RNF20对紫外线诱导的胃癌细胞DNA损伤修复的影响

目的探究在紫外线暴露下环指蛋白20(ring finger protein 20,RNF20)低表达对胃癌细胞DNA损伤修复的影响及其相关作用机制。方法实验采用慢病毒载体构建稳定低表达胃癌细胞系,分为对照组和RNF20敲低组,用CCK-8法检测两组细胞的增殖情况,用总共照射剂量为20 J/m^(2)紫外线照射胃癌MGC803细胞,采用Western blotting及免疫荧光技术检测两组细胞γ-H2AX、RAD51和p21的情况。结果荧光显微镜观察两组细胞均有绿色荧光蛋白表达;CCK-8显示RNF20表达降低会促进胃癌细胞增殖;敲低组细胞中RNF20蛋白较对照组表达降低。与对照组相比,经20 J/m^(2)紫外线照射细胞后,敲低组γ-H2AX消失更加迟缓,RAD51蛋白表达降低,p21蛋白表达下降趋势更慢。结论RNF20敲低会抑制紫外线诱导的胃癌细胞DNA损伤修复过程。

结直肠癌患者外周血淋巴细胞亚群比例及表面受体表达的变化

目的 根据结直肠癌T细胞、自然杀伤(NK)细胞、 NKT细胞表面蛋白受体表达情况,探索结直肠癌患者免疫功能评价体系。方法 收集144例结直肠癌患者和87例健康对照组的外周血样本,通过流式细胞术、细胞培养等方法,分析患者外周血淋巴细胞亚群表面受体与健康对照组的差异。结果 与健康对照组相比,结直肠癌患者外周血总淋巴细胞、 CD16^(bright)CD56^(dimN)K细胞、 NKT细胞百分比降低;T细胞、 CD16^(bright)CD56^(dim)NK细胞、 NKT细胞表面抑制型受体T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域(TIGIT)百分比增加;T细胞、 NK细胞、 NKT细胞表面趋化因子受体CC趋化因子受体7(CCR7)略降低。结论 结直肠癌患者外周血NK细胞亚群比例及表面受体表达谱存在差异。

在医学专业课教学中加强人文精神渗透的探索与实践

当今医学专业课教学中人文精神缺失,难以满足社会对兼具高尚医德和精湛医务技术的新一代医学人才的需求。本文阐述了医学专业课教学中人文精神渗透的重要性,并就人文精神在医学微生物学教学中的渗透进行了初步的探索和实践。通过树立医学人文精神理念、提升教师的人文素养、发掘微生物发展史上重要人物和事件中的人文素材、融医德教育于医学微生物教学中等途径,提高学生学习的兴趣、增强学生的科学思维和素养、加强学生的爱国主义精神、增强学生的社会责任感和使命感。

结核疫苗研究进展

目的:回顾卡介苗(BCG)的应用情况,介绍关于结核疫苗研究进展的最新信息。方法:查阅大量关于结核疫苗研究的最近几年的文献。结果:有多种抗结核疫苗正在研究中,例如卡介苗、结核活疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗以及转基因植物疫苗等。结论:BCG仍是目前唯一可应用的抗结核疫苗,但是许多新疫苗己在动物模型中显示出潜力并开始进入临床试验。

两种血凝块基因组DNA提取方法的比较

分子生物学实验常常涉及到血液中基因组DNA的提取,通常用于实验的DNA主要是从抗凝血中提取,但抗凝血保存的时间过长,也会形成血块,给提取带来不便,造成许多珍贵的血液标本遗弃。为此,本实验对比研究了两种不同的血凝块基因组DNA提取方法，以探索血凝块基因组DNA提取的有效方法，现报道如下。

3-甲基腺嘌呤对喜树碱诱导的宫颈癌Hela细胞凋亡的影响

目的:本研究探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对喜树碱(Camptothecin,CPT)诱导的Hela细胞凋亡的影响。方法:用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT方法)检测CPT对Hela细胞作用的最佳药物浓度和时间,以及不同药物对Hela细胞增殖活性的影响;用免疫印迹及免疫荧光检测不同药物作用于Hela细胞后,Hela细胞自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、p62及凋亡相关蛋白的变化;DAPI核染色观察细胞凋亡。结果:CPT作用于Hela细胞后,Hela细胞增殖活性明显下降,并且可诱导自噬现象的发生。CPT和3-MA联合作用较单独CPT作用Hela细胞的增殖活性降低,细胞自噬水平下降,凋亡率明显升高。结论:CPT在诱导Hela细胞凋亡的同时可诱导自噬,通过3-MA抑制自噬可增强Hela细胞对CPT作用的敏感性。

