维生素C对体外培养的H_9C_2心肌细胞系的影响

目的:探讨维生素C对大鼠H_9C_2心肌细胞抗氧化能力与细胞活力的影响。方法:以体外培养的大鼠H_9C_2心肌细胞为研究对象,在培养过程中,分别加入不同浓度的维生素C,观察细胞形态,MTT法检测心肌细胞活力,DCFH-DA荧光探针法测定维生素C对H_2O_2处理的心肌细胞活性氧(ROS)生成的影响,用比色法检测半胱天冬酶(caspase)-3和caspase-9活性。结果:0.05 mg/mL维生素C处理后,H_9C_2心肌细胞形态发生变化,细胞质中颗粒状物质增多,排列紊乱,间隙增宽;0.05 mg/mL维生素C可有效抑制H_2O_2导致的ROS积累;但随着培养基中维生素C浓度的升高,心肌细胞存活率明显降低,且维生素C处理后caspase-3和caspase-9活性明显升高。结论:H_9C_2心肌细胞培养中添加维生素C可产生明显的抗氧化作用,但维生素C对H_9C_2心肌细胞生长具有抑制作用。

间接言语行为与日语疑问句的功能

塞尔的间接言语行为理论的提出 ,为解释言语交际中句子形式和功能间的不一致现象提供了强有力的理论依据 ,为我们动态而全面地把握语句的功能提供了一个崭新的切入口。从间接言语行为理论的角度 ,可将日语疑问句的功能分为以下几类 :陈述性功能、指令性功能、言明性功能及表态性功能。

生物信息学分析人C型凝集素16A的结构与功能

C型凝集素16 A基因(C-type lectin domain family 16A,Clec16a)是糖尿病、多发性硬化病等自身免疫性疾病的易感基因,但针对该基因功能的研究报道很少.通过生物信息学相关数据库和在线软件对CLEC16A蛋白分子的理化性质,亚细胞定位,跨膜区和信号肽,二级结构,结构域,磷酸化、泛素化、糖基化等蛋白翻译后修饰,以及蛋白相互作用网络等进行分析.结果表明,人Clec16a基因的共识编码序列为1053个氨基酸组成的多肽,是酸性不稳定的亲水蛋白,无跨膜区和信号肽,定位于多个亚细胞结构,其主要二级结构元件为α螺旋和随机卷曲,无已知的功能性结构域,存在磷酸化、泛素化、糖基化修饰位点.为深入研究CLEC16A功能及其参与的疾病分子机制提供一定的参考.

心肌桥粒盘状球蛋白JUP的生物信息学分析

目的:对Jup基因及其蛋白进行生物信息学分析,为研究Jup基因功能及其在心肌病形成和发展中的作用提供一定的理论基础。方法:运用生物信息学相关数据库和软件对Jup基因的结构、单核苷酸多态性、JUP蛋白分子的理化性质、二级结构、序列保守性、蛋白质相互作用网络进行分析。结果:人Jup基因编码区存在11个SNPs位点。Jup基因编码745个氨基酸组成的多肽,属亲水蛋白,稳定性不高,其主要二级结构元件为α-螺旋,进化中高度保守,属于ARM超家族。与JUP存在相互作用的基因和蛋白主要是桥粒组成成分与经典钙粘素信号途径组分。结论:Jup基因突变和JUP蛋白表达量的改变可引起相关的心肌病,本文对Jup基因及其蛋白进行系统的生物信息学分析,为进一步实验研究其在心肌病的形成和发展的调控机制奠定基础。

心脏肌球蛋白结合蛋白C的生物信息学分析

MYBPC3基因突变是家族性肥厚型心肌病的原因之一。本文对心脏肌球蛋白结合蛋白C基因(cardic myosin binding protein C,MYBPC3)及其编码蛋白(c My BP-C)进行生物信息学分析。运用生物信息学相关数据库和在线生物学软件分析MYBPC3基因的结构与突变位点,对c My BP-C蛋白分子物种间的序列同源性、蛋白质空间结构、理化性质、组织特异性、蛋白质翻译后修饰、蛋白质相互作用网络进行分析。结果表明人MYBPC3基因mRNA全长为4 217 bp,编码区为3 825 bp,MYBPC3基因编码1 274个氨基酸组成的多肽,与物种进化程度一致,属于免疫球蛋白超家族,是酸性亲水蛋白,稳定性不高,其主要二级结构元件为随机卷曲。与c My BP-C存在相互作用的基因和蛋白主要是磷酸激酶与肌小节组成成分。本文对MYBPC3基因进行生物信息学分析,为深入研究MYBPC3基因的分子功能以及靶向治疗遗传性心肌病提供一定的依据。

