维生素C对藏猪精液4℃保存及其精子全基因组DNA甲基化的影响

旨在研究维生素C对藏猪精液4℃保存效果及其精子全基因组DNA甲基化的影响。用手握法采集健康藏猪精液,在改进的猪精液低温稀释液中添加不同浓度的维生素C(0.0、2.5、5.0、7.5、10.0g·L^(-1)),4℃保存到第5天时,以藏猪精子活力、精子畸形率、精子顶体完整率和质膜完整率为评价指标,探讨维生素C对藏猪精液4℃保存的效果;用甲基化荧光定量法检测藏猪新鲜精液组、保存到第5天时未添加维生素C组、添加维生素C组(添加维生素C最佳效果组5.0g·L^(-1))精液DNA甲基化的水平,以探讨维生素C对藏猪精液4℃保存所造成的精子全基因组DNA甲基化的影响。结果显示:添加5.0g·L^(-1)维生素C组其精子活力、畸形率、顶体完整率和质膜完整率均显著好于其它组(P<0.05);鲜精组、未添加维生素C组、添加维生素C组的DNA甲基化水平分别为(0.604 7±0.040 3)、(0.920 2±0.016 9)、(0.656 9±0.048 3)ng,鲜精组与添加组均显著低于未添加组(P<0.05),而鲜精组与添加组间差异不显著(P>0.05)。综上表明,在改进的猪精液稀释液中添加5.0g·L^(-1)维生素C可以明显改善藏猪精液4℃保存的效果,并且可以明显降低4℃保存对藏猪精液精子全基因组DNA甲基化的影响,这将为藏猪精液低温保存的生产应用奠定基础。

胰岛素和半胱氨酸对猪孤雌胚早期体外发育的影响

探讨在NCSU-23中添加不同浓度的胰岛素和/或半胱氨酸对猪孤雌胚体外发育的影响.结果表明,在试验1中,添加胰岛素的质量浓度为2.5μg/mL时,猪孤雌胚的卵裂率及囊胚率显著高于对照组(P<0.05);在试验2中,添加半胱氨酸的浓度为1.2 mmol/L时,猪孤雌胚囊胚发育率最高,但添加的浓度大于4.8 mmol/L时,猪孤雌胚的囊胚发育率显著降低(P<0.05);在试验3中,联合添加胰岛素和半胱氨酸时能显著提高猪孤雌胚的囊胚率(P<0.05).因此,在NCSU-23中添加一定浓度的胰岛素和/或半胱氨酸能提高猪孤雌胚发育到囊胚阶段的能力.

猪卵母细胞化学辅助手工去核及手工核移植胚胎发育能力因素的研究

本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较了化学辅助手工去核法和荧光染色去核法、不同类型的供体细胞(颗粒细胞、新生巴马肌肉成纤维细胞和胎儿成纤维细胞)和供体细胞的不同处理方法(70%～80%汇合、血清饥饿法和100%接触抑制法)对重构胚发育能力的影响。结果表明:(1)利用DC诱导去核,对体外成熟培养44h的卵母细胞以浓度0.4μg.mL-1作用0.5～1h为宜。(2)用DC化学辅助手工去核与用荧光染色去核的重构胚囊胚发育率差异不显著(13.11%vs 9.25%,P>0.05)。(3)以胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞为供体构建的重构胚的融合率、卵裂率及囊胚率均差异不显著(P>0.05)。(4)用70%～80%汇合(对照组)组、接触抑制组和血清饥饿组的细胞作供体构建的重构胚,在融合率上,接触抑制组显著高于对照组(P<0.05);在分裂率与囊胚率上,各组之间均无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,化学辅助手工去核法在实际生产中可以替代荧光染色去核法,能省去去核过程中荧光染色及紫外光照射去核等步骤,从而简化了猪手工体细胞核移植程序,提高了猪手工体细胞核移植效率,能为高效的猪手工体细胞核移植技术体系的建立提供参考。