云南大理白族人群乙型肝炎病毒基因型和亚型的分布

目的调查云南大理地区白族人群乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)基因型和亚型分布情况。方法在大理地区选择100例白族慢性HBV感染者,采用基因型特异性引物分型法和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法测定HBV感染者血清HBV基因型和亚型,并用ELISA法测定HBV血清标志物。结果100例HBV感染者中,B型41例(41%),全部为Ba亚型,未发现Bj亚型;C型25例(25%),其中Cs亚型21例(84%),Ce亚型3例(12%),未分型1例(4%);B+C混合型34例(34%)。B型感染者与C型感染者比较血清HBeAg阳性率差异有统计学意义(P=0.024)。结论云南大理白族人群HBV感染的基因型主要为B型、B+C混合型和C型,以Ba和Cs亚型为主要流行株,B+C混合型感染占很大比例。

miR-103通过抑制FBW7的表达促进肝癌细胞增殖

【目的】研究miR-103对肝癌细胞增殖功能的影响及其作用机制。【方法】Real time PCR方法检测miR-103在肝癌组织和细胞中的表达。将miR-103 inhibitor转染到肝癌细胞中,分为实验组(转染miR-103 inhibitor)和对照组(转染Negative Control),通过MTT实验检测肝癌细胞的增殖变化。Real time PCR和Western blotting检测转染miR-103 mimics后肝癌细胞中FBW7 mRNA和蛋白的表达变化。通过重荧光素酶报告基因实验检测转染miR-103 mimics或inhibitor后FBW7-3’UTR活性的变化。【结果】Real time PCR结果显示miR-103在肝癌组织和HepG2细胞系中均高于癌旁组织和LO2肝细胞系(P<0.05)。MTT实验结果显示,转染miR-103 inhibitor实验组肝癌细胞的存活细胞数低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Real time PCR和Western blotting结果显示,转染miR-103 mimics实验组肝癌细胞中FBW7的mRNA和蛋白表达水平都低于对照组.重荧光素酶报告基因实验结果显示,与对照组相比,转染miR-103 mimics的实验组中FBW7-3’UTR报告基因活性显著降低(P<0.05);与对照组相比,转染miR-103 inhibitor的实验组中FBW7-3’UTR活性显著升高(P<0.05)。进一步实验发现,转染FBW7后能显著下调由miR-103 mimics所引起的细胞增殖作用。【结论】miR-103可以通过抑制FBW7的表达来促进肝癌细胞增殖。

正交设计优化HBV基因分型PCR反应体系的研究

目的:探索HBV基因分型PCR反应体系的优化方法。方法:利用正交设计,从Taq DNA聚合酶、模板DNA、dNTP、引物、Mg^(2+)5种因素,对HBV基因分型PCR反应体系进行优化分析。结果:各因素的不同组合对PCR结果有显著影响,本实验仅用16次试验就得到了可很好进行PCR扩增的几种不同的条件组合。结论:正交设计是一种切实可行、快速、经济的PCR反应体系优化方法。

p53-Ser^392的磷酸化在肿瘤治疗中的作用

磷酸化是p53转录后修饰最常见的方式,但对p53-Ser392的磷酸化在肿瘤治疗中的作用及具体机制知之甚少。我们就p53-Ser392的磷酸化状态对野生型及突变型p53功能的影响、放疗化疗因素及蛋白激酶对p53-Ser392的磷酸化水平的调节和p53-Ser392的磷酸化研究意义进行了阐述。

