益气通脉方中丹参、大黄活性成分醇提工艺优化

目的 优化益气通脉方中丹参、大黄活性成分醇提工艺。方法 在单因素试验基础上,以乙醇体积分数、提取时间、溶剂倍量为影响因素,丹参酮ⅡA、芦荟大黄素、大黄素含量及干浸膏得率的综合评分为评价指标,Box-Behnken响应面法结合BP神经网络优化醇提工艺。结果 最佳条件为乙醇体积分数80%,提取时间1 h,溶剂倍量8倍,提取次数3次。结论 该方法稳定可靠,可用于醇提益气通脉方中丹参、大黄活性成分。

益气通脉方对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响及机制

目的探究益气通脉方对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠脉粥样硬化(AS)的影响及机制。方法将40只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、阳性对照组[阿托伐他汀钙,2.6 mg/(kg·d)]和益气通脉方低、中、高剂量组[0.46、0.91、1.82 g/(kg·d),以生药量计],每组8只;另取C57BL/6J小鼠8只作为正常组。除正常组外,其余各组小鼠给予高脂饲料并灌胃相应药液或生理盐水,每天1次,连续12周。末次给药后,检测小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)含量;检测并计算各组小鼠主动脉斑块面积占比,观察主动脉窦病理形态学变化;检测小鼠主动脉中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(又称Akt)及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化水平。结果与模型组比较,益气通脉方中、高剂量组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平和TNF-α、IL-1β、MCP-1(含低剂量组)含量均显著降低,高剂量组的HDL-C含量显著升高(P<0.05或P<0.01);益气通脉方各剂量组小鼠主动脉斑块均有不同程度减少,脂质沉积、炎症细胞浸润等病理改变均有不同程度减轻;益气通脉方中、高剂量组小鼠主动脉斑块面积占比和主动脉中PI3K、Akt、mTOR蛋白的磷酸化水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论益气通脉方可改善AS小鼠的脂质代谢,减轻炎症反应,延缓斑块发展,其作用可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路激活有关。

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨益气通脉方对ApoE^(-/-)小鼠主动脉粥样硬化的作用机制

目的 探讨益气通脉方调节Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对载脂蛋白E^(-/-)(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)炎症反应的作用机制。方法 将8只C57BL/6J小鼠作为空白组,40只同周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、益气通脉方低、中、高剂量组[0.39、0.78、1.56g/(kg·d)]和阿托伐他汀组[2.6 mg/(kg·d)],每组8只。除空白组外采用高脂饲料诱导AS模型,各给药组分别给予相应药物灌胃,空白组与模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,连续12周。采用酶标仪检测小鼠血脂水平;ELISA检测小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平;油红O染色观察小鼠主动脉斑块面积;HE、Masson染色观察小鼠主动脉窦内膜斑块病理变化;免疫组化(IHC)、免疫荧光(IF)法检测主动脉窦中TLR4、髓细胞分化初级反应蛋白88(MyD88)的表达;Western Blot检测小鼠主动脉中TLR4/NF-κB信号通路相关因子蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组小鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平升高(P<0.01),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平下降(P<0.01);血清TNF-α、MCP-1含量升高(P<0.01);主动脉窦内膜斑块以及胶原面积增加(P<0.01),MyD88表达升高(P<0.01);主动脉TLR4、NF-κB、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、MyD88蛋白表达升高(P<0.01)。与模型组比较,益气通脉方中、高剂量组和阿托伐他汀组血清TC、TG、LDL-C水平下降(P<0.01),血清中TNF-α、MCP-1含量下降(P<0.01),主动脉窦斑块以及胶原面积均下降(P<0.01,P<0.05),主动脉窦MyD88水平表达下降(P<0.01),主动脉TLR4、NF-κB、MyD88、IκB蛋白表达下降(P<0.01,P<0.05)。结论 益气通脉方可改善血脂和炎症因子的水平,减少主动脉窦中斑块脂质堆积,其作用机制可能与下调TLR4/NF-κB信号通路有关。

