高铜日粮对肉鸡肝抗氧化功能和肝细胞凋亡的影响

选用200只1日龄健康商品代AA肉鸡,随机分成4组,使用硫酸铜作为铜源,饲喂玉米―豆粕型基础日粮,对照组饲料铜含量为11mg/kg,3个高铜试验组饲料铜含量分别为110、330和550mg/kg,试验至50日龄结束,探讨高铜日粮对肉鸡肝抗氧化功能和肝细胞凋亡的影响。结果显示,3个高铜试验组超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性先呈代偿性升高,后表现降低,丙二醛(MDA)表现为代偿性升高。随着饲养周期的延长和日粮铜含量的增加,高铜组肉鸡肝细胞凋亡率升高并逐渐出现比较明显的DNA断裂条带。结果表明,日粮铜含量为330mg/kg及其以上可引起肝脏抗氧化功能受损,肝细胞凋亡率升高。

高铜日粮对肉鸡肝脏抗氧化功能的影响

选用1日龄健康商品代AA肉鸡200只随机分成4组,使用硫酸铜作为铜源,饲喂玉米-豆粕型基础日粮,对照组饲料铜含量为11mg/kg,3个试验高铜组饲料铜含量分别为110、330和550mg/kg,试验至50日龄结束,探讨高铜日粮对肉鸡肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量的影响。结果显示:110、330和550mg/kg组T-AOC、SOD和GSH-Px活性先呈代偿性升高,后表现降低,而CAT和MDA分别表现为代偿性下降和升高。表明日粮铜含量为330mg/kg及其以上可引起肝脏抗氧化功能受损,最终导致肝脏功能紊乱。

线粒体基因与疾病关系的研究进展

以线粒体结构和功能缺陷为主要病因的疾病常称为线粒体病,主要指线粒体基因变化所致的疾病。mtDNA基因表达受众多因素调控,存在多个突变位点,其发生突变的概率很大。基因突变和基因表达异常可影响细胞对氧的利用,与一系列病理生理过程密切相关,故而mtDNA被认为与疾病的发生有密切关系。文章主要对近年来线粒体所致疾病与mtDNA相关变化的研究进展作一综述。

猫细小病毒的分离与鉴定

为丰富猫细小病毒(FPV)流行病学资料和制备灭活疫苗,通过猫肾传代细胞(F81)培养方法从疑似感染FPV病猫粪便中分离病毒。对分离到的病毒进行理化性质分析和FPV特异性检测引物PCR鉴定,然后对FPV的VP2基因进行扩增测序。理化性质分析结果与FPV特性均相符,VP2基因测序结果与GenBank已发表的FPV标准株VP2基因序列对比分析,核苷酸序列同源性达到99.0%,证明该分离毒株为猫细小病毒。该毒株的成功分离进一步充实了我国FPV病毒库,也为灭活疫苗的制备奠定了基础。

伪狂犬病病毒Ra株对不同细胞增殖特性及致病性研究

本研究以伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)Ra株体外感染不同的细胞系为模型,研究PRV Ra株最适细胞系。试验采用ST细胞、PK-15细胞、Vero细胞、F81细胞、DF1细胞、MDCK细胞和CEF细胞7种细胞作为该毒株的接种对象,观察毒株在这几种细胞上病变特点、细胞病变时间及病毒增殖规律等并进行比较。观察结果发现,受试的各种细胞在PRV感染期间均能表现明显的细胞病变,但不同细胞在病变时间上存在较大差异,其中PK-15和ST细胞在感染后24h内出现明显细胞病变,时间最早。TCID50测定病毒增殖力结果表明,ST细胞在病毒增殖传代中毒力保持最好,与原毒株毒力相当,为106.9 TCID50/0.1mL。本试验结果表明,ST细胞是较适合于PRV Ra株体外研究的细胞系。