临床专业硕士生担任生物化学实验课助教的探索

针对硕士生协助教师完成生物化学预实验和实验教学过程中存在的问题,提出更有效地指导硕士生开展实验助教工作的任务式教学法(TBL),为提升临床专业硕士生的实践能力积累经验,也为地方性普通医学高校开展硕士生助教工作提供一定的参考。

细胞自噬在糖尿病性心肌病中的研究进展

细胞自噬是受多基因调控的动态过程。自噬可通过控制蛋白质质量,维持心肌细胞的能量平衡与存活,心肌细胞自噬水平异常降低或升高都会导致心肌损伤。不同情况下自噬在糖尿病性心肌病损伤中作用不同。1型糖尿病动物模型中心肌自噬水平降低,对心肌细胞起保护作用;2型糖尿病动物模型中自噬被激活。该文就自噬在糖尿病心肌病中的研究进展作简要介绍。

Bacillus sp.L1胞外蛋白酶EL1基因克隆及酶学性质分析

目的:对菌株Bacillus sp. L1分泌的胞外蛋白酶EL1进行分离纯化、基因克隆及酶学性质研究。方法:利用硫酸铵沉淀、阴离子交换层析从菌株Bacillus sp. L1的发酵液中分离纯化出胞外酶EL1,对其进行了质谱分析、基因克隆及酶学性质研究。结果:质谱结果提示EL1属于丝氨酸蛋白酶,该酶基因开放阅读框为1326 bp,蛋白序列共441个氨基酸,氨基酸序列与菌株Bacillus stratosphericus分泌的丝氨酸蛋白酶(WP007499449)同源性最高(98%)。该酶最适温度60℃,具有较好的热稳定性;最适pH8.0,在pH8.0时稳定性较好;Mn2+对其有一定的激活作用,Cu2+对其有一定的抑制作用。结论:Bacillus sp. L1分泌的胞外蛋白酶EL1具有较好的热稳定性,在碱溶液中可以保持较高的活力,具有潜在的工业应用价值。

Tempol对过氧化氢致RAW264.7巨噬细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究4-羟基-2,2,6,6-四甲基哌啶(Tempol)对过氧化氢(H_2O_2)引起的RAW264.7巨噬细胞氧化损伤的影响。方法:建立H_2O_2诱导的RAW264.7巨噬细胞氧化损伤模型,分为空白对照组、H_2O_2损伤组(0.2 mmol/L H_2O_2)、低剂量Tempol组(0.2 mmol/L H_2O_2+0.4 mmol/L Tempol)和高剂量Tempol组(0.2 mmol/L H_2O_2+0.8mmol/L Tempol),测定每组细胞培养上清液中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果:与空白对照组相比,H_2O_2损伤组培养上清中MDA含量和LDH活性显著升高,SOD活性显著降低(P均<0.05)。与H_2O_2损伤组相比,低剂量Tempol组与高剂量Tempol组细胞培养上清中MDA的含量[(7.27±0.35)nmol/mL和(7.27±0.26)nmol/mL对(9.55±0.31)nmol/mL,P均<0.05]和LDH的活性[(509.36±38.73)U/L和(492.81±40.36)U/L对(706.24±48.46)U/L,P均<0.05]均显著降低,而SOD的活性[(24.84±0.54)U/mL和(24.84±0.28)U/mL对(21.16±0.61)U/mL,P均<0.05]均显著升高。低剂量Tempol组和高剂量Tempol组MDA含量、SOD和LDH活性无明显差异,Tempol的作用不呈剂量依赖性。结论:Tempol可能通过调节细胞氧化还原系统,对H_2O_2引起的RAW264.7氧化损伤起到保护作用。

