基于Me-MLiverpool重组蛋白的新孢子虫胶体金免疫层析检测方法的建立

根据GenBank公布的Nc-livepoor的基因序列,分析Nc-livepoor免疫蛋白的优势线性抗原表位,依据分析结果选取Nc-Liverpool的优势抗原表位集中片段进行串联,构建合成Me-Nc-MLiverpool基因。将该基因克隆至pET-30a(+)质粒中构建重组蛋白质粒pET-30a-Me-Nc-MLiverpool原核表达载体,再进行IPTG诱导表达、分析和纯化及SDS-PAGE和Western blot验证。以0.75 mg/mL的SPA做金标抗原,用纯化后浓度为1 mg/mL的重组蛋白和牛IgG分别做检测线和质控线,建立了检测新孢子虫抗体的胶体金免疫层析检测方法(CGIA)。重组质粒pET-30a-Me-Nc-MLiverpool双酶切验证结果显示,在636 bp的位置有条带,说明重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白大小为39.32 ku;Western blot结果显示,该重组蛋白可与新孢子虫阳性血清特异性识别,表明重组蛋白有较强的反应原性;特异性试验结果显示,新孢子虫CGIA与弓形虫、肝片吸虫、包虫阳性血清不发生交叉反应;敏感性分析显示,GICA可检测出的Nc阳性血清最大稀释倍数为1∶512;对92份牛血清样品进行检测,与商品化的新孢子虫ELISA检测试剂盒检测结果一致,表明建立的GICA准确性较高。综上所述,研究建立的基于新孢子虫Nc-livepoor基因胶体金免疫层析检测试纸条具有较高的灵敏性和特异性,可为新孢子虫病的诊断提供技术支撑。

系统工程在医院药房经济决策中的应用初探

系统工程在医院药房经济决策中的应用初探山西省太谷县人民医院（０３０８００）张素梅，任宏琪，李德华药房是医院经济收入的重要来源，采用科学的管理手段，提高医院药房的经济管理水平，对提高医院的经济效益和社会效益具有重要的意义。系统工程是应用数学方法和必要的...

基于重组致密颗粒蛋白11的弓形虫胶体金免疫层析检测方法的建立

将弓形虫致密颗粒蛋白11(GRA11)部分基因片段插入pET32a(+)载体,构建原核表达载体pET-32a(+)-GRA11,并转化至大肠埃希氏菌BL21(DE3)中进行诱导表达,用SDS-PAGE和Western blot对诱导表达的重组蛋白GRA11 (rGRA11)进行反应原性鉴定。以rGRA11为检测线,兔抗犬IgG为质控线,制备胶体金免疫层析试纸条,与商品化的弓形虫抗体检测试剂盒对119份临床血清样品进行检测对比试验。成功构建了pET-32a(+)-GRA11原核表达载体,SDS-PAGE检测到的蛋白大小约36 ku。Western blot结果表明,弓形虫rGRA11蛋白可被弓形虫阳性血清所识别,具有较强的反应原性。与商品化弓形虫抗体间接血凝试剂盒相比,建立的免疫胶体金层析法敏感性为81.25%,特异性为100%,两种方法的总符合率为97.4%,为弓形虫病临床诊断方法研究奠定基础。

培养学生习惯教师如何作为

随着高中新课程改革的全面展开．学生自主学习习惯的培养已成为教学的一个重要内容。叶圣陶先生说：“教育就是培养习惯。”为了把学生从被动学习中解放出来，最大限度地发掘学生的潜能，提高教学效率，笔者从教师的角度出发做了一些思考。