自体骨髓间叶干细胞诱导分化移植重建窦房结起搏功能的实验研究

目的 :探索应用骨髓干细胞治疗病态窦房结综合征的生物介入方法。 方法 :选取犬 6只 ,随机分为实验组和对照组 ,每组 3只。抽取犬自体骨髓 ,分离培养扩增骨髓间叶干细胞 ,并在体外应用 5 氮胞苷进行诱导分化。应用射频技术损伤犬窦房结 ,建立动物病态窦房结综合征模型。将溴脱氧尿嘧啶核苷 (BrdU)标记的且诱导分化的骨髓间叶干细胞自体移植到窦房结区 ,应用心电图、组织病理、免疫组化等技术观察干细胞移植治疗效果。 结果 :在动物病态窦房结综合征模型 ,自体移植骨髓干细胞后 ,心电图示窦房结功能明显改善 ;病理与免疫组化示移植的骨髓干细胞在窦房结区分化为拟窦房结细胞与血管内皮细胞 ,并与宿主细胞建立缝隙连接。 结论 :自体移植诱导分化的骨髓间叶干细胞可改善窦房结自律起搏功能。

β辐射致大鼠血管平滑肌细胞凋亡的研究

目的 观察放射性核素188Re辐射对平滑肌细胞凋亡的影响及其机制 ,探讨辐射所致平滑肌细胞凋亡在预防再狭窄中的作用。方法 应用188Re进行培养平滑肌细胞的内辐射。通过台盼蓝染色计数、流式细胞术、JAM法DNA碎裂量测定、透射电镜及免疫细胞化学检测等方法 ,研究辐射后平滑肌细胞的存活率、细胞凋亡率、DNA断裂量、细胞超微结构改变及相关基因表达。结果 放射性浓度 <2 .96GBq/L辐射 ,平滑肌细胞存活率、细胞凋亡率、DNA断裂量及细胞超微结构等未发生明显改变 ;高剂量辐射下 (放射性浓度 >2 .96GBq/L) ,平滑肌细胞存活率显著下降 ,细胞凋亡率明显上升 ,细胞DNA断裂量增加 ,细胞超微结构明显破坏。辐射诱导细胞凋亡过程中 ,p5 3、bax表达上调 ,而bcl 2 /bax比值下调。结论 能够明显抑制平滑肌细胞增殖的低剂量辐射对细胞存活及细胞凋亡无明显影响 ,未见细胞超微结构改变及DNA的严重破坏 ;吸收剂量大于 2 0Gy可导致平滑肌细胞大量凋亡 ;相关基因p5 3、bcl 2及bax参与调控辐射诱导细胞凋亡过程。低剂量及低剂量率辐射既能有效抑制细胞增殖 ,又不明显损伤细胞存活 ,是临床血管内放射治疗预防再狭窄的理想方法。

长期右室心尖部起搏对心室重构及心功能的影响

目的观察长期右室心尖部起搏对临床、心室重构和心功能的影响,为起搏电极植入部位提供参考。方法入选更换起搏器的住院患者和门诊复诊的起搏器患者。病因为高度和Ⅲ度房室传导阻滞;安装时无严重基础心脏病和心脏扩大,心功能正常,安装起搏器到随访时间大于5年,起搏比率>80%。比较起搏器置入前后心脏超声参数、心功能和临床状况等指标。结果研究共入选82例。两次评估相隔的平均时间是8.7年(104.4个月)。植入起搏器后左房内径增大,左室射血分数降低(P均<0.001),而左室舒张末内径无明显改变。有4例(占4.87%)出现了心室重构且伴有心功能分级恶化,其中3例为植入起搏器后发生前壁心肌梗死,1例为2型糖尿病。未发生心室重构的患者均没有临床心力衰竭症状。结论心脏结构及心功能正常患者长期右室心尖部起搏,一般不会发生心室重构及临床心功能恶化。

