咖啡因通过FAK/AKT/ROCK通路调控人脑胶质瘤U-373MG细胞的恶性生物学行为

目的:探讨咖啡因通过调节FAK/AKT/ROCK信号通路来影响人脑胶质瘤U-373MG细胞的增殖、迁移和侵袭能力。方法:常规培养U-373MG细胞,将其分为对照组、咖啡因低剂量(1 mmol/L)组、咖啡因高剂量(2 mmol/L)组、PF573228组(FAK抑制剂,1μmol/L)、咖啡因高剂量+SC79组(AKT激活剂,8mg/L)。用CCK-8法、Transwell小室实验、流式细胞术和WB法分别检测各组U-373MG细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡,以及U-373MG细胞中p-FAK、p-AKT、p-ROCK、Ki67、MMP-9蛋白表达水平。建立U-373MG细胞裸鼠移植瘤模型,观察咖啡因对移植瘤生长的影响,WB法检测移植瘤组织中相关蛋白的表达。结果:咖啡因、PF573228可显著抑制U-373MG细胞的增殖、迁移、侵袭能力,促进U-373MG细胞凋亡,抑制p-FAK、p-AKT、p-ROCK、Ki67、MMP-9蛋白的表达(均P<0.05),SC79则可部分逆转咖啡因对U-373MG细胞的作用(均P<0.05)。咖啡因可显著抑制移植瘤的生长及移植瘤组织中上述相关蛋白的表达(均P<0.05)。结论:咖啡因可通过抑制FAK/AKT/ROCK信号通路抑制U-373MG细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进其凋亡。

酯键链接增韧基团增强姜黄素对肿瘤细胞靶向性作用

目的:以酯键链接增强基团,制备姜黄素前体,观察其对前列腺癌细胞和正常二倍体细胞生长活性影响的差异。方法:叔丁氧羰基(Boc)-苯丙氨酸酯姜黄素单酯(BPC)作用于人前列腺癌DU-145细胞6～24 h后,MTT试验检测细胞生长活性,流式细胞术检测细胞凋亡率。计数法测定1～7天细胞生长曲线。人主动脉平滑肌(people aortic smooth muscle cells,HASMC)细胞作为对照组。结果:10～40μmol/L的BPC作用于DU-145细胞6～24 h后,DU-145细胞生长抑制率为7.37%～66.87%(P<0.05),呈浓度﹑时间依赖性;部分细胞出现凋亡形态学改变,FSC-SSC散点图可见24 h DU-145细胞凋亡比率为37.84%～47.12%(P<0.05)。对照组HASMC细胞凋亡比率为0.94%～4.23%(P<0.05),较同浓度姜黄素降低。结论:BPC能在体外有效诱导人前列腺癌DU-145细胞凋亡,对正常二倍体细胞的抑制作用较低,为深入研究泌尿系肿瘤靶向性治疗提供了新的途径。

经尿道前列腺电切术后并发认知功能障碍的高危因素分析

目的:研究经尿道前列腺电切(transurethral resection of prostate,TURP)术后并发认知功能障碍(post-operation cognitive dysfunction,POCD)的高危因素和防治方法。方法:收集2005年7月～2009年11月TURP病例1052例,回顾性分析发生POCD病例66例。评价指标:年龄,国际前列腺症状评分(IPSS),体质指数(BMI),有否心肺合并症,美国麻醉学会(ASA)评分,前列腺体积,平均手术时间,麻醉方式(全麻,硬膜外麻醉),围手术期是否输血,短期是否二次手术,有否精神类疾病或其药物史。采用卡方检验和非条件Logistic回归多因素分析。结果:高龄(>73岁),IPSS>26分,ASAⅡ级以上,前列腺体积(重量≥40g),手术时间≥46min,有合并心肺疾病,有精神相关疾病和服相关药物史,麻醉方式为全麻,和急需短期二次手术等有统计学意义(P<0.05)。BMI,围手术期是否输血无统计学意义(P>0.05)。多因素Logistic回归分析(β,OR值,P值):麻醉方式(2.234,7.082,0.000),有精神类疾病或其服药史(2.012,5.314,0.001),年龄(1.473,2.426,0.012),ASA评分(0.685,3.403,0.003),手术时间(0.538,2.005,0.019)有统计学意义(P<0.05)。结论:TURP术后并发POCD的高危因素包括高龄、ASA分级、手术时间、麻醉方式(全麻)、有无精神相关疾病或其服药史(P<0.05)。POCD相关因素筛选有助于提高早期诊断率,及时处理,防止继发其他并发症发生。