伪狂犬病病毒Ra株体外感染ST细胞超微结构的研究

本研究以伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)Ra株体外感染ST细胞为生物模型,通过透射电镜对PRV的增殖规律和致细胞病变的显微结构进行观察。结果显示,PRV能诱导ST细胞发生明显病变,细胞的病变程度与PRV感染时间密切相关。PRV Ra株感染ST细胞,病毒吸附于ST细胞表面,以膜融合内陷的方式进入细胞和细胞核内,在细胞核内复制,出现包涵体结构,以出芽方式离开细胞核,在高尔基体等细胞内膜结构处完成病毒粒子的囊膜化过程。感染前期,病毒通过膜融合方式被释放到细胞外,完成细胞间病毒的传播;感染后期,细胞溶解,大量释放病毒粒子。感染细胞超微结构的变化主要体现为:线粒体肿胀、数目减少,嵴面积减少,核内出现包涵体,细胞融合,细胞内空泡化严重,溶细胞现象。

α-硫辛酸对Marc-145细胞感染高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒后氧化应激的影响

为探讨高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)对Marc-145细胞抗氧化功能的影响及α-硫辛酸对感染病毒后细胞氧化应激的影响,将安全浓度的α-硫辛酸添加到接种HP-PRRSV的Marc-145细胞培养液中,将细胞分为病毒组(D组)、α-硫辛酸干预病毒组(DLA)、α-硫辛酸干预组(LA组)和正常细胞对照组(NC组)。2h后开始检测α-硫辛酸对HP-PRRSV接种Marc-145细胞后细胞内过氧化氢(H2O2)和丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性。结果表明,与NC组相比,D组细胞H2O2和MDA含量显著增加(P<0.05),SOD活性显著减小(P<0.05),CAT活性显著增强(P<0.05);α-硫辛酸干预后可改善上述指标(P<0.05)。说明HP-PRRSV能够显著引起细胞氧化应激反应;α-硫辛酸能够抑制氧化应激反应,对Marc-145细胞有保护作用。

犬细小病毒感染对MDCK细胞增殖活性及ATP酶的影响

为了研究犬细小病毒感染对MDCK细胞增殖活性及能量代谢的影响,建立了犬细小病毒感染模型,并于病毒感染后6、12、18、24、30 h和36 h,观察细胞的生长状态,同时检测细胞增殖能力和ATP酶活性。与对照细胞相比,病毒感染细胞在24、30、36 h时增殖活性明显下降(P<0.05)。

广州地区犬细小病毒VP2基因的序列分析

犬细小病毒病是一种高度接触性传染病,临床上以急性出血性肠炎和心肌炎为特征。为研究广州地区犬细小病毒病的流行亚型,本试验采集2011—2012年间疑似病犬粪便,进行犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)分离鉴定,提取病毒基因组进行VP2基因扩增和序列分析,与GenBank中登录的参考毒株进行比对,结果发现,分离的8株CPV中SCAU-5为CPV-2b亚型,其余为CPV-2a亚型。结果表明,2011—2012年间广州地区的流行毒株以CPV-2a亚型为主。

N-乙酰半胱氨酸对犬细小病毒诱导的MDCK细胞凋亡及活性氧的影响

为探讨N-乙酰半胱氨酸(25μg/mL)对犬细小病毒侵染MDCK细胞的保护作用,采用噻唑兰比色法来检测NAC对染毒MDCK细胞增殖率的影响,流式细胞术检测NAC对染毒MDCK细胞凋亡率及活性氧ROS水平。结果表明,与对照组相比,染毒组细胞增殖显著下降(P<0.05),而NAC组细胞增殖显著高于攻毒组(P<0.05);染毒组细胞凋亡率显著上升,胞内ROS水平显著升高(P<0.05),呈时间-效应关系,但NAC组明显减轻上述情况。NAC可通过降低ROS的产生从而改善染毒的MDCK细胞凋亡,对细胞起到保护作用。

复方中药超微粉对哺乳母猪免疫功能的影响

选用30头健康临产母猪(大白×长白),随机分成3组,分别为对照组、7.5g/kg组(在全价饲料中添加7.5g/kg复方中药超微粉,下同)和15g/kg组。试验期为24d,并于试验开始后第10、17、24天采血,检测血液中相关免疫因子的变化。结果显示,与对照组比较,7.5g/kg组和15g/kg组红细胞E-C3bRR花环率提高(P<0.05或P>0.05),红细胞E-ICRR花环率下降(P>0.05);7.5g/kg组和15g/kg组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、IgA、IgG、IgM、IL-2、IL-10、TNF-α、IFN-γ水平升高,与对照组相比差异显著或不显著(P<0.05或P>0.05);试验开始后第24天,15g/kg组哺乳母猪血清中IgG、IgM水平下降,与第10天相比差异显著(P<0.05)。结果证实,在哺乳期母猪饲料中添加复方中药超微粉有助于母猪免疫功能的提高,但高剂量添加的时间不宜过长,控制在10d之内为宜。