犬骨髓间叶干细胞体外定向诱导分化心肌细胞的实验研究

目的 :旨在建立骨髓间叶干细胞 (MSCs)体外定向诱导分化心肌细胞的方法 ,为心肌疾患的移值修复治疗提供成体干细胞来源。方法 :利用Percoll密度梯度法及MSCs黏附贴壁生长特性进行分离培养与扩增骨髓MSCs ,并予以鉴定证实。应用5 氮胞苷对培养早期的骨髓MSCs进行定向诱导分化心肌细胞。通过细胞形态学、细胞免疫组化、透射电镜等技术观察分化细胞的肌管 ,心肌细胞特异性蛋白与细胞特异性超微结构以鉴定诱导分化的效果。结果 :利用Percoll密度梯度法与细胞黏附贴壁生长特性 ,可分离培养与扩增足量骨髓MSCs。应用化学诱导剂 5 氮胞苷 10～ 2 0 μmol/L孵育早期培养的骨髓MSCs 4～ 5周 ,可见细胞形成肌管 ;肌细胞特异性蛋白α 肌动蛋白 ,肌球蛋白以及心肌细胞特异性分子标志肌钙蛋白I免疫组化染色阳性 ;透射电镜可见肌丝与房性颗粒。结论 :骨髓MSCs可在体外 5 氮胞苷的诱导下定向转化为具有典型结构的心肌细胞。

^(188)Re灌注球囊照射预防兔血管再狭窄

目的 观察188Re灌注球囊血管内照射对兔血管损伤后再狭窄的预防作用。方法 应用球囊过度扩张损伤兔双侧髂动脉 ,随机选择一侧髂动脉进行188Re灌注球囊血管内局部照射 ,对受照射血管进行血管造影、组织病理学检查及增殖细胞核抗原 (PCNA)染色分析。结果 与非照射组血管比较 ,照射组血管直径较大 [( 1 .94± 0 .1 9)vs ( 1 .77± 0 .2 8)mm ,P <0 .0 5],新生内膜面积减少[( 1 .1 2± 0 .75)vs ( 2 .1 7± 1 .2 1 )mm2 ,P <0 .0 1 ],狭窄面积百分比降低 [( 1 9.2 3± 1 2 .6 0 ) %vs ( 34.4 5±1 7.4 9) % ,P <0 .0 1 ],PCNA阳性率低 [( 3.75± 2 .0 9) %vs ( 5.6 4± 1 .74 ) % ,P <0 .0 5]。 0 .5mm深处组织吸收剂量为 1 5Gy。结论 188Re灌注球囊血管内照射能够抑制兔损伤血管再狭窄。

自体骨髓间叶干细胞诱导分化移植治疗房室阻滞的初步观察

利用诱导分化的骨髓间叶干细胞自体移植治疗房室阻滞，探讨生物介入方法治疗缓慢型心律失常的新途径。11只实验犬随机分为实验组(n=6)和对照组(n=5)。应用射频技术消融His束，制备永久Ⅲ度房室阻滞动物模型；每只犬抽取10ml犬骨髓液，应用密度梯度离心法及贴壁培养法分离、培养和扩增骨髓间叶干细胞，5=氮胞苷对骨髓间叶干细胞进行诱导分化；房室阻滞4周后，开胸心脏直视下将BrdU标记的分化干细胞(1ml，1．5×10^7细胞)多点注射至该犬消融的His束部位，而对照组仅将1ml DMEM培养液替代干细胞悬液多点注射至相同部位。术后1—12周，应用心电图观察两组活体动物房室功能恢复情况，应用组织病理、免疫组化等技术对移植干细胞的存活、增殖、分化与缝隙连接功能进行评价。结果：在动物房室阻滞模型中，实验组犬在自体骨髓干细胞移植后12周，2／6只犬的房室传导功能得以改善；病理与免疫组化示诱导分化的骨髓干细胞在His束区存活、增殖和分化为心肌细胞、血管内皮细胞，并与宿主细胞建立缝隙连接；而对照组5只犬未见上述变化。结论：自体移植诱导分化的骨髓间叶干细胞有可能改善His束传导功能。

骨髓是各种组织器官再生修复的共同干细胞库

再生成年组织细胞的干细胞来源存在争论.成人组织干细胞的"跨系分化"或"可塑性"受到质疑.目前认为骨髓是储存各种原始组织干细胞的仓库:骨髓干细胞在各种细胞因子的作用下,不断通过毛细血管网进入各种组织,并在局部组织分化为原始组织干细胞;原始组织干细胞再生增殖组织特异性细胞以补充衰老损伤的细胞.由于骨髓干细胞能够自我更新,容易从骨髓及外周血获取,故对组织再生修复有着令人鼓舞的临床应用潜力.

