黄连素抑制肺炎克雷伯菌生物膜形成作用机制研究

目的探讨黄连素对肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)生物膜形成的作用,为KP相关感染的诊疗提供理论依据。方法结晶紫半定量法观察不同浓度黄连素对KP生物膜形成过程的影响;实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-PCR)法检测1/8最低抑菌浓度(MIC)、1/4 MIC、1/2 MIC黄连素对KP的Ⅰ型和Ⅲ型菌毛fimA、fimH、mrkA、mrkD、fimK、mrkH基因表达的调控作用。结果与对照组相比,黄连素组生物膜总量随黄连素浓度的增加而明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,黄连素组fimA、fimH、mrkA、mrkD、fimK、mrkH基因的表达水平均显著降低(P<0.05)。结论黄连素有效抑制KP生物膜的形成与下调KP的Ⅰ型和Ⅲ型菌毛结构基因fimA、fimH、mrkA、mrkD以及调控基因fimK、mrkH的表达有关。

微小RNA在复发性流产发病机制中的研究进展

复发性流产是威胁女性身心健康的疑难病症之一,其临床诊断和治疗仍是生殖健康领域亟待解决的重大问题。微小RNA(miR)在细胞的增殖、迁移、侵袭、分化等方面具有重要的调节作用,已经成为很多领域的研究热点。miR可以参与复发性流产的发生与发展并且具有高度保守性,差异表达的miR可以作为临床诊断的潜在标志物。本文从胎盘滋养细胞、子宫蜕膜组织、母胎免疫微环境等多角度阐述miR在复发性流产发病机制中的研究进展,以期为复发性流产的诊断和治疗探索新的标志物。

革兰氏阴性菌外膜囊泡在抗肿瘤治疗中的研究进展

革兰氏阴性菌释放的细胞外囊泡源于细胞最外层膜,被称为外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs),含有磷脂、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、外膜蛋白(outer membrane proteins,OMPs)和细菌特异性抗原等细菌外膜成分。鉴于OMVs的纳米中空结构、高度的免疫原性以及有效激活宿主免疫系统等功能,其作为免疫佐剂、肿瘤免疫治疗剂及抗肿瘤药物递送载体和肿瘤疫苗方面具有良好的应用前景。从OMVs的结构组成、形成机制和抗肿瘤应用等方面综述OMVs进行靶向和免疫治疗肿瘤的潜力,为临床上抗肿瘤治疗开发新的策略。

环二鸟苷酸调控铜绿假单胞菌生物被膜研究进展

从浮游到生物被膜(BF)生命周期的转变能够促进细菌对非生物表面的黏附,逃避宿主免疫系统,增强其对常见抗菌药物的抗性,在导致人类病原菌感染率不断增加的同时,也大大增加了临床治疗的难度。第二信使环二鸟苷酸(c-di-GMP)对BF的调控起重要作用。通过直接靶向c-di-GMP信号传导抑制抗菌药物抗性和BF形成意义重大。文章对c-di-GMP在铜绿假单胞菌BF调控中的作用进行综述。

黄连解毒汤含药血清对脂多糖诱导的肺泡上皮A549细胞炎症反应的作用研究

目的探讨黄连解毒汤对脂多糖诱导的肺泡上皮A549细胞炎症反应的作用,为临床合理应用该方提供理论依据和数据支撑。方法将处于对数生长期的肺泡上皮A549细胞完全随机分为对照组、模型组和低、中、高剂量中药组。对照组加入5%正常大鼠血清;模型组加入含20 mg/L脂多糖的5%正常大鼠血清;低、中、高剂量中药组分别加入含20 mg/L脂多糖的5%、10%、15%黄连解毒汤含药血清。培养24 h后,噻唑蓝法检测肺泡上皮A549细胞活性,酶联免疫吸附试验法检测各组细胞上清中炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α含量,实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法分别检测各组细胞CD147和核因子κB p65的mRNA和蛋白表达。结果模型组细胞上清中IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α水平及细胞CD147和核因子κB p65的mRNA和蛋白表达水平均明显高于对照组(均P<0.01)。中剂量中药组和高剂量中药组IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α水平均明显低于模型组和低剂量中药组[(133±14)、(119±14)ng/L比(219±20)、(189±20)ng/L,(308±31)、(288±28)ng/L比(400±39)、(367±35)ng/L,(362±37)、(310±32)ng/L比(473±46)、(448±46)ng/L](P<0.01或P<0.05)。中剂量中药组和高剂量中药组CD147和核因子κB的mRNA和蛋白表达水平均明显低于模型组和低剂量中药组(P<0.01或P<0.05)。结论黄连解毒汤可抑制脂多糖诱导的肺泡上皮A549细胞炎症因子表达,其作用机制与CD147和核因子κB表达下调有关。