姜黄素引入酯键增韧基团对膀胱癌T24细胞靶向作用的体外研究

目的:探讨姜黄素引入酯键增韧基团成为姜黄素前体化合物后靶向诱导膀胱癌T24细胞凋亡,为膀胱癌靶向治疗提供依据。方法:取不同浓度姜黄素前体化合物:叔丁氧羰基-苯丙氨酸酯姜黄素单脂(boc-phenylalanine-curcumin,BPC)及相同浓度的姜黄素对膀胱癌T24细胞及人主动脉平滑肌细胞(people aortic smooth muscle cells,HASMC)作用后,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,透视电镜观察BPC 20、40μmol/L处理T24细胞后细胞超微结构的改变。结果:5～40μmol/L BPC及姜黄素母体作用于膀胱癌T24细胞6～24 h后均明显抑制其增殖,呈时间剂量依赖,抑制率BPC:5.31%～59.34%(P<0.05);姜黄素:7.33%～63.59%(P<0.05);对正常二聚体细胞HASMC的抑制作用BPC较姜黄素组明显降低(1.41%～12.34%vs 5.34%～36.59%),差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪分析5～40μmol/L BPC及姜黄素作用于膀胱癌T24细胞24 h后,BPC诱导凋亡率:16.97%～47.12%(P<0.05),姜黄素:19.21%～48.92%(P<0.05);而对HASMC作用则较姜黄素明显减弱,BPC诱导凋亡率为:0.94%～3.27%,姜黄素组为:4.69%～11.35%,差异有统计学意义(P<0.05)。透视电镜显示:经BPC作用后,T24细胞出现典型细胞凋亡的形态学特征。结论:姜黄素酯前体化合物BPC明显抑制膀胱癌T24细胞增殖、诱导其凋亡,而对正常二倍体细胞HASMC抑制作用降低,为姜黄素酯对肿瘤的靶向治疗研究提供新的依据。

探讨TBL教学法在神经外科规陪生临床操作教学中的应用

目的探讨TBL教学法在规培生神经外科临床操作教学中的应用效果。方法将20例住院医师规范化培训的学生随机分为实验组和对照组,实验组采用TBL教学法(课前预习准备→个人测试及小组测试→教师示范→分组操作练习,组内、组间互相提问、考核重点→组内、组间总结操作错误及遗漏,教师给予点评→考试),对照组应用常规讲授教学法(教师示范→学生操作练习→考试),培训完成后进行成绩比照及问卷调查。结果实验组临床操作技能考核成绩优于对照组,实验组对教学效果评价的满意度高于对照组。结论采用TBL教学法进行规培生神经外科临床操作教学有利于调动学生主动性,强化了学生将基础理论与实际操作的联系,使学生更好的理解了临床技能操作重点,为临床操作考核的顺利通过提供确切保障。

Wistar大鼠急性肾脏缺血再灌注损伤动物模型的建立及意义

目的:建立一种简单、安全、高成功率的大鼠急性肾脏缺血再灌注损伤动物模型。方法:应用微型动脉夹夹闭Wistar大鼠双侧肾动脉50min后松开,于伤后第3、5、7天取肾,经一系列处理后进行HE染色及免疫组化染色,以观察在肾脏近曲小管上皮细胞中是否出现肾损伤分子-1(kidney injury molecule-1,Kim-1)抗原及该细胞形态学改变。结果:该法造模成功率达93.3%,实验组肾脏近曲小管上皮细胞Kim-1抗原表达率上升,同时该细胞有明显细胞形态学改变(P>0.05)。结论:应用微型动脉夹夹闭Wistar大鼠双侧肾动脉可制备急性肾脏缺血再灌注损伤模型,且成功率高、方法简单。