镧掺杂二氧化钛纳米球涂层的制备与亲水性表征

采用基于溶胶-凝胶和旋节分相相结合的方法在硅基板表面制备La3+掺杂二氧化钛纳米球涂层。通过扫描电子显微镜、X射线光电子能谱仪测试样品的表面形貌以及元素组成,并利用接触角测量仪测试样品的静态接触角。结果表明:在硅基板表面形成一层大小基本一致,分布均匀的、致密La3+掺杂纳米球状二氧化钛,其中掺杂离子是以置换的方式存在于二氧化钛晶格中。基板表面的纳米点中含有的元素包括La,Ti,O。与处理后的纯硅基板和纯二氧化钛纳米点阵相比,掺入La3+后,样品表面的润湿性能增强。

肉鸡原代肝细胞对铜的摄入及铜对胞内钙超载作用

为探讨肉鸡原代肝细胞对铜的摄入及铜对胞内游离钙浓度的影响,将全量换液24 h后的细胞分为空白对照组(Ⅰ组)和10μmol/L Cu^(2+)(Ⅱ组)、50μmol/L Cu^(2+)(Ⅲ组)、100μmol/L Cu^(2+)(Ⅳ组)试验组,于体外培养48 h后,采用火焰原子吸收光谱法测定每组细胞外液的Cu^(2+)含量,并观察不同剂量Cu^(2+)作用下胞内游离钙的变化。结果表明,试验组细胞Cu^(2+)的吸收量均超过85%。各试验组均能明显引起肝细胞内游离钙浓度升高,与空白对照组比较差异显著(P<0.05),且胞内游离钙浓度随Cu^(2+)剂量的增大而升高。结果显示,Cu^(2+)进入了体外培养的肉鸡肝细胞,且Cu^(2+)对胞内游离钙浓度的影响有明显剂量依赖性,Cu^(2+)浓度越高,造成胞内游离钙超载。

维生素C对铜孵育的肉鸡原代肝细胞周期及细胞膜电位的影响

为了研究维生素C对铜孵育的肉鸡原代肝细胞周期及细胞膜电位的影响,试验将全量换液24 h后的原代肝细胞分为正常对照组(Ⅰ组)和10μmol/L Cu2+(Ⅱ组)、30μmol/L Cu2+(Ⅲ组)、50μmol/L Cu2+(Ⅳ组)、50μmol/L维生素C+50μmol/L Cu2+(Ⅴ组)刺激组,于体外刺激后48小时用流式细胞仪测定各组的细胞周期及细胞膜电位。结果表明:30μmol/L和50μmol/L Cu2+能明显引起静止期肝细胞数增多,增殖期肝细胞数减少,细胞膜电位下降(P<0.05),10μmol/L Cu2+组没有出现明显变化。说明维生素C可显著抑制50μmol/L Cu2+引起的变化,对细胞具有保护作用。

1例犬钩虫病的诊治

犬钩虫病是由钩虫科、钩虫属的线虫寄生于犬的小肠或十二指肠的寄生虫病。以贫血、消化功能紊乱及营养不良为特征。本病发病甚广，在我国华东、中南、西北和华北等温暖地区广泛流行，一般主要危害1岁以内的幼犬，成年动物多由于免疫而不发病。笔者在华南农业大学附属动物医院实习期间遇到的1个典型病例，现报道如下。

伪狂犬病毒感染ST细胞的增殖抑制及对细胞周期的影响

以猪伪狂犬病毒(PRV)容A株感染体外培养的ST细胞为模型,采用体外细胞培养技术、噻唑蓝(MTT)还原法、流式细胞计数检测梯度剂量的PRV病毒感染ST细胞株过程中细胞的增殖抑制及对细胞周期的影响。结果显示,PRV感染前期(8h和16h)促进ST细胞的增殖,24h以后可显著抑制细胞增殖,这种抑制与时间密切相关,与感染剂量无显著相关。PRV感染ST细胞可显著地改变细胞周期各时相分布,24h时细胞G1、S期所占比例明显升高,48h细胞停滞在G2期,出现明显的凋亡峰。结果表明,PRV在感染过程中对细胞生长的影响与时间紧密联系,最终可显著使细胞停滞在G2期,诱发细胞调亡。