铜绿假单胞菌弹性蛋白酶LasB作用机制及其抑制剂的研究进展

铜绿假单胞菌(PA)广泛存在于自然界中,且易产生抗菌药物耐药性,致病性强,致死率高,其临床感染的管理和治疗存在极大的困难。弹性蛋白酶LasB是PA分泌的最丰富的蛋白酶,被认为是造成PA强致病性的毒力因子之一,具有造成宿主组织损伤、炎症反应、颠覆宿主免疫防御并建立持久定植的能力。本文就LasB的生物学特性和致病机制进行阐述,并对LasB及其抑制剂的研究近况展开综述,以期为PA临床治疗提供思路和方法。

多重耐药铜绿假单胞菌RND外排泵基因调控研究进展

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)是一种革兰氏阴性非发酵菌,在自然界中广泛存在并能耐受恶劣环境,可引起各种医院获得性感染,包括肺炎、血流感染和囊性纤维化患者的感染,同时也是囊性纤维化患者的主要致死原因。目前,多重耐药铜绿假单胞菌感染增加,给临床治疗带来困难,所以迫切需要新的抗生素进行防治。铜绿假单胞菌的耐药机制十分复杂,其中外排泵的过度表达促使抗生素从细胞内排出是导致抗生素抗菌活性降低的重要原因。

噬菌体与抗菌药物联合应用对抗病原菌的研究进展

噬菌体发现于20世纪初期,是能够感染细菌、放线菌、真菌等微生物的病毒总称。近年来为了应对抗菌药物滥用而导致的耐药菌出现,对噬菌体与抗菌药物联合使用的研究受到了人们的重视。本文从噬菌体的生物学特征、噬菌体与抗菌药物联合使用的作用机制以及联合使用对相关病原菌的作用等方面,对噬菌体联合抗菌药物对抗病原菌的研究进展进行综述。

槲皮素对铜绿假单胞菌LasB诱导THP-1巨噬细胞应激反应的保护作用

目的:探讨槲皮素对LasB诱导THP-1巨噬细胞凋亡、炎症反应和氧化应激的保护作用,旨在为槲皮素作为毒力抑制剂用于铜绿假单胞菌感染治疗提供借鉴和参考。方法:采用实验性研究。实验菌株为标准菌株,利用重组蛋白表达技术获得LasB蛋白,弹性蛋白刚果红法和荧光标记弹性蛋白法检测LasB酶活性。构建LasB诱导的THP-1巨噬细胞感染模型并使用槲皮素干预,CCK-8比色法检测细胞活力,倒置显微镜观察细胞形态。TUNEL联合Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡。RT-qPCR和ELISA检测炎症细胞因子和环氧合酶水平。DCFH-DA荧光染色检测胞内ROS水平。采用单因素方差分析对实验数据进行统计学分析,多重比较采用Tukey检验。结果:成功获得相对分子质量33 000的纯度>90%的具有弹性蛋白水解活性的pLasB蛋白。pLasB(100 μg/ml)刺激下,THP-1巨噬细胞活力显著下降,细胞完整率明显降低,细胞凋亡率显著升高,炎性细胞因子IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12和TNF-α水平显著上调,细胞内ROS荧光强度和 COX-2 水平明显增加。而在2.5 μmol/L、5 μmol/L和10 μmol/L浓度槲皮素干预下,THP-1巨噬细胞活力明显改善,细胞凋亡率从18.32%±0.17%分别降低至13.17%±0.20%、11.43%±0.06%和7.74%±0.04%( F=1 679, P<0.05);促炎细胞因子IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-12和TNF-α显著下调,抗炎细胞因子IL-10显著上调;细胞内ROS荧光强度( F=86.92, P<0.05)和 COX-2表达水平( F=24.62, P<0.05)均明显下降。 结论:槲皮素能有效干预铜绿假单胞菌LasB诱导的THP-1巨噬细胞凋亡、炎症和氧化应激,可能作为铜绿假单胞菌的毒力抑制剂。

铜绿假单胞菌动物感染模型的构建及研究进展

铜绿假单胞菌是一种致病机制和耐药机制复杂、发病率和死亡率高的机会致病菌,可致免疫功能低下个体各种组织部位的急、慢性感染,临床以肺部感染、伤口感染和血流感染最为常见。铜绿假单胞菌动物感染模型通过模拟人体细菌感染途径,对深入研究铜绿假单胞菌致病性、耐药性及其防治措施具有重要的应用价值。本文就铜绿假单胞菌动物感染模型构建中实验动物的选择、麻醉和处置进行概述,并对铜绿假单胞菌肺部感染、伤口感染和血流感染动物模型的构建方法、模型评估以及应用进行阐述,以期为铜绿假单胞菌感染性疾病相关科学研究工作提供参考。