基于NF-κB/NLRP3信号通路探讨益气通脉方干预ApoE-∕-小鼠肝脏炎症及脂质沉积的影响

目的:探究益气通脉方(YQTM)通过调控核转录因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对载脂蛋白E-∕-敲除(Apo E-∕-)小鼠肝脏炎症的影响。方法:将40只Apo E-∕-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组(阳性药组)、YQTM低、中、高剂量组(0.39、0.78、1.56 g·kg^(-1))。各给药组在高脂饲料喂养基础上分别给予相应剂量药物灌胃,连续12周。8只C57BL/6J小鼠为空白组,普通饲料喂养。12周后,采用油红O(oil red O)染色、马松(Masson)染色法观察小鼠主动脉病变情况并判断是否造模成功;oil red O染色观察小鼠肝脏中脂肪沉积;苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肝脏组织病变情况;Masson染色观察小鼠肝脏胶原蛋白纤维分布;酶标仪检测小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)的表达水平;肝脏中TC、TG水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠肝脏白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)的表达水平;免疫组化法(IHC)观察小鼠肝脏NF-κB、NLRP3的表达区域;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肝脏中NF-κB、NF-κB抑制蛋白(IκB)、IκB激酶β(IKKβ)、磷酸化(p)-NF-κB、pIκB、p-IKKβ、NLRP3和胱天蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠主动脉脂质沉积严重,肝脏细胞内脂肪滴积大量聚集且细胞质内充满脂肪空泡(P<0.01),小鼠血清中TG、TC、LDL-C、AST和ALT水平均显著升高(P<0.01),肝脏中TG、TC水平升高(P<0.01);肝组织IL-1β和IL-18含量,肝脏NF-κB、IκB、IKKβ、p-NF-κB、p-IκB、p-IKKβ、NLRP3和Caspase-1蛋白表达水平均显著升高(P<0.01);与模型组比较,YQTM各剂量组小鼠主动脉斑块减轻,肝脏内脂肪聚集减少,炎症细胞浸润得到缓解(P<0.05,P<0.01)。小鼠血清中TG、TC、LDL-C、AST和ALT水平均明显降低(P<0.05,P<0.01);肝脏中TG、TC水平有所减少;肝组织 L^(-1)β、IL-18水平,肝脏NF-κB、IκB、IKKβ、p-NF-κB、p-IκB、p-IKKβ、NLRP3和Caspase-1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:YQTM对Apo E-∕-小鼠肝脏炎症的干预机制可能是与下调NF-κB/NLRP3信号通路有关。

基于p38 MAPK/iNOS信号通路探讨加味散偏汤对硝酸甘油诱导的大鼠偏头痛作用机制

目的:探讨加味散偏汤对硝酸甘油诱导的大鼠偏头痛的作用机制。方法:将72只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组(硝酸甘油,10 mg·kg^(-1))、利扎曲坦组(0.89 mg·kg^(-1))、加味散偏汤高、中、低剂量组(12.96、6.48、3.24 g·kg^(-1))。腹腔注射硝酸甘油建立大鼠偏头痛模型。测试大鼠眼眶和足底痛觉敏感[机械痛阈值(MPT)]行为学实验;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-1β(IL-1β)等炎症因子水平;免疫组化法(IHC)检测大鼠三叉神经脊束核尾核(TNC)诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠TNC区磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)和iNOS蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠TNC区iNOS、p38 MAPK和IL-1βmRNA表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠机械痛阈值显著降低(P<0.01);血清NO、TNF-α、IFN-γ和IL-1β炎症因子水平显著升高(P<0.01),TNC区脑组织p38 MAPK、iNOS和IL-1β等炎症因子表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠MPT水平均明显提升(P<0.05,P<0.01),且加味散偏汤中剂量组效果最为显著(P<0.01)。与模型组比较,经加味散偏汤治疗后,大鼠TNC区组织iNOS、p38 MAPK和IL-1βmRNA及p-p38 MAPK、iNOS蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),血清中NO、TNF-α、IFN-γ和IL-1β等表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:加味散偏汤可通过抑制p38 MAPK/iNOS通路,减少NO、TNF-α、IFN-γ和IL-1β等促炎因子表达,减轻神经源性炎症反应,发挥治疗偏头痛的作用。