巢氏PCR-RFLP和多重PCR检测HBV基因型、基因亚型方法的比较

目的:建立HBV基因型和亚型的分型方法,并分析相关的两种方法特异性和敏感性。方法:采用型特异性引物的巢氏PCR-RFLP和六种主要的HBV型特异性引物和亚型特异性引物的多重PCR方法,分别检测了100例患者标本。结果:两法不一致率为50%(27/54)。型特异性引物巢氏PCR-RFLP法检测出B基因型41例(41%),C基因型25例(25%),B+C基因型34例(34%),B j亚型3例(7.3%),Ba亚型为38例(92.7%),Cs亚型为21例(84%),Ce亚型为3例(12%),1例C型未分出亚型(4%)。多重PCR法检出B型18例(33.3%),C型7例(13%),B+C混和型5例(9.3%),B2亚型2例(11%),C1亚型2例(28.5%)。巢氏PCR-RFLP法型检出率100%亚型检出率98.5%,多重PCR法型检出率55.6%,亚型检出率仅为16%,前者高于后者(P<0.05)。结论:巢氏PCR-RFLP鉴定HBV基因型、基因亚型较多重PCR敏感性高,重复性好,但耗时长,费用高。

大理吸毒人群HBV感染的调查及基因型研究

目的:调查大理吸毒人群乙型肝炎病毒(HBV)的基因型和亚型。方法:采集大理市某戒毒所吸毒人群血清共192份,采用酶联吸附免疫法(ELISA)测定HBV血清标志物(HBVM),再采用基因型特异性引物PCR和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法测定HBV感染血清基因型和亚型。结果:192份血清中,HBsAg阳性率8.85%(17/192)。17份HBsAg阳性标本中基因型分别为:B型3例,均为Ba型;C型1例,为Cs型;B+C混合型3例(Ba+Cs);未扩增10例。结论:大理吸毒人群HBV感染率较高;HBV感染的基因型为B型、C型和B+C型,基因亚型为Ba和Cs。

高等教育:科学教育与人文教育的统一

当代科学技术的高度发展,导致了科学教育与人文教育的失衡。因而,科学教育与人文教育的统一已成为高等教育发展的必然要求。高等学校应通过变革教育理念、建构科学合理的课程体系、提升教师素质、营造人文氛围和积极开展社会实践活动等多种途径促进二者的统一。

模拟粪便标本的制作

目的:为弥补临床医学生和检验专业学生在实验诊断及临床检验实习中标本来源的困难。探讨模拟粪便标本的制备。方法:用面粉做基质,辅以琼脂、血液、蔬菜、肉末及菌种,使用生理盐水调治成糊状。结果:将该标本进行粪便化学及显微镜检查,可观察到一些阳性指标。结论:学生通过对模拟标本的检查,可看到一般阳性指标的形态,感受到与临床的紧密性,及早与临床接触,增强学习兴趣和工作责任心。

miR-143通过靶向FASN抑制肝癌HepG2细胞脂质形成

目的研究miR-143对肝癌Hep G2细胞脂质形成的影响及其分子机制。方法应用qRT-PCR方法检测miR-143在临床肝癌和癌旁组织以及肝癌细胞系和正常肝细胞系中的表达。通过油红O染色实验检测miR-143对肝癌细胞脂质形成的影响。Western blotting检测miR-143对肝癌细胞中脂肪酸合成酶(FASN)表达的影响。通过报告基因实验检测miR-143及其抑制子对报告基因载体FASN-CDS活性的影响。结果 qRTPCR结果表明在临床肝癌组织和Hep G2细胞中miR-143的表达显著低于癌旁组织和Chang liver肝细胞系(P<0.01)。油红O染色实验结果显示,miR-143能显著降低肝癌细胞中脂质的形成。qRT-PCR和Western blotting结果证实,miR-143可以显著下降FASN的mRNA和蛋白表达水平。报告基因检测结果表明,在Hep G2细胞中miR-143可以显著降低FASN-CDS报告基因的活性(P<0.01);相反,miR-143抑制子可以显著升高FASN-CDS的活性(P<0.01)。在Hep G2细胞中miR-143抑制子可以上调FASN的表达并促进脂质形成。结论 miR-143可以通过抑制FASN的表达阻碍肝癌细胞脂质形成。

