化氢在SB203580影响肝星状细胞增殖、凋亡中的作用

目的探讨H2S在P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)阻断剂SB203580影响大鼠肝星状细胞(HSC)-T6增殖、凋亡中的作用及对Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达的影响。方法设对照组(HSC加含10%胎牛血清的DMEM培养液)、二甲基亚砜(DMSO)组(对照组基础上加DMSO)、NaHS组(对照组基础上加NaHS至最适浓度)、SB组(DMSO组基础上加SB203580至最适浓度)、SB+NaHS组。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定SB203580及H2S对HSC的增殖抑制率(IR);Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术(FCM)检测HSC凋亡率;逆转录PCR法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达。结果 SB组(7.64±2.46)、SB+NaHS组(12.71±2.73)细胞凋亡率高于对照组(1.70±0.88),且SB+NaHS组高于SB组(均P<0.05);DMSO组(2.07±1.18)、NaHS组(2.56±1.23)与对照组差异无统计学意义。Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA在各组细胞中均表达,其中NaHS组表达高于对照组(P<0.05),且表达量最多,条带最亮、最宽,SB组与SB+NaHS组表达低于对照组和NaHS组(P<0.05),表达量较少,条带较暗。结论 H2S激活P38MAPK信号通路,且SB203580特异性阻断P38MAPK信号通路后,H2S刺激的HSC增殖受到抑制,凋亡得到促进。

硫化氢对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的:探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)和Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)的影响.方法:选择硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS)作为H2S的供体,将32只♀SD大鼠分为3组:正常组(N组)8只、肝纤维化组(hepatic fibrosis,HF组)13只、NaHS干预组(S组)11只,采用四氯化碳复合因素法复制肝纤维化模型,S组自造模第6周始给予NaHS56μmol/(kg·d)腹腔注射12d,N组和HF组给予同等剂量的生理盐水腹腔注射.干预结束后,宰杀大鼠留取肝脏行肝组织病理切片HE染色评价肝纤维化分期,行Masson染色观察胶原纤维沉积情况,应用RT-PCR法检测肝脏中COL-Ⅰ、COL-ⅢmRNA表达,采用SP免疫组织化学法检测肝脏COL-Ⅰ、COL-Ⅲ表达.结果:HF组与N组相比,COL-Ⅰ、COL-Ⅲ及其mRNA表达升高(均P=0.000),与肝纤维化分期结果一致(P=0.000);S组与HF组相比,COL-Ⅰ和COL-Ⅲ表达降低(均P=0.000);COL-ⅠmRNA表达降低(P=0.009),同时COL-ⅢmRNA表达亦降低(P=0.003),肝纤维化分期下降(P=0.047).结论:H2S具有降低肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的作用,能够延缓肝纤维化的发生发展.

硫化氢对大鼠肝星状细胞PI3K/Akt信号通路的影响

目的观察硫化氢对大鼠肝星状细胞PI3K/Akt信号通路的影响。方法体外培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,以硫氢化钠作为外源性的硫化氢供体,将肝星状细胞分为两组,正常对照组不予任何处理,硫化氢组给予50μmol/L的硫氢化钠处理细胞48 h,提取细胞总蛋白后用Western blot法检测HSC-T6细胞中PI3K、pAkt、Gsk-3β和Bad蛋白的表达。结果与正常对照组比较,硫化氢组细胞PI3K、p-Akt蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),而两组Gsk-3β、Bad蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论硫化氢能够激活大鼠肝星状细胞PI3K/Akt信号转导通路。

硫化氢在p38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞凋亡中的作用

目的探讨硫化氢(H2S)在p38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)凋亡中的作用及磷酸化P38、Caspase-3蛋白表达的变化。方法实验设对照组(HSC加含10%胎牛血清的DMEM培养液)、二甲基亚砜(DMSO)组(对照组基础上加DMSO,使其终浓度为0.1%)、NaHS组(对照组基础上加NaHS,使其终浓度为50μmol/L)、SB组(DMSO组基础上加SB203580,使其终浓度为75μmol/L)、SB加NaHS(SB+NaHS)组;采用Hoechst荧光染色检测细胞凋亡;Western blotting法检测磷酸化p38MAPK表达及Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,SB组和SB+NaHS组HSC-T6的凋亡率增加(P<0.05),NaHS组p38MAPK磷酸化水平及Caspase-3表达均明显增高(P<0.01);与NaHS组比较,SB组和SB+NaHS组细胞凋亡率增加明显(P<0.01),p38MAPK磷酸化水平表达降低(P<0.01);SB+NaHS组较SB组Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。结论 p38MAPK及Caspase-3在H2S刺激的HSC-T6中表达增强,H2S能促使SB203580诱导的HSC-T6细胞凋亡,其作用机制可能与活化p38MAPK的磷酸化途径,进而激活Caspase-3的表达有关。

PI3K/Akt信号转导通路在硫化氢影响肝星状细胞Ⅰ和Ⅲ型胶原表达中的作用

目的 观察PI3K/Akt信号转导通路在硫化氢影响肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达中的作用.方法 体外培养大鼠肝星状细胞-T6,通过外源性硫化氢预处理体外培养的肝星状细胞,同时给予PI3K/Akt信号转导通路的特异性阻断剂LY294002,RT-PCR测定肝星状细胞的Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达,Western blot法检测PI3K/Akt信号转导通路上游蛋白PI3K、p-Akt的表达情况.用SPSS17.0统计软件进行单因素方差分析,多个样本均数间的多重比较采用LSD-t检验分析数据.结果 正常对照组(N组)、二甲基亚砜溶质组(D组)、硫化氢组(S组)、LY294002抑制剂组(LY组)、LY拮抗硫化氢组(LY+S组)Ⅰ型胶原蛋白mRNA的灰度值分别为0.950±0.201、0.970±0.205、1.270±0.213、0.680±0.161、0.420±0.154,Ⅲ型胶原蛋白mRNA的灰度值分别为0.740±0.164、0.730±0.177、1.040±0.215、0.510±0.133、0.290±0.101,与正常对照组相比,单独给予硫化氢组肝星状细胞的Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达增强(F=14.635,P＜0.05),Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达增强(F=14.620,P＜ 0.05),与硫化氢组相比,同时给予硫化氢和LY294002组肝星状细胞的Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达减弱(F=14.635,P＜ 0.05),Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达减弱(F=14.620,P＜0.05).N组、D组、S组、LY组、LY+S组PI3K蛋白的灰度值分别为0.150±0.019、0.170±0.019、0.240±0.027、0.110±0.024、0,060±0.020,p-Akt蛋白的灰度值分别为1.020±0.097、0.940±0.153、1.330±0.236、0.610±0.055、0.330±0.043,与正常对照组相比,单独给予硫化氢组肝星状细胞的PI3K蛋白的表达增强(F=26.672,P＜0.05),p-Akt蛋白的表达增强(F=23.522,P＜0.05),与硫化氢组相比,同时给予硫化氢和LY294002组肝星状细胞的PI3K蛋白的表达减弱(F=26.672,P＜0.05),p-Akt蛋白的表达增强(F=23.522,P＜0.05).结论 硫化氢可能通过激活肝星状细胞PI3K/Akt信号转导通路,增强肝星状细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达.