猪手工体细胞核移植电融合/激活参数的优化

通过对猪体细胞核移植中电融合及联合化学激活对猪重构胚发育能力进行探讨,为广西巴马小型猪的手工克隆搭建平台。利用手工克隆(HMC)技术对猪体细胞核移植胚胎采用不同的电融合方法和融合后化学激活不同时间,研究猪手工克隆胚胎的发育能力。结果表明:(1)对重构胚进行一步法电融合时,参数2(180V·mm-1,30μs×1次)与参数1(160·mm-1,30μs×1次)两组间的融合率差异显著(65.31%vs58.33%,P<0.05);(2)对重构胚进行两步法融合时,参数3(第一次:180V·mm-1,10μs×1次,融合60min后进行第二次融合;第二次:85V·mm-1,80μs×1次)和参数4(第一次:200V·mm-1,10μs×1次,融合60min后进行第二次融合;第二次:85V·mm-1,80μs×1次)两组间的总融合率差异不显著(75.88%vs81.20%,P>0.05);(3)采用参数4与采用参数2融合的重构胚其分裂率和囊胚率均差异不显著((79.98%vs72.66%)和(13.14%vs9.36%),P>0.05);(4)在电激活和CHX+CB联合激活4、5、6h这3组中,其分裂率和囊胚率均差异不显著(P>0.05)。相对而言,重构胚采用参数4的两步融合法和CHX+CB激活5h效果较好。

不同浓度Leptin对猪卵母细胞体外成熟和早期孤雌发育的影响

[目的]系统比较了在成熟培养液中添加Leptin对猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活胚的发育率和囊胚质量,同时比较了成熟培养液和胚胎培养液添加Leptin对孤雌激活胚发育的影响。[方法]成熟培养液中添加不同浓度Leptin对猪卵母细胞体外成熟和早期孤雌发育能力的影响及囊胚的内细胞团细胞数目,并且研究了成熟培养液和胚胎培养液单独或联合添加Leptin对猪早期孤雌胚胎发育能力的影响及囊胚的内细胞团细胞数目。[结果]成熟培养液中添加不同浓度Leptin(0,10,50,100和200 ng/ml),体外成熟44 h,卵母细胞核成熟率统计分析差异不显著(P>0.05);将核成熟卵母细胞进行化学激活,第2天胚胎卵裂率统计分析差异不显著(P>0.05),但100ng/ml组与其他组第7天的囊胚率及囊胚的总细胞数差异显著(P<0.05);成熟液添加Leptin 100 ng/ml、胚胎培养液添加Leptin 10 ng/ml与其他组第7天的囊胚率及囊胚的内细胞团细胞数差异显著(P<0.05)。[结论]Leptin对卵母细胞成熟和孤雌胚胎发育能力上有相辅相成的作用。

猪源芽孢杆菌的分离鉴定及其生物学特性研究

为了分离出潜在的猪源益生芽孢杆菌并探究其益生作用以期获得几株优良的芽孢杆菌菌株用于生产实践。试验采用仔猪粪便为原料,通过菌落形态观察、革兰氏染色、生理生化性质鉴定和16S rDNA序列分析、开展生物学特性分析、进行体外抑菌、药敏和淀粉酶、蛋白酶及纤维素酶活性测定等试验,对用营养琼脂固体培养基分离筛选出的两株菌株进行了研究。经过16S rDNA序列分析,确定培养得到的两株细菌为芽孢杆菌(Bacillus haynesii和Bacillus aerius),Bacillus aerius对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长繁殖没有明显的抑制作用;在试验所用到的十种药物中,这两株菌除了对红霉素不敏感外,对其余九种药物均有一定的敏感性;在酶活性试验中,两株菌的蛋白酶和淀粉酶活性比较强,纤维素酶的活性较弱。试验结果表明,这两株芽孢杆菌具有进一步研究并作为益生菌株开发利用的潜能。