RPA32蛋白原核表达、多克隆抗体制备及初步鉴定

目的原核表达人RPA32蛋白并制备其多克隆抗体,为后续RPA32的功能研究奠定基础。方法以人cDNA文库为模板,构建原核表达质粒PET41a-RPA32,转化受体菌E.coli BL21,经IPTG诱导表达,采用GST亲和纯化方法获得GST-RPA32融合蛋白,将该融合蛋白免疫家兔制备RPA32多抗血清,最后采用Western blot检测其在多种肝细胞株中的特异性。结果在受体菌E.coli BL21中成功诱导表达GST-RPA32融合蛋白,免疫家兔后获得高效价RPA32抗血清,Western blot检测证实该血清能够识别多种肝细胞株中的RPA32及CPT作用后出现的RPA32磷酸化条带。结论成功制备兔抗人RPA32多克隆抗体,为RPA32在DNA损伤中的功能研究奠定了基础。

大学生性教育刻不容缓

改革开放以来，随着西方性观念和性价值观的大量涌入，中国大学生的性观念发生了很大的变化，他们对性的兴趣日趋上升，高风险的性行为和性暴力事件与日俱增。然而我国过于保守的性教育根本无法应对这种局面。因此，对大学生进行全面的性教育显得非常必要和紧迫。

Mre11多克隆抗体的制备及初步鉴定

目的原核表达人Mre11蛋白,并制备出Mre11蛋白的多克隆抗体,为研究Mre11蛋白功能奠定基础。方法以人cDNA文库为模板,构建出原核表达质粒PET41a-Mre11,然后转化受体菌E.coli BL21,再经IPTG诱导表达,通过采用GST亲和纯化获得GST-融合蛋白,将该融合蛋白免疫兔以制备出Mre11多抗血清,最后采用western-blot及免疫荧光等方法检测其在细胞中的特异性。结果在受体菌E.coli BL21中成功诱导表达出了GST-Mre11融合蛋白,免疫新西兰大白兔后获得了高效价的Mre11蛋白抗血清,IP、western-blot及免疫荧光等多种方法检测证实该抗血清能够特异性识别293T和U2OS细胞株中Mre11蛋白,并能够正确清楚检测293T和U2OS细胞株中的Mre11表达情况,具有良好的特异性和高效性。结论成功制备出了兔抗人Mre11蛋白的多克隆抗体,为深入研究Mre11蛋白在DNA损伤中的功能奠定了基础。

水飞蓟宾对结直肠癌细胞DNA损伤应答的影响

目的探究水飞蓟宾对结直肠癌细胞DNA损伤应答的影响,并探讨其相关分子机制。方法将结直肠癌HCT116和HT29细胞分为空白对照组(DMSO)和水飞蓟宾给药组,给药组按药物浓度分为12.5、25、50、100、200μg/mL 5组。通过倒置显微镜观察给药后各组细胞的生长状态变化;采用CCK-8法检测水飞蓟宾处理后各组细胞的活力变化;采用免疫荧光法(IF)、免疫印迹法(WB)检测水飞蓟宾处理后各组细胞的DNA损伤和细胞周期相关蛋白的表达水平,包括p21、CyclinB1、Phospho-Chk2t68、Aurora A的表达水平;流式细胞术检测细胞周期分布。结果与空白组比较,水飞蓟宾对结直肠癌HCT116和HT29细胞具有明显的生长抑制作用,其抑制率随着给药浓度的增加而增强(P<0.05);与空白对照组相比,水飞蓟宾给药组DNA损伤反应蛋白γ-H2Ax表达明显升高,并且呈药物作用时间和浓度依赖性;细胞周期相关蛋白CyclinB1、Aurora A表达下调,且随着浓度的增加和作用时间的延长逐渐降低,p21、P-Chk2蛋白的表达逐渐上调,随着给药浓度的增加逐渐升高(P<0.05)。结论水飞蓟宾可以抑制结直肠癌HCT116和HT29细胞的增殖、诱导细胞DNA双链断裂损伤、细胞周期阻滞,这些结果提示水飞蓟宾可能通过DNA的损伤应答从而抑制结直肠癌的发生发展。

蟾蜍血细胞内DNA显示的孚尔根反应

目的熟悉并掌握孚尔根反应的原理及实验操作方法,观察DNA细胞的形态和结构。方法取蟾蜍血细胞涂片,60℃1NHCL水解后,用Schiff试剂染细胞核,亮绿复染细胞质。结果显微镜下观察到细胞核被染成紫红色,细胞质为绿色。结论 DNA细胞的核质红绿染色鲜明且清晰美观,让学生对生物学研究有了初步的认识。