模拟教学结合问题教学在神经外科临床教学中的应用

在神经外科临床教学中采用模拟教学结合问题教学(PBL)方法,有利于开展实习生教学,提高临床教学质量和学生综合素质,培养出与社会发展相适应的医学人才。

模拟教学结合问题教学模式在医学临床教学中的应用分析

目的总结对模拟教学结合问题教学教学模式在医学教学中的应用效果调查与分析,得出此方法在教学中的应用价值。方法对2016级临床医学专业学生采用模拟教学结合问题教学模式,同时与2015级临床医学专业采用传统教学模式的学生成绩进行对比,比较两组学生的教学效果。结果观察组实习生的理论成绩(35.17±0.82)分和实践操作考核成绩(56.85±0.96)分均显著高于对照组学生的理论成绩(27.26±0.27)分和实践成绩(42.38±0.92)分,(t=10.022、11.126,P=0.000)。结论模拟教学结合问题教学的教学模式能够有效提高学生的学习效果,在提高学生主动学习同时,更养成了学生积极正确的临床思维,该教学法可以在临床教学中广泛推广。

Ommaya囊植入在治疗老年慢性硬膜下血肿中的应用价值

目的:探讨Ommaya囊植入在治疗老年慢性硬膜下血肿中的应用价值。方法:选取2015年10月1日至2016年11月1日在本院进行治疗的慢性硬膜下血肿的老年患者46例,随机分为观察组和对照组,分别行Ommaya囊植入治疗和常规钻孔引流治疗,对比两组患者治疗的临床效果、相关临床指标以及并发症的出现情况。结果:观察组患者治疗的临床效果显著优于对照组患者(χ2=13.475,P=0.000);观察组患者治疗后的住院时间以及血肿残余量均显著少于对照组患者(P<0.05);观察组患者术后并发症的出现率显著低于对照组患者(χ2=16.052,P=0.000)。结论:Ommaya囊植入治疗是一种安全性高、便捷、经济的微创方法,其能够有效地提高慢性硬膜下血肿的治愈率,同时降低术后并发症的发生率。

内镜下经鼻蝶手术治疗复杂垂体腺瘤的疗效分析

目的:分析内镜下经鼻蝶手术对于复杂性垂体腺瘤的治疗效果。方法:在2016年1月1日至2017年9月1日间,选择齐齐哈尔医学院附属第三医院神经外科内镜下经鼻蝶窦行手术切除的45例垂体瘤患者资料进行回顾性总结分析,仅选择垂体泌乳素(PRL)腺瘤与垂体生长激素(GH)腺瘤患者,评价患者的治疗效果、生活质量评分、并发症情况以及激素改善情况等。结果:45例患者治疗后,经过MRI复查后,镜下全切率为84.44%(38/45),大部分切除率11.11%(5/45),部分切除率4.44%(2/45);垂体泌乳素(PRL)水平比较,男性患者(t=7.928,P=0.000),女性患者(t=6.983,P=0.000),垂体生长激素(GH)治疗前后比较(t=8.291,P=0.000),生活质量评分比较(t=-10.265,P=0.000),均具有统计学意义(P<0.05)。结论:内镜下经鼻蝶手术治疗复杂性垂体腺瘤,疗效稳定,效果可靠。

增韧基团-姜黄素酯协同二甲双胍对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

目的探讨姜黄素酯协同二甲双胍抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3增殖的影响及其机制。方法细胞免疫组织化学法初步鉴定原代与传代PC-3细胞中CD133、CD44的表达。3种浓度的叔丁氧羰基一苯丙氨酸酯姜黄素单酯（BPC）联合二甲双胍作用于人前列腺癌Pc-3细胞，与单独使用作比较。采用噻唑蓝（MTT）比色法检测上述10组细胞生长活性，流式细胞术检测细胞凋亡和比率。结果原代PC-3细胞CD44、CDl33阳性表达强度（56．5±1．0）％、（50．7±4．0）％明高显于传代Pc-3细胞（23．1±1．1）％、（18．5±2．5）％（P〈0．05）；二甲双胍（5mmol／L）组、不同浓度BPC（10、20、40μmol／L）组、二甲双胍（5mmol／L）联合不同浓度BPC组分别作用原代PC-3细胞24h后细胞生长抑制率分别为（20．3±1．7）％、（15．3±1．1）％～（49．3±2．0）％、（50．9±1．0）％-（68．4±3．2）％；二甲双胍（5mmol／L）、BPC40μmol／L、二甲双胍＋BPC（5mmol／L，40μmol／L）作用于PC-3细胞24h后的细胞凋亡率为（21．02±2．10）％、（28．04±1．40）％、（45．03±2．80）％，联合用药组与相应对照组间细胞抑制率及凋亡率差异有统计学意义（P〈0．05）。二甲双胍（5mmol／L）作用于传代前列腺癌Pc-3细胞24h后细胞增殖抑制率为（4．95±1．20）％，细胞凋亡率为（5．02±1．70）％，较原代细胞抑制率及凋亡率均降低差异有统计学意义（P〈0．05）。结论增韧基团姜黄素酯可与二甲双胍协同抑制激素非依赖性前列腺癌Pc-3细胞的增殖。其协同机制可能为：增韧基团姜黄素酯靶向杀伤前列腺癌PC-3细胞中的癌细胞，而二甲双胍靶向杀伤前列腺癌PC-3细胞中的肿瘤干细胞。