西藏牦牛胎儿成纤维细胞的分离与培养

对西藏牦牛胎儿成纤维细胞的分离和培养进行了研究。利用组织块法和酶消化法均能成功分离培养西藏牦牛胎儿成纤维细胞,通过细胞的传代培养、形态学和动力学观察与分析,结果表明,所建立的西藏牦牛胎儿成纤维细胞系具有典型的成纤维细胞形态;西藏牦牛胎儿成纤维细胞要经历滞留期、对数期、平台期,分别为0～2 d、2～7 d、7～8 d。试验结果表明,已成功培养了西藏牦牛胎儿成纤维细胞。

西藏黄牛胎儿成纤维细胞的分离与培养

[目的]以西藏黄牛胎牛为材料,建立西藏黄牛胎儿成纤维细胞系,为在西藏特殊生境条件下高原物种的动物克隆及其他细胞生物学研究提供理想的生物学材料。[方法]对西藏黄牛胎儿成纤维细胞的分离和培养进行了研究。利用组织块法成功分离培养西藏黄牛胎儿成纤维细胞,对细胞的传代培养、形态学和动力学进行观察与分析。[结果]所建立的西藏黄牛胎儿成纤维细胞系具有典型的成纤维细胞形态;西藏黄牛胎儿成纤维细胞要经历滞留期、对数期、平台期,分别为0-2 d、2-7 d、7-8 d,细胞群体倍增时期为60 h。[结论]成功培养了西藏黄牛胎儿成纤维细胞。

一例英国短毛猫肠道内异物的诊断与治疗

为了诊断和治疗一只出现呕吐、食欲不振等症状的34月龄英国短毛猫。采用临床基础诊断方法(问诊、触诊、视诊、听诊)、实验室诊断方法(血常规检测、血液生化检测、并结合血清淀粉样蛋白A与fPL的胰腺炎检测)和数字X线摄影(Digital Radiography,DR)来确诊,确诊后采取治疗方法。结果诊断为患猫肠内异物,需要采取手术治疗,通过手术治疗在患猫空肠和回肠内取出橡胶和杂草等异物,术后跟诊回访,英国短尾猫恢复良好。表明肠内异物的确诊需要临床基础诊断与实验室检测和X射线相结合,手术治疗是高效可靠的方法,手术的成功及术后良好的恢复对肠内异物的治疗具有一定的参考意义。

西藏那曲地区绵羊资源调查与分析

利用1958-2009年间那曲地区绵羊的统计资料,对那曲地区绵羊数量变化的特征和规律进行了分析。结果表明：从1958-2001年44 a间,那曲地区绵羊数量占畜群比例为48%~63%,绵羊数量虽呈现增长趋势,但绵羊增长率也逐渐得到控制;从2002-2009年8 a间,绵羊数量占畜群比例为48%~55%,绵羊增长率逐年呈下降趋势,经过50多年的畜种群结构的调整,已经达到＂发展牦牛（含黄牛）、适度发展山羊、减少绵羊、控制马＂的总体原则,为那曲地区畜牧业的良性发展奠定了基础。

有无透明带猪卵母细胞电激活参数的优化及体外培养方式的建立

[目的]摸索无透明带猪体外成熟卵母细胞(ZFOs)电激活的条件和无透明带孤雌激活胚胎(ZFEs)的体外培养方式,为手工克隆法生产广西巴马小型猪体细胞核移植奠定基础。[方法]用不同场强、脉冲时程和脉冲次数激活ZIOs、ZFOs,用不同培养方式(微滴法和微穴法)培养ZIEs和ZFEs,检查第7天的囊胚率及囊胚的总细胞数。[结果]有带猪体外成熟的卵母细胞电激活最佳场强和脉冲时程为125 V/(mm.80μs),微滴法培养的囊胚发育率为(30.54±11.06)%;无带猪体外成熟的卵母细胞电激活最佳场强和脉冲时程为85V/(mm.80μs),微穴法培养,其囊胚发育率为(12.77±6.98)%;单次脉冲的激活效果好于多次脉冲。[结论]对有无透明带胚胎的培养方式,微穴法培养无透明带胚胎,微滴法培养有带胚胎较合适,一次脉冲可以有效激活卵母细胞。