低剂量放射性支架抑制血管内膜增生的实验研究

目的 探讨放射性支架抑制血管内膜增生的可行性。方法 使用回旋中子加速器轰击不锈钢支架 ,使其产生并载带放射性核素59Fe、60 Co、58Co、57Co、51 Cr、54 Mn。将放射性支架植于兔髂动脉。应用血管造影、组织病理学及免疫组织化学分析观察放射性支架预防再狭窄的疗效。结果 血管造影示髂动脉通畅 ,未见辐射相关并发症 ;放射性支架组较非放射性支架组血管新生内膜面积明显减少 [(0 .37± 0 .14)和 (0 .81± 0 .10 )mm2 ,P <0 .0 1],狭窄面积百分比明显降低 [(6 .70± 2 .91) %和 (13.15± 1.40 ) % ,P <0 .0 1],平滑肌细胞增殖细胞核抗原 (PCNA)阳性率显著下降 [(2 .0 0± 1.5 8) %和 (10 .88± 6 .98) % ,P <0 0 5 ]。结论 放射性支架可抑制血管内膜增生 ,在兔损伤血管内放置可行。

^(188)铼辐射抑制血管平滑肌细胞增殖研究

目的 :探讨放射性核素188铼 ( 188Re)对培养平滑肌细胞增殖的作用及其机制。方法 :应用188Reβ射线进行培养平滑肌细胞的内辐射。通过细胞计数、再增殖试验、[3H]-TdR掺入试验、流式细胞术细胞周期分析、免疫细胞化学及细胞存活率检测等方法 ,观察辐射抑制平滑肌细胞增殖的有效及最佳剂量、有效抑制时间、细胞增殖率变化、细胞周期分布、细胞存活率及其相关基因表达。结果 :5 2Gy剂量辐射 ,5 0 %以上平滑肌细胞增殖受抑 ,细胞增殖率为 4 6% ;2 0 6Gy剂量辐射 ,DNA合成抑制率达 92 % ,增殖期细胞占 3 % ;辐射后 2周未见细胞再增殖 ;<2 0 6Gy辐射未见细胞存活力下降 ;辐射后P5 3表达升高 ,PCNA表达降低。结论 :188Reβ辐射对平滑肌细胞增殖抑制有效且持久 ,半数有效剂量为 5Gy ,最佳辐射剂量为 2 0Gy。低剂量辐射抑制平滑肌细胞增殖的主要机制为损伤细胞分裂增殖能力。P5 3及PCNA调控辐射抑制细胞增殖过程。

应用脉冲多普勒无创法估测冠心病左室舒张功能

本文应用脉冲多普勒超声心动图,通过测定二尖瓣口血流频谱变化,无创法估测冠心病左室舒张功能。试验结果表明:反映左室舒张功能的二尖瓣口血流速度、面积积分及舒张时间间期参数,在正常人和冠心病患者之间差异显著。因此,本方法为估测冠心病左室舒张功能提供了一简便有效的无创手段。

细胞移植和转基因治疗病态窦房结综合征

应用5-胞苷等化学诱导剂能够定向诱导骨髓间叶干细胞分化为具有收缩与传导功能的心肌细胞,将诱导干细胞移植心肌内可发挥自律起搏功能。特异性抑制Kir2通道能够使静态心室肌细胞转变为具有自律起搏活性的类窦房结细胞。在骨髓干细胞内定位转染Kir2.1AAA基因能够使干细胞发育为具有起搏功能的窦房结细胞,从而建立生物起搏点,以达到治疗目的。

心脏起搏与心包填塞

经静脉植入心脏起搏器是一普通且安全的手术,其并发症发生率很低.常见的并发症包括感染、血气胸、导线断裂、移位、三尖瓣损伤、静脉血栓形成、心包炎、心脏穿孔等[1].起搏导线所致心脏穿孔是较为罕见的并发症,即使出现心脏穿孔,其主要表现仅是起搏障碍而不是心包填塞.心包填塞是更为罕见却威胁生命的并发症,早期识别与积极处理能够减少致命并发症的发生.