增韧基团——姜黄素酯对前列腺癌细胞体外靶向影响

目的以酯键链接增强基团，制备姜黄素前体，观察其对前列腺癌细胞和正常二倍体细胞生长活性影响的差异。方法叔丁氧羰基（Boc）-苯丙氨酸酯姜黄素单酯作用于17组人前列腺癌DU-145细胞6～24h后，噻唑蓝（MTT）药物敏感实验检测细胞生长活性，流式细胞术检测细胞凋亡和比率，透射电镜观察细胞超微结构改变。1～7d后，采用计数法测定细胞生长曲线。同法作用于人主动脉平滑肌（HASMC）细胞，作为对照组。结果10～40umol／L的Boc-苯丙氨酸酯姜黄素单酯作用于人前列腺癌DU-145细胞6～24h后，DU-145细胞生长抑制率为7．37％～66．87％（P〈0．05），呈浓度、时间依赖性；部分细胞出现凋亡形态学改变，FSC—SSC散点图可见24hDU-145细胞凋亡比率分别为37．84％～47．12％（P〈0．05）。对照组HASMC细胞凋亡比率为0．94％～4．23％（P〈0．05），较同浓度姜黄素降低。结论姜黄素前体化合物能在体外有效诱导入前列腺癌DU-145细胞凋亡，对正常二倍体细胞的抑制作用较低。

人端粒酶逆转录酶基因反义核酸结合位点的筛选

目的筛选人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因的反义核酸结合位点。方法合成20mer随机寡核苷酸文库，与体外转录的全长hTERTcRNA杂交，RNaseH切割后，经引物延伸、放射自显影，筛选出26个反义结合位点（AAS）。结合RNAstructure软件分析，选定具有显著茎环结构的7个位点作为最佳反义结合位点，合成其反义寡核苷酸（AS-ODN），转染前列腺癌细胞PC-3，运用噻唑蓝（MTT）比色及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别对前列腺癌细胞生长抑制及hTERTmRNA表达情况进行检测。结果AS—ODN1—7转染前列腺癌细胞PC-3后，细胞生长受到明显抑制，其中AS-ODN3的抑制作用最明显（40．6±1．0）％，与各组抑制率差异有统计学意义（P〈0．05），hTERTmRNA表达水平亦受到明显抑制，亦以AS—ODN3的抑制作用最明显（35．8±1．2）％，与各组抑制率差异有统计学意义（P〈0．05）。结论筛选hTERT基因AAS并合成AS-ODN能有效封闭目的基因。