西藏那曲地区山羊资源调查分析与对策

利用1958～2009年那曲地区山羊的统计资料,分析了那曲地区山羊数量变化的特征和规律。结果表明,那曲地区山羊数量占畜群比例在16%～23%之间,山羊数量占畜群比例呈上升趋势;畜种群结构的调整已经达到"发展牦牛(含黄牛),适度发展山羊,减少绵羊,控制马"的总体原则,为那曲地区畜牧业的良性发展奠定了基础。

西藏那曲地区牦牛资源调查分析与对策

利用1958—2009年间西藏那曲地区牦牛的统计资料,分析了那曲地区牦牛数量变化的特征和规律。结果表明,那曲地区牦牛数量占畜群比例的19%～29%,牦牛数量占畜群比例总体呈下降趋势;畜种群结构的调整已经达到"发展牦牛(含黄牛)、适度发展山羊、减少绵羊、控制马"的总体原则,为那曲地区畜牧业的良性发展奠定了基础。

提高家畜繁殖学教学实习效果的改革与实践

针对目前西藏农牧学院动物科学专业家畜繁殖学课程教学实习中存在的主要问题,提出相应的改革措施,并在2013级动物科学本科1、2班中实施。结果表明,改革后学生在该课程的教学实习中表现出的动手能力、综合运用知识能力都得到了明显的提高。

家畜繁殖学精品课程的建设与实践

为把《家畜繁殖学》建设成适合西藏学生学习特点的精品课程,西藏农牧学院相关教师着重开展了教学改革、编写符合西藏学生学习特点的试题集和实验实习指导书、教学资源上网等工作,并在2014级动物科学本科班进行了实践。结果显示,2014级动物科学本科班学生不仅考试成绩显著高于2013级(P<0.05),而且根据任课教师的平时观察,其学习本课程的积极主动性、理论联系实际能力等方面也比2013级的学生有明显提高。表明该校所建设的《家畜繁殖学》精品课程较适合西藏学生的学习特点,也可以为其他同类课程的建设提供参考。

基于实用技能型人才培养的《牛生产学》实践教学改革

基于培养西藏动物科学专业的实用型、技能型人才,对该专业核心专业课程之一的《牛生产学》进行实践教学改革,主要包括修订实践教学大纲、实验教学改革、教学实习改革等方面。通过实施改革措施,学生对该课程实践教学的兴趣、动手能力、知识的综合运用能力等都有明显的提高,达到了培养西藏实用技能型人才的目的。同时,也可以为同类课程的实践教学改革提供借鉴。

提高家畜繁殖学教学效果的探讨

对西藏农牧学院《家畜繁殖学》教学中存在的主要问题进行分析,提出改革措施、在2013级动物科学本科班进行实施并总结实施效果,以探讨提高该课程教学效果的方法,切实提高其教学效果。结果显示,改革后学生对该课程的学习兴趣、动手能力、综合运用知识的能力等方面都有明显的提高。可见,这些改革措施的实施效果良好,可以在该课程以后的教学中加以借鉴应用。

Ghrelin基因在藏猪胃底组织中的mRNA表达

为分析Ghrelin基因在藏猪与长白猪胃底组织中mRNA的表达差异,运用实时荧光定量PCR技术,对Ghrelin基因在藏猪与长白猪胃底组织中mRNA的表达水平进行相对定量检测分析。结果显示,藏猪胃底组织中mRNA的表达量(0.495 8±0.023 1)显著低于长白猪(0.741 7±0.026 6)。说明Ghrelin基因在藏猪胃底组织中mRNA的低表达可能是藏猪生长缓慢的原因之一,这将为提高藏猪生长速度的进一步研究奠定基础。