2020—2022年河南省某医院高毒力耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分子流行病学特征研究

目的探讨河南省某医院高毒力耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(hv-CRKP)的临床分布、耐药特征和分子流行病学特征,为临床治疗用药和院内感染防控提供科学依据。方法采用临床资料回顾性研究。回顾性分析2020年1月至2022年12月河南省中医院临床微生物实验室分离的CRKP菌株相关患者的临床资料。利用挑丝试验、毒力基因检测、血清杀伤试验和大蜡螟幼虫毒力试验联合检测筛选出hv-CRKP菌株;WHONET 5.6分析hv-CRKP临床特征及25种抗菌药物耐药率;胶体金法检测hv-CRKP的碳青霉烯酶表型,多聚酶链式反应(PCR)技术和桑格测序技术检测hv-CRKP检测碳青霉烯酶耐药基因、多位点序列分型(MLST)和荚膜血清型。结果2020—2022年本院共检出非重复CRKP临床分离株264株,其中hv-CRKP 23株,hv-CRKP的检出率为8.71%(23/264),主要分布在重症医学科(10/23)和神经外科(8/23),标本来源主要为痰液(10/23)和支气管肺泡灌洗液(6/23);hv-CRKP对β-内酰胺类、氟喹诺酮类和氨基糖甙类抗菌药物高度耐药,仅对多黏菌素B、替加环素和头孢他啶/阿维巴坦保持较好的敏感性;23株hv-CRKP中KPC-2型碳青霉烯酶的检出率为91.30%(21/23),未检出B类和D类碳青霉烯酶;MLST和荚膜血清分型结果显示,本院hv-CRKP主要为ST11型,占比56.52%(13/23),荚膜血清型以K64(9/13)和KL47(4/13)为主。结论hv-CRKP主要来自重症科室的下呼吸道标本,耐药情况较为严重,流行株具有一定的多态性,主要为产KPC-2型碳青霉烯酶的ST11-K64型和ST11-KL47型。

大脑中动脉、静脉导管超声指标联合尿微量白蛋白肌酐比值预测妊娠期高血压疾病孕妇胎儿宫内缺氧价值研究

目的探析大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA)、静脉导管(ductus venosus,DV)超声指标联合尿微量白蛋白/肌酐(microalbumin creatinine ratio,ACR)预测妊娠期高血压疾病孕妇胎儿宫内缺氧的临床价值。方法选择2019年1月至2020年1月达州市中西医结合医院诊治的350例单胎妊娠期高血压疾病孕妇作为研究组,按新生儿出生时Apgar评分分为宫内缺氧组和无宫内缺氧组,以同期建档分娩的80例健康孕妇作为正常组,对比分析两组孕妇MCA的最大血流速度(Vmax)、阻力指数(resistance index,RI)、搏动指数(pulsatility index,PI)和DV收缩期最大血流速度/舒张期最小血流速度(S/D),并计算ACR,分析预测效能。结果研究组中42例出现胎儿宫内缺氧,发生率为12.00%。宫内缺氧组产前胎儿MCA Vmax高于无宫内缺氧组,S/D、RI、PI均低于无宫内缺氧组,差异有统计学意义(P<0.05);宫内缺氧组孕妇20~27^+6孕周、28~35^+6孕周的ACR水平高于无宫内缺氧组和正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。MCA、DV彩超指标及ACR的受试者工作特征曲线下面积(area ender curve,AUC)分别为0.613、0.576、0.530,MCA、DV指标联合ACR的AUC为0.790,联合预测的灵敏度为85.6%,特异性为83.70%,高于单一方式预测(P<0.05)。结论 MCA、DV彩超指标与ACR预测妊娠期高血压疾病孕妇胎儿宫内缺氧有较高特异性和灵敏度,值得临床推广。

高毒力肺炎克雷伯菌毒力因子研究进展

高毒力肺炎克雷伯菌是经典肺炎克雷伯菌的一种高毒力变异体,可在免疫功能健全宿主引起严重感染,具有致病性强、病死率高、预后差等特点。目前,高毒力肺炎克雷伯菌已经成为全球关注的重要病原体之一,给公共卫生安全和临床医疗带来重大挑战。本文就国内外有关高毒力肺炎克雷伯菌的荚膜多糖、铁载体、脂多糖和黏附素及新近发现的Ⅵ分泌系统等毒力因子进行阐述,有助于加深对该菌致病机制的理解与认识。