起搏器置入与心包压塞

起搏器置入所致心包压塞的发生率为 0 .0 5 %～ 0 .1%。心房心肌穿孔的几率大于心室。螺旋电极导线、双极导线、冠状窦电极、存在基础心脏病、有心脏手术史、高龄女性等为心包压塞的危险因素。超声是诊断心包压塞的主要手段。多数患者行心包穿刺术可以解除心脏压迫症状 ,少数需行外科手术治疗。

电离辐射与细胞凋亡

电离辐射所致细胞死亡的主要形式为细胞凋亡。细胞凋亡的基因调控机制精密而复杂 ,P53、bcl- 2家族、Fas系统、c- myc、P34 cdc2、caspases等均参与辐射性细胞凋亡的调控。细胞凋亡是细胞内一系列凋亡蛋白酶激活的级联反应和细胞表面死亡接受外部信号调节的结果。辐射性细胞凋亡的滞后期因细胞种类而异 ,线性能量传递 ( L ET)

脉冲多普勒评价年龄与左、右心室舒张功能的关系

本文应用脉冲多普勒超声心动图,测定正常人各年龄组及心脏病患者的左、右心室舒张功能参数。试验结果表明:正常人年龄与左、右室舒张功能参数相关性良好,左、右心室舒张功能随年龄的增加而逐渐减退,但年龄与疾病状态下的左、右室舒张功能参数不相关。

犬骨髓间叶干细胞的多向分化潜力

目的观察犬骨髓间叶干细胞的体外多向分化潜力,为损伤组织的干细胞移植修复提供理论基础。方法利用梯度-贴壁筛选法分离、培养与扩增骨髓间叶干细胞。利用化学诱导剂5-氮胞苷(20滋mol/L),血管内皮细胞生长因子(VEGF10ng/ml),成骨细胞诱导剂(地塞米松10nMol/L,抗坏血酸0.05mMol,茁甘油磷酸钠10mMol/L)以及成脂肪细胞诱导剂(1-甲基3-异丁基黄嘌呤0.5mmol/L,地塞米松1滋mol/L,胰岛素10mg/L,消炎痛100mmol/L),分别定向诱导骨髓间叶干细胞分化为心肌细胞、血管内皮细胞、成骨细胞与脂肪细胞。再应用细胞形态观察、免疫细胞化学染色及电镜对分化细胞进行鉴定。结果利用梯度-贴壁筛选法可以分离培养与扩增骨髓间叶干细胞。5-氮胞苷可诱导干细胞呈现肌管、肌丝、心房颗粒,且肌细胞特异性蛋白琢-actinin,Myosin,琢-Actin,TroponinI免疫染色阳性;VEGF可诱导骨髓间叶干细胞出现管网状、血管样及鹅卵石样结构,vWF免疫染色阳性;成骨细胞诱导剂可诱导分化细胞碱性磷酸酶阳性;成脂肪细胞诱导剂使分化细胞内出现脂肪滴,油红O染色示脂滴为橙红色。结论成年犬骨髓间叶干细胞在体外具备多向分化潜力。在化学或生物诱导剂的作用下,犬骨髓间叶干细胞能够定向分化为心肌细胞、血管内皮细胞、成骨细胞、脂肪细胞等多种间叶组织?

