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应用CE-LIF方法分析重组人1型单纯疱疹病毒的DNA限制酶酶切片段
被引量:
2
1
作者
李响
胡金盼
+4 位作者
李永红
任挺钧
陈泓序
周勇
饶春明
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第1期37-42,共6页
目的:建立毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)检测方法,对重组人1型单纯疱疹病毒(rHSV-1)的DNA限制性酶切片段进行分析。方法:以rHSV-1为研究对象,用核酸提取仪提取其DNA,以DNA限制性内切酶NdeⅠ酶切,以SYBR^TM Gold nucleic acid作为荧...
目的:建立毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)检测方法,对重组人1型单纯疱疹病毒(rHSV-1)的DNA限制性酶切片段进行分析。方法:以rHSV-1为研究对象,用核酸提取仪提取其DNA,以DNA限制性内切酶NdeⅠ酶切,以SYBR^TM Gold nucleic acid作为荧光标记物,利用CE-LIF实现分离检测,通过DNA ladder计算片段大小。CE-LIF条件:采用涂层毛细管(有效长度30 cm,总长度40 cm,内径100μm),3.45 kPa压力进样3 s;毛细管分离温度设为25℃,毛细管分离电压为-7 kV,分离时间40 min;LIF检测器的激发波长及发射波长分别为488 nm和520 nm。结果:新建方法可以对8个目标酶切片段分离检测,各片段峰迁移时间的RSD(n=6)均小于0.35%,片段峰1~7校正峰面积百分比的RSD(n=6)均小于5.6%,方法精密度良好。通过DNA ladder回归方程,对DNA酶切产物进行片段大小的计算,各片段大小计算结果RSD(n=6)均小于5.8%,且与琼脂糖凝胶电泳法测得结果相一致。结论:本研究建立的rHSV-1的DNA限制酶酶切片段CELIF分析法自动化程度高,灵敏度高,重复性好,试剂消耗及环境污染小,适用于rHSV-1的鉴别分析。
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关键词
重组人1型单纯疱疹病毒
DNA限制酶酶切
荧光标记
激光诱导荧光检测
毛细管电泳
原文传递
毛细管电泳-电容耦合非接触电导检测法对运动员营养补剂中人体必需支链氨基酸的检测
被引量:
8
2
作者
任挺钧
邱俊
徐中其
《分析试验室》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期693-696,共4页
建立了运动员营养补剂中3种人体必需支链氨基酸(缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸)的毛细管电泳-电容耦合非接触电导检测(CE-C4D)测定方法。通过研究电泳时背景电解质种类、浓度以及电导检测器的激发电压,激发频率等参数的影响,确定最佳的实验...
建立了运动员营养补剂中3种人体必需支链氨基酸(缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸)的毛细管电泳-电容耦合非接触电导检测(CE-C4D)测定方法。通过研究电泳时背景电解质种类、浓度以及电导检测器的激发电压,激发频率等参数的影响,确定最佳的实验条件为采用未涂层熔融石英毛细管(60 cm×75μm,有效长度50 cm),以5.0 mol/L的乙酸为背景电解质;C4D检测器激发电压为40 V,激发频率为600 kHz;运行电压为+15 kV,温度为25℃。3种氨基酸在50.0~1000.0μmol/L范围内线性关系良好,线性相关系数(R2)均大于0.9994,加标回收率在98.6%~105.4%之间,方法的检出限为14.88μmol/L。方法已应用于运动员蛋白营养补剂中的支链氨基酸的测定。
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关键词
支链氨基酸
毛细管电泳
电容耦合非接触电导检测
原文传递
题名
应用CE-LIF方法分析重组人1型单纯疱疹病毒的DNA限制酶酶切片段
被引量:
2
1
作者
李响
胡金盼
李永红
任挺钧
陈泓序
周勇
饶春明
机构
中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室
CE&Biopharma Sciex
出处
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第1期37-42,共6页
基金
国家科技重大专项课题资助项目(2018ZX09733002-005).
文摘
目的:建立毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)检测方法,对重组人1型单纯疱疹病毒(rHSV-1)的DNA限制性酶切片段进行分析。方法:以rHSV-1为研究对象,用核酸提取仪提取其DNA,以DNA限制性内切酶NdeⅠ酶切,以SYBR^TM Gold nucleic acid作为荧光标记物,利用CE-LIF实现分离检测,通过DNA ladder计算片段大小。CE-LIF条件:采用涂层毛细管(有效长度30 cm,总长度40 cm,内径100μm),3.45 kPa压力进样3 s;毛细管分离温度设为25℃,毛细管分离电压为-7 kV,分离时间40 min;LIF检测器的激发波长及发射波长分别为488 nm和520 nm。结果:新建方法可以对8个目标酶切片段分离检测,各片段峰迁移时间的RSD(n=6)均小于0.35%,片段峰1~7校正峰面积百分比的RSD(n=6)均小于5.6%,方法精密度良好。通过DNA ladder回归方程,对DNA酶切产物进行片段大小的计算,各片段大小计算结果RSD(n=6)均小于5.8%,且与琼脂糖凝胶电泳法测得结果相一致。结论:本研究建立的rHSV-1的DNA限制酶酶切片段CELIF分析法自动化程度高,灵敏度高,重复性好,试剂消耗及环境污染小,适用于rHSV-1的鉴别分析。
关键词
重组人1型单纯疱疹病毒
DNA限制酶酶切
荧光标记
激光诱导荧光检测
毛细管电泳
Keywords
rHSV-1
DNA restriction enzyme digestion
fluorescent labeling
laser-induced fluorescence detection
capillary electrophoresis
分类号
R450 [医药卫生—治疗学]
原文传递
题名
毛细管电泳-电容耦合非接触电导检测法对运动员营养补剂中人体必需支链氨基酸的检测
被引量:
8
2
作者
任挺钧
邱俊
徐中其
机构
东华大学化学化工与生物工程学院
上海体育科学研究所
出处
《分析试验室》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期693-696,共4页
基金
上海市体育局2014年科技综合计划项目(14ZH024)资助
文摘
建立了运动员营养补剂中3种人体必需支链氨基酸(缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸)的毛细管电泳-电容耦合非接触电导检测(CE-C4D)测定方法。通过研究电泳时背景电解质种类、浓度以及电导检测器的激发电压,激发频率等参数的影响,确定最佳的实验条件为采用未涂层熔融石英毛细管(60 cm×75μm,有效长度50 cm),以5.0 mol/L的乙酸为背景电解质;C4D检测器激发电压为40 V,激发频率为600 kHz;运行电压为+15 kV,温度为25℃。3种氨基酸在50.0~1000.0μmol/L范围内线性关系良好,线性相关系数(R2)均大于0.9994,加标回收率在98.6%~105.4%之间,方法的检出限为14.88μmol/L。方法已应用于运动员蛋白营养补剂中的支链氨基酸的测定。
关键词
支链氨基酸
毛细管电泳
电容耦合非接触电导检测
Keywords
Branched chain amino acids
Capillary electrophoresis
Capacitively coupled contactless conductivity detection
分类号
TS201.6 [轻工技术与工程—食品科学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用CE-LIF方法分析重组人1型单纯疱疹病毒的DNA限制酶酶切片段
李响
胡金盼
李永红
任挺钧
陈泓序
周勇
饶春明
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020
2
原文传递
2
毛细管电泳-电容耦合非接触电导检测法对运动员营养补剂中人体必需支链氨基酸的检测
任挺钧
邱俊
徐中其
《分析试验室》
CAS
CSCD
北大核心
2017
8
原文传递
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