伪狂犬病病毒感染对ST细胞生长及ATP酶活性的影响

以伪狂犬病病毒(PRV)容A株体外感染ST细胞为模型,观察PRV对ST细胞生长状态以及胞内Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶和总ATP酶活性的影响。根据ST细胞对PRV的敏感剂量,接种ST细胞后第2、12、24、36和48小时观察细胞的生长状态,MTT法检测细胞的增殖能力,用试剂盒检测细胞的ATP酶(Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶和总ATP酶)活性。结果,与对照组相比,在感染后第24小时之前试验组ST细胞的生长状态较好;24h后,细胞活性降低,逐渐发生细胞凋亡。Na+-K+-ATP酶活性、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性和总ATP酶活性在PRV感染过程中变化趋势相似,PRV感染后第24小时之前,Na+-K+-ATP酶活性、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性和总ATP酶活性略高于对照组;第36小时,细胞ATP酶总体活性水平明显低于对照组(P<0.05);第48小时两组之间ATP酶活性差异极显著(P<0.01),其中Ca2+-Mg2+-ATP酶活性较为敏感。

犬细小病毒广州地方株的分离、鉴定

为了研究广州地区的犬细小病毒(CPV)流行状况,试验将临床采集的5份患出血性肠炎且用CPV诊断试纸检测均为阳性的犬粪便,通过猫肾细胞(F81)传代培养,成功分离到1株病毒,并对其进行了病毒形态学、理化学、血凝谱试验、PCR鉴定与动物回归试验,对主要抗原基因VP2测序分析。结果表明:分离病毒为CPV;抗原型属于CPV-2a型。

利巴韦林对猫细小病毒体外抑制作用的研究

猫细小病毒（Feline parvovirus，FPV）又称猫泛白细胞减少症病毒、猫瘟热病毒或猫传染性肠炎病毒。动物感染FPV后主要的临床表现为高热、呕吐、肠炎、腹泻和白细胞数目严重减少，是一种急性病毒性传染病[1]。FPV是目前细小病毒属中感染范围最广、致病性最强的一种病毒，广泛存在于世界各地，主要感染猫科与鼬科等多种动物，其中以幼猫和水貂最为易感旧[2-3]。该病多发于冬末至春秋，是危害猫科和犬科等家养、经济动物和野生动物的主要疫病之一[4]。

猪伪狂犬病病毒TK／gE双基因缺失株PRV／TK^-／gE^-的构建及其生物学特性

为了构建伪狂犬病病毒新兴株(PRV-XX)TK/gE双基因缺失的重组病毒,利用PCR从PRV-XX株基因组分别扩增gE基因两侧序列LgE和RgE,将LgE和RgE克隆到pUC19载体,构建转移质粒pUC19-gE/HEK;进一步将增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)表达盒克隆到质粒中,构建转移质粒pUC19-gE/EGFP;先用构建好的pUC19-TK/EGFP质粒与PRV-XX基因组共转染BHK21细胞,噬斑筛选纯化获得重组病毒PRV/TK-/EGFP;再用pUC19-TK/HEK与PRV/TK-/EGFP病毒基因组共转染BHK21细胞,噬斑筛选纯化获得重组病毒PRV/TK-。在此基础上,用同样方法获得重组病毒PRV/TK-/gE-/EGFP和PRV/TK-/gE-。重组病毒PRV/TK-/gE-的生物学特性研究结果表明:TK/gE缺失稳定,30代次内未见缺失位点变化;TK/gE缺失后,重组病毒PRV/TK-/gE-毒力是亲本毒株PRV-XX株的1/48,但不影响其在ST细胞上的增殖;PRV/TK-/gE-对猪安全有效,其最小免疫剂量为105.0 TCID50,免疫水平与某进口伪狂犬病疫苗相当。