稳定表达牛催乳素基因的小鼠乳腺上皮细胞系的建立

在乳腺上皮细胞体外培养时,为了使其状态接近泌乳期,需要在培养基中添加催乳素.由于催乳素价格昂贵,使得乳腺上皮细胞的体外培养成本颇高.建立在体外培养过程中不需要添加催乳素蛋白的乳腺上皮细胞系,能为在细胞水平研究乳腺细胞相关基因提供诸多方便.利用慢病毒载体的整合特性,建立稳定整合了牛催乳素cDNA(bPRL)表达盒的小鼠乳腺上皮细胞系(HC11细胞系).经10代次以上的传代以后,通过定量PCR检测,证明平均每个细胞中含有2.6个外源的bPRL基因,其表达量为HC11细胞中管家基因β-肌动蛋白(β-actin)表达量的14%左右.另外,先前的研究结果表明催乳素能在HC11和泌乳期的小鼠乳腺上皮组织中有效促进山羊β-酪蛋白启动子启动外源基因的表达.之后的实验证实整合了催乳素基因的HC11细胞(bPRL-HC11细胞系)也有此功能.因此,bPRL-HC11细胞系可以为体外研究乳腺生物反应器提供良好的细胞模型.

肺部超声在术后肺部并发症检测中的应用进展

随着医学技术水平的提高术后并发症随之减少,但肺部并发症仍较常见,由其见于行胸腹部等大手术患者。术后肺部并发症因影响患者术后早期康复、甚至成为术后死亡的常见原因受到临床医生的重视,但术后肺部并发症的早期诊断、干预一直存在着困难。近年来超声作为一项可视化的检查技术因其具有无创、无辐射、方便等优点快速发展,受到人们性的广泛接受。肺部超声对肺不张、肺炎、气胸及肺水肿等疾病都具有较高的准确性,为临床上术后肺部并发症提供了方便、准确的诊断方法。

不同启动子引导的人凝血因子Ⅷ基因载体在HC11细胞和小鼠乳腺中表达的研究

目的应用山羊β-酪蛋白基因启动子（P1A3），构建真核细胞表达人凝血因子Ⅷ（humancoagu—lationfactorⅧ，hFⅧ）全长cDNA载体（pcDNA3．1．P1A3-hFⅧ）和hFⅧB区缺失（humancoagulationfactorⅧB—domain．deleted，hFVⅧBD）的cDNA载体（pcDNA3．1-P1A3-hFⅧBD），研究它们在乳腺细胞中的表达情况，同时与巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）启动子引导的相应的hFⅧ载体进行比较。方法采用常规DNA分子克隆技术构建人凝血因子Ⅷ（hFⅧ）基因载体，转染小鼠乳腺上皮细胞（HC-11），应用RT—PCR以及real—timePCR技术检测hFⅧ基因转录本；对NSL期母鼠乳腺注射DNA载体后，采集试验母鼠乳汁，应用ELISA检测乳腺细胞分泌hFⅧ蛋白的瞬时表达水平。结果应用构建的CMV启动子和P1A3启动子指导的hFⅧ基因载体转染HC-11细胞后，在mRNA水平均有表达；瞬时转染哺乳期母鼠的乳汁检测表明，转染CMV和P1A3启动子的hFⅧ载体的母鼠，乳汁中的hFⅧ蛋白表达量分别为2．81μg／ml（CMV—hFⅧBD），2．01μg/ml（CMV—hFⅧ），1．82μg／ml（P1A3-hFⅧBD），1．20μg／ml（P1A3．hFⅧ）。结论构建的乳腺特异性表达hFⅧ基因的载体，转染HC-11细胞和乳腺组织后的mRNA及蛋白表达水平均证实了该载体的有效性：CMV启动子引导的hFⅧ载体表达虽稍高于P1A3启动子载体，但由于后者具有乳腺特异表达的特点，更适用于乳腺生物反应器。我们构建hFⅧ基因的载体的经验，为乳腺生物反应器的研制提供了有价值的科学依据。