荧光显微镜与流式细胞仪融入医学实验技术专业实验教学探究

针对构建多层次实验教学平台、改进实验教学方法以及丰富实验教学内容等教学改革问题,将大型仪器的使用与医学实验技术专业本科生实验教学相融合,优化实验教学模式的同时,提升大型仪器在实验技术人才培养上的作用。以探究“H2O2诱导RAW264.7细胞系细胞凋亡”为出发点,学生利用研究级倒置荧光显微镜观察细胞核Hoechst 33258染色情况,利用流式细胞术检测细胞凋亡情况,并自行查阅文献分析实验结果,完成开放性实验教学。通过这种模式,提高医学实验技术专业学生对细胞凋亡知识和大型仪器实践操作的掌握水平,为学生未来胜任实验技术工作打下良好基础。

Salinivibrio sp.YH4胞外丝氨酸蛋白酶EYHS耐盐性及生物信息学分析

为探讨菌株Salinivibrio sp.YH4分泌的丝氨酸蛋白酶EYHS的耐盐性及结构特征,采用明胶底物酶谱法分析EYHS的耐盐性,并应用生物信息学手段对EYHS及6种耐盐的S8家族丝氨酸蛋白酶结构特征进行分析。结果表明EYHS在4 mol/L的NaCl溶液中仍具有活性,属于耐盐蛋白酶。EYHS及6种S8家族丝氨酸蛋白酶分子表面的loop区等无规则卷曲所占比例较高,α-螺旋与β-片层则主要位于酶分子内部。EYHS分子表面酸性氨基酸含量较高,且具有弱疏水内核。多序列比对发现蛋白酶的催化三联体两侧存在高度保守的基序和保守的极性氨基酸及芳香族氨基酸,并存在多个保守的Gly与Ala。同源模建和表面电荷分布显示,α螺旋和β片层围成了蛋白酶的催化腔,EYHS活性中心包含由Asp32、His65与Ser215组成的催化三联体,且催化位点区域表面静电势为负。上述结构特征可能有助于耐盐丝氨酸蛋白酶EYHS在高盐环境下维持其稳定性和适度柔性,并有助于其催化功能的发挥,为深入研究耐盐丝氨酸蛋白酶的高盐环境适应性提供了一定的理论依据。

离子强度对鱿鱼鱼糜凝胶性能的影响

[目的]研究离子强度对鱿鱼鱼糜凝胶性能的影响。[方法]通过在漂洗液中添加钠盐、钙盐和镁盐,并采用单因素试验和正交试验优化漂洗工艺条件,考察其对鱿鱼鱼糜凝胶强度的作用效果。[结果]随着漂洗液中离子浓度的增加,鱿鱼鱼糜的凝胶强度呈先升后降的趋势,漂洗液中氯化钠浓度为2.0%,氯化钙浓度为0.2%,氯化镁浓度为0.15%,鱿鱼鱼糜的凝胶强度达到最大值。正交试验优化结果显示,添加0.05%氯化镁、0.4%氯化钙、2.0%氯化钠,鱿鱼鱼糜凝胶性能达到最大值。[结论]该研究优化了漂洗工艺条件,为海洋食品加工提供理论依据。

基于生物信息学方法分析L1CAM在肺鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:分析细胞黏附分子Ll基因(L1CAM)在肺鳞状细胞癌中的表达,并探讨其潜在的生物学意义。方法:利用Ualcan数据库分析肺鳞状细胞癌(LUSC)肿瘤组织及正常组织L1CAM表达,并在正常细胞系和肿瘤细胞系中进行实时荧光定量PCR(qPCR)验证;采用Sangerbox3.0分析L1CAM表达与LUSC患者预后的关系;通过LinkedOmics检索L1CAM共表达基因,将获取的基因集进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析;利用STRING数据库构建蛋白相互作用(PPI)网络。结果:与正常肺组织比较,LUSC组织中L1CAM表达水平明显升高;经qPCR实验验证,与正常肺上皮细胞相比,LUSC细胞系中的L1CAM表达量显著升高;L1CAM共表达基因主要富集的生物学过程包括细胞发育、细胞或亚细胞成分的运动、细胞内信号转导等;主要富集的细胞组分包括细胞外基质、内质网腔、线粒体膜等;主要参与的生物学功能包括信号受体结合、钙离子结合、细胞外基质结构成分等;KEGG信号通路主要与黏着斑、ECM受体互作、顺铂耐药性等相关;L1CAM高表达患者的总生存期(OS)、疾病特异性生存期(DSS)、无病间期(DFI)、无进展间期(PFI)明显低于低表达患者,预示高表达L1CAM的不良预后;PPI网络显示L1CAM蛋白与EGFR、NCAM1、ANK1-3等存在互作关系。结论:L1CAM在LUSC组织中高表达,可作为预后指标;该基因的表达参与多种生物学功能,因此有望成为肺鳞癌潜在的生物标志物。