卵巢摘除对放牧扎布耶盐山羊GH水平、育肥性能及羊肉品质的影响

【目的】研究卵巢摘除对放牧育肥布耶盐山羊生长激素(GH)水平、育肥性能及羊肉品质的影响,为在我国藏北牧区开展扎布耶盐山羊短期育肥提供技术支持。【方法】选择90只体重相近的2岁龄扎布耶盐母山羊,随机分为空白对照组和卵巢摘除试验组,试验期间两处理组母羊均按当地牧民习惯自由放牧,夜间不予补饲。在卵巢摘除后第0、7、14、21、28、35、42、49和56 d上午9:30空腹称重并颈静脉采血,分析血清GH水平变化情况;饲养56 d后,每组随机屠宰10只母羊,测定其屠宰性能(胴体重、屠宰率、净肉重、净肉率)及羊肉品质(剪切力、pH、蒸煮损失、色度及脂肪、蛋白质、水分、脂肪酸、氨基酸、维生素、胆固醇及6种元素的含量变化)。【结果】从卵巢摘除后第7 d开始至试验结束,母羊血清GH水平较对照组极显著升高(P<0.01,下同);卵巢摘除后前7 d,母羊体重略有下降,此后体重增重稳定增长,至试验结束时平均体重为32.93 kg/只,极显著高于对照组(29.41 kg/只)。卵巢摘除扎布耶盐母山羊的胴体重(14.29kg/只)、屠宰率(43.38%)、净肉重(10.48 kg/只)和净肉率(131.82%)均极显著高于对照组;背最长肌的剪切力、失水率和蒸煮损失较对照组极显著降低,羊肉红度a*显著降低(P<0.05,下同);羊肉脂肪含量较对照组显著提高、水分含量显著降低;背最长肌饱和脂肪酸(ΣSFA)显著低于对照组、单不饱和脂肪酸(ΣMUFA)显著高于对照组;必需氨基酸(EAA)和总氨基酸(TAA)均极显著低于对照组,但赖氨酸和胱氨酸含量极显著高于对照组;背最长肌中维生素E较对照组显著降低,其他维生素含量则无明显变化;背最长肌硒含量较对照组极显著提高,铁和镁含量较对照组显著提高,锌含量较对照组略有下降。【结论】摘除2岁龄扎布耶盐母山羊的卵巢能有效提高其血清GH水平,促进肌肉组织生长发育,尤其是经短期育肥后,扎布耶盐山羊的屠宰率、净肉重和净肉率提高,羊肉品质明显改善。

家兔超数排卵的研究

为了寻求家兔合理的超排方案,构建获得家兔卵子和胚胎的实验平台,进行3个试验:Ⅰ比较不同剂量(40、50、60、70、80和90 IU)的孕马血清促性腺激素(PM SG)对家兔超排效果的影响;Ⅱ比较不同的促卵泡素(FSH)处理方法(恒量法和递减法)对超排效果的影响;Ⅲ比较手术后重复超排对家兔超排效果的影响。结果显示:(1)经过80 IU的PM SG超排处理后,日本长耳白兔卵巢平均排卵点数和平均回收卵子数都显著高于40、50、60、70和90 IU组(P<0.05);(2)用FSH递减法、恒量法和80 IU PM SG超排处理时,日本长耳白兔卵巢平均排卵点数和平均回收卵子数的差异不显著(P>0.05);(3)进行一次手术后重复超排,手术后重复超排的新西兰兔与术前超排效果相比,卵巢平均排卵点数和平均回收卵子数的差异不显著(P>0.05);(4)激素处理不同品种的家兔,左右两侧卵巢排卵点数和平均回收卵子数的差异均不显著(P>0.05)。结论:(1)应用PM SG进行母兔超排处理时,80 IU剂量的超排效果比较好;(2)应用FSH时,采用递减法和恒量法得到的结果差异不显著,在实践中两种方法均可用;(3)适宜的PM SG剂量(80 IU)对兔子的超排效果与FSH相似,在兔子超排处理时,可用PM SG代替FSH;(4)两次手术过程并不会影响超排效果。