丹参酮Ⅱ_A通过miR30b-p53信号通路诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的:研究丹参酮Ⅱ_A诱导人肝癌细胞HepG_2凋亡的作用及其机制。方法:用不同浓度的丹参酮Ⅱ_A处理细胞24 h后,检测LDH释放水平,观察丹参酮Ⅱ_A对HepG_2活力的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡;Real-time PCR检测microRNA30家族主要亚型(a,b,c,d)表达;Western Blot检测肝癌细胞内凋亡相关分子Bax、Bcl-2、Caspase-3及p53蛋白表达水平。结果:丹参酮Ⅱ_A对HepG_2细胞内LDH释放及细胞凋亡的诱导均存在量效关系。≥20μmol/L丹参酮Ⅱ_A能显著诱导细胞凋亡(P<0.05),在80μmol/L时最大诱导率达20%。Real-time PCR结果显示,丹参酮Ⅱ_A对miR30b的抑制最为显著。同时丹参酮Ⅱ_A通过抑制miR30b从而诱导了下游分子p53的表达。Western Blot检测结果显示,丹参酮Ⅱ_A上调p53蛋白水平,诱导Bax/Bcl-2及凋亡执行分子Caspase-3的表达。结论:丹参酮Ⅱ_A能诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能为通过调控miR30b-p53介导的细胞凋亡信号通路。

外源硫化氢通过清除4-HNE抑制肝细胞死亡的分子机制研究

目的通过体外细胞实验，研究外源硫化氢（H2S）以4-羟基壬烯酸（4-HNE）为作用靶点抑制肝细胞死亡的作用及分子机制。方法以人的肝癌细胞系HepG2为细胞模型，通过MTT法、LDH活性检测外源H2S对4-HNE诱导肝细胞死亡的抑制作用，利用酶联免疫吸附法检测肝细胞内H2S水平，利用WesternBlot技术检测肝细胞内4-HNE与蛋白质形成的加合物水平。结果外源NariS（H2S前体）能升高肝细胞内H2S水平。外源NaHS（H2S前体）能够显著抑制4-HNE诱导的肝细胞死亡。升高肝细胞内H2S水平可以显著降低细胞内4-HNE与蛋白质形成的加合物水平。结论补充外源性H2S能增加肝细胞内H2S水平，清除细胞内4-HNE蛋白质加合物，从而抑制4-HNE诱导的肝细胞死亡，为以4-HNE为靶点的治疗酒精性肝病的新型药物研发提供重要的理论指导和依据。