IL-17调控溃疡性结肠炎分子机制的生物信息学分析

目的利用生物信息学方法分析溃疡性结肠炎(UC)的枢纽基因和关键通路。方法通过基因表达数据库(GEO)下载UC表达谱芯片GSE134025。利用R语言的Limma包筛选UC组与正常组肠黏膜细胞差异表达基因,对这些基因进行GO和KEGG分析;利用STRING数据库构建蛋白互作网络(PPI)并将结果导入Cytoscape筛选出核心基因;利用KEGG mapper绘制核心基因所在的信号通路图。结果筛选出190个差异表达基因,其中147个上调,43个下调。GO分析结果表明,差异表达基因主要涉及炎症反应、细胞增殖的正调控等生物学过程,主要富集于细胞膜、质膜等细胞成分,具有肝素结合、生长因子等分子功能。KEGG分析显示差异基因主要富集于趋化因子信号通路,细胞因子受体相互作用等相关信号通路。从PPI网络中筛选出10个枢纽基因:白细胞介素6(IL-6)、CXC趋化因子配体8(CXCL8)、CXCL10、CXCL1、CXCL9、膜联素A1(ANXA1)、IL-1β、CC趋化因子配体20(CCL20)、CXCL2、CXCL11,其中多个基因位于IL-17调控的信号通路下游。结论发现了10个与UC发病风险相关的枢纽基因,IL-17可能通过这些核心基因调控UC的发生发展。

脂多糖结合蛋白在胃癌组织中的表达及其意义的生物信息学分析

目的:通过生物信息学方法分析脂多糖结合蛋白(LBP)在胃癌组织中的表达及意义。方法:从Ualcan数据库获取正常胃组织及胃癌组织LBP表达数据,利用GEPIA数据库分析LBP表达与胃癌患者预后的关系,在LinkedOmics中检索LBP在胃癌中的共表达基因,通过GO富集分析、KEGG通路分析确定这些基因参与的生物学过程及功能。最后利用STRING数据库分析相关基因编码蛋白的互作网络。结果:与正常胃组织相比,Ⅰ和Ⅲ分期、老年和男性患者胃癌组织中LBP表达水平均明显升高,但与幽门螺杆菌感染与否无显著相关性。在胃癌中与LBP共表达的基因主要涉及急性炎症反应、激活蛋白级联、蛋白质-脂质复合物亚基组织等生物学过程,介导货物受体活性、脂多糖结合、蛋白质-脂质复合物的绑定、糖胺聚糖绑定等分子功能,富集于血液微粒、蛋白质-脂质复合物、内质网腔等细胞组分。富集的KEGG信号通路主要与补体和凝血级联、胆固醇代谢、PPAR信号等通路相关。LBP高表达患者的总生存率和无病生存率明显低于LBP低表达患者。LBP蛋白与TLR4、STAT3、IL-6、STAT6、IL-4、IL-10、JAK1、JAK2、JAK3、SOCS3等存在互作关系。结论:LBP在胃癌组织中高表达,且与胃癌的发生、发展及预后密切相关,可以作为胃癌筛选、预后预测的标志物之一。

疑问形式的非疑问句

说话人通过疑问句向听话人提出问题,寻求解答,这是日语疑问句的基本功能.但是,我们也应当注意到有些疑问句虽然具备了疑问句的形式、特征,但它们却不表示疑问.依据功能的不同可以将其分为以下几类:

疑问句中“の”的功能的一个侧面

日语疑问句中含有「のか」或者「の」的句末表现形式在发话时通常要求存在一个前提.譬如,当我们问:「テレフオンカ一ド持つているの?」,就要求必须存在对方正在使用电话卡或者凭借会话可以推测出对方可能持有电话卡这样一个前提.