后腹腔镜下节段性肾动脉阻断保留肾单位手术的初步结果和体会

目的：探讨后腹腔镜下节段性肾动脉阻断保留肾单位肾部分切除术治疗局限性小肾肿瘤的临床应用价值和初步结果。方法：回顾性总结贵阳医学院附属医院2011年9月-2013年6月采取后腹腔镜下节段性肾动脉阻断保留肾单位肾部分切除术治疗局限性小肾肿瘤患者44例。男26例,女18例,平均年龄50.2岁;平均肿瘤直径（2.8±0.9）cm;肿瘤位于下极25例,中极10例,上极9例;T1a期36例,良性肿瘤8例;肾透明细胞癌23例,乳头状癌7例,嫌色细胞癌6例,肾错构瘤8例。统计患者手术时间（min）、术中出血量（ml）、术后胃肠功能恢复时间（h）、手术并发症发生率（%）、切缘阳性率（%）、总住院时间（d）以及术后6个月术侧肾的肾小球滤过率（eGFR）下降（%）等参数,所有患者随访6-12个月,监测肿瘤复发情况。结果：44例患者手术时间110-192min,平均132min;术中出血40-120ml,平均74ml,无一例输血,无中转;术后胃肠功能恢复时间16.2-23.5h,平均19.3h;手术并发症发生率9.1%（4/44）;住院时间4-9d,平均4.6d;切缘阳性率2.3%（1/44）。患者随访期内无肿瘤复发,术后6个月44例患肾eGFR较术前无明显变化。术后6-12个月7例（7/44,15.9%）患肾eGFR较术前下降13.4-18.5ml/min,平均下降15.2ml/min（P〈0.05）。结论：后腹腔镜下节段性肾动脉阻断保留肾单位肾部分切除术具有创伤小、术中失血量少、胃肠功能恢复快、手术并发症少、住院时间短等优点。少部分患者术后远期患肾肾功能有一定影响,需要进一步观察。该术式是治疗局限性小肾肿瘤的一种安全有效的手术方法。

增韧基团-姜黄素单脂增强对前列腺癌的抑瘤作用

目的 探讨增韧基团-姜黄素单脂（叔丁氧羰基-苯丙氨酸酯姜黄素单酯）较姜黄素更增强对人前列腺癌的体内抑瘤作用的可行性.方法 建立人前列腺癌PC-3可移植性动物模型.裸鼠共40只,选取肿瘤体积接近的36只随机分成3组.A组（注射生理盐水）;B组（注射姜黄素）;C组（注射叔丁氧羰基-苯丙氨酸酯姜黄素单酯）.隔日1次,共15次.用药后24 h处死裸鼠,剥瘤体,称重并计算抑瘤率.对肿瘤组织行苏木素-伊红（HE）染色和原位末端转移酶标记（TUNEL）检测.结果 成功建立人前列腺癌可移植性动物模型.A、B、C组抑瘤率分别为0％、21.76％、55.18％,各组间差异有统计学意义（P＜0.05）.TUNEL检测结果显示,A、B、C组凋亡指数分别为（4.2±1.3）％、（26.6±7.8）％、（49.2±8.6）％,各组间差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 叔丁氧羰基-苯丙氨酸酯姜黄素单酯与姜黄素比较,对人前列腺癌移植瘤有更显著的抑制作用.

缺血再灌注对大鼠肾近曲小管上皮表达CD133和CD34的影响

目的 探讨Wistar大鼠肾缺血再灌注损伤模型对大鼠肾近曲小管上皮表达CD133和CD34抗原细胞的影响及抗原分布,为肾成体干细胞研究提供参考.方法 通过手术夹闭大鼠双侧肾动脉约50 min后再次开放血流,形成肾缺血再灌注损伤模型.术后第3、5、7大取肾脏进行免疫组织化学检测,观察在肾近曲小管上皮细胞中肾损伤因子（KIM）1、CD34、CD133、5-溴2-脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）抗原表达及其阳性表达的该细胞亚群的分布及时间变迁.对照组除不夹闭肾动脉外,其余操作同实验组.结果 与对照组相比,实验组大鼠KIM-1和CD133阳性细胞主要集中在肾皮质,CD34、Brdu阳性细胞主要集中在皮髓质交界处和髓质.术后第3、5、7天,KIM-1及CD133抗原阳性表达强度为先增加再减少（KIM-1为40.3%±3.2%,57.5%±3.8%,24.3%±1.4%;CD133为23.4%±2.2%,34.3%±3.1%,16.6%±1.8%）;CD34抗原为术后逐渐减少（56.0%±4.8%,44.2%±2.2%,28.8%±1.0%）;Brdu抗原为术后逐渐增加（10.0%±1.1%,36.0%±4.2%,48.8%±5.0%）.结论 缺血再灌注损伤之后,肾皮质中表达KIM-1和CD133抗原阳性的细胞明显增多,激发肾髓质中表达CD34抗原和Brdu阳性的细胞明显增多,继发增殖再生.肾髓质区有类似于上皮干/祖细胞抗原CD34和增殖抗原Brdu的细胞存在,提示很可能增殖和分化过程由髓质向皮质迁移,为探索肾成体干细胞研究及肾单位的组织重建可行性研究提供了依据.