犬骨髓成年多能祖细胞诱导分化血管内皮细胞的实验研究

目的 内皮细胞移植对损伤组织的修复治疗至关重要 ,本研究旨在探讨骨髓成年多能干细胞(MAPCs)体内外诱导分化血管内皮细胞的可行性。方法 采用Percoll密度梯度法分离培养MAPCs。应用 10ng ml血管内皮细胞生长因子 (VEGF)对骨髓MAPCs进行体外诱导分化 2～ 3周 ,使其定向分化成为血管内皮细胞。采用细胞形态学、细胞免疫组化以确定诱导分化的效果。将标记BrdU的MAPCs自体移植于犬心肌内 ,观察局部微环境对于骨髓MAPCs的分化能力。结果 应用 10ng mlVEGF孵育骨髓MAPCs 2～ 3周 ,可见MAPCs分化为血管内皮细胞 :细胞形态呈鹅卵石样 ;形成血管样结构 ;细胞vWF免疫染色阳性。移植于心肌内的MAPCs在体内形成新生血管 ,血管内皮BrdU染色与vWF染色均阳性。结论 骨髓MAPCs可在体外VEGF诱导下或在体内微环境作用下分化为成熟血管内皮细胞。骨髓MAPCs可为损伤组织的移植修复治疗提供内皮细胞资源。

放射性核素支架预防血管成形术后再狭窄

将放射性核素离子包埋于支架，制作放射性核素支架，它既能发挥抗再狭窄的机械性作用，又能通过核素的电离辐射作用抑制再狭窄过程中的内膜增生。动物模型研究结果表明，核素支架抗再狭窄效果显著，安全可靠，具有较好的优越性及合理性。初步临床研究结果令人鼓舞。

细菌自动鉴定仪3例布鲁氏菌误鉴定及文献复习

目的探讨VITEK2 Compact微生物自动鉴定仪对布鲁氏菌误鉴定的原因及局限性。方法 2例无明显诱因发热患者血培养分离菌株,1例左胫骨病变患者骨髓培养分离株。采用VITEK2 Compact细菌鉴定系统、形态学、传统手工生化方法对分离株进行鉴定。采用PCR扩增16S rRNA基因并测序,对所测得的核酸序列进行同源性比对分析。结果 3株缓慢生长的革兰阴性短小杆菌,使用VITEK2 Compact鉴定仪GN鉴定卡首次鉴定为支气管败血鲍特菌(1例)及人苍白杆菌(2例)。基于16S rRNA基因序列分析表明,菌株与马耳他布鲁菌或人苍白杆菌核酸匹配度高达100%,完全排除支气管败血鲍特菌的可能,结合动力试验阴性,排除人苍白杆菌的可能。将保存的菌株用VITEK2 Compact鉴定仪GN鉴定卡复检,结果为马耳他布鲁氏菌。复习文献,发现使用一些商业的细菌鉴定系统产生布鲁氏菌被错误鉴定的案例时有发生。布鲁氏菌可被误鉴定为苯丙酮酸莫拉菌(以前为苯丙酮酸冷杆菌)或解脲寡源杆菌(API20NE系统,法国生物梅里埃,Marcy-I′Etoile,France,人苍白杆菌(API20NE系统,快速NF Plus系统,Innovative Diagnostic Systems Inc.,Atlanta,USA),流感嗜血杆菌生物IV型,莫拉菌属(MicroScan panels Siemens Healthcare Diagnostics Inc.,West Sacramento,CA,USA),动物溃疡伯格菌(MicroScan Walk-Away system using MicroScan NegCombo Type44panel)。结论 16SrRNA基因序分析是鉴定临床缓慢生长的革兰阴性杆菌的有效手段,微生物自动鉴定仪鉴定缓慢生长细菌(如布鲁氏菌)有明显局限性,对布鲁氏菌病等传染病的临床治疗及流行病学调查可产生误导。建议细菌鉴定系统生产厂家应该完善其数据库中专家系统,当细菌鉴定系统报告为人苍白杆菌、解脲寡源杆菌、苯丙酮酸莫拉菌、支气管败血鲍特菌、动物溃疡伯格菌、莫拉菌属或流感嗜血杆菌生物IV型等少见菌种时,应该在鉴定仪器专家系统中提示需与布鲁氏菌鉴别,有效预防布鲁氏菌引起的实验室获得性感染。有关上述非常见菌感染的文章中若仅有常规细菌鉴定而无分子生物学鉴定的案例,建议慎重报道。