人ACE2蛋白结构和功能的生物信息学分析

目的探讨研究人ACE2蛋白的生物学特征。方法从NCBI数据库中获取ACE2蛋白氨基酸序列,利用在线服务器分析其生物学特征,包括其结构特征、理化性质、信号肽以及糖基化、磷酸化位点等翻译后修饰情况,并通过STRING构建ACE2相互作用网络,综合分析ACE2互作蛋白的生物学过程、细胞组分、分子功能和信号通路的功能富集。结果ACE2蛋白由805个氨基酸组成,为不稳定的亲水性蛋白质,含有信号肽和跨膜区,理论等电点为5.36。该蛋白存在6个糖基化位点和80个磷酸化位点。有多个相互作用蛋白,主要定位于细胞膜和细胞外,参与血压调节、激素调节等生物学过程,与肾素-血管紧张素、G蛋白偶联受体结合、趋化因子和松弛素等信号通路密切相关。结论结合人ACE2蛋白结构和功能的生物信息学分析结果,讨论ACE2蛋白在介导SARS-CoV-2入侵和引发肺部损伤的可能性机制,为SARS-CoV-2病毒的入侵、阻断以及药物研发提供一定的理论依据。

miR-105对2种胃癌细胞株生物学功能的影响

目的:探讨miR-105对胃癌细胞生物学功能的影响。方法:采用实时荧光定量PCR法(RTqPCR)检测miR-105在细胞株GES-1和SGC-7901中的表达水平。转染miR-105 mimics后,设立为miR-105mimics组,并同时设立阴性对照组(NC组)。RT-qPCR法检测miR-105表达水平,MTT法检测细胞活力,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Caspase3活性检测细胞抗凋亡能力。通过生物信息学软件分析预测miR-105的下游靶向调控基因蛋白激酶(AKT1),RT-qPCR和Western Blot检测AKT1表达水平变化。结果:miR-105 mimics转染SGC-7901后,miR-105的表达水平为2.58±0.08,与NC组相比明显增高(P<0.05);miR-105 mimics组胃癌细胞活力为1.38±0.08,随着时间递增细胞增殖能力增强,高于NC组(P<0.05);迁移能力增强到128.2±4.22,高于NC组(P<0.05);miR-105mimics组Caspase3活性在48h降到最低为0.53±0.13,低于NC组(P<0.05);miR-105mimics组中AKT1表达水平为1.54±0.03,高于NC组(P<0.05)。结论:miR-105能促进胃癌细胞SGC-7901增殖,增强其细胞活力、迁移能力,抑制其凋亡,可能参与了胃癌发生发展过程。

hsa-miR-105的靶基因预测及生物信息学分析

目的:对hsa-miR-105进行靶基因、功能富集分析(GO分析)、信号通路富集分析、靶基因编码蛋白相互作用分析及与LncRNAs之间联系枢纽等生物信息学分析,为后续研究其功能提供线索。方法:通过UCSC基因组浏览器、miRbase数据库、TargetScan、miRanda、MicroT-CD软件、miRTarBase数据库、GeneOntology数据库、KEGG信号转导通路、STRING数据库及LncBase V.2软件等在线工具分析hsa-miR-105序列及保守性,预测其靶基因,对预测的靶基因进行GO富集分析、KEEG通路富集分析和靶基因编码蛋白分析,预测与hsa-miR-105相关的长链非编码RNA(LincRNA)的基因。结果:hsamiR-105序列在各物种间高度保守;GO分析发现hsa-miR-105靶基因功能主要富集在细胞氮化物代谢、生物合成过程、TRK受体信号通路中的神经营养和Fc-epsilon受体信号通路等方面(P<0.05),KEGG通路分析涉及的信号通路主要有氨基酸的生物合成、调控干细胞多功能性的信号通路和急性骨髓白血病等(P<0.01);蛋白互作显示编码蛋白间存在复杂的相互作用,且编码蛋白在互作网络中起到稳定结构的作用;与hsa-miR-105相关的长链非编码RNA(LincRNA)的基因有CASC7、H19和NEAT1。结论:hsamiR-105可能参与肿瘤发生、发展等重要的生物学过程及调控机制,为进一步实验验证提供了线索。