微生物-肠-脑轴与神经退行性疾病的关系

脑肠轴(braingut axis)是大脑和消化系统之间存在的一种密切联系,在维持体内平衡过程中发挥着重要作用。近年来研究表明,微生物群作为脑肠功能的关键调节因素,在神经退行性疾病的研究方面具有独特性和重要性。微生物通过免疫系统、氨基酸代谢、内脏神经等方式调节神经元活动和激活小胶质细胞从而对脑的功能和疾病的发生发挥调节作用。本文将对微生物-肠-脑轴在神经退行性疾病的作用做以讨论,阐述微生物在神经退行性疾病发生发展过程中的重要作用,为神经退行性疾病的研究和治疗提供新的思路和方法,提高人们对微生物在疾病发生发展过程中重要作用的认识。而关于微生物影响疾病发生的一些相关机制仍待进一步研究。

基于tecVLP研究白叶藤天然衍生物抗CCHFV效果

目的通过构建克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV)模拟病毒入胞、基因转录及蛋白翻译能力的病毒样颗粒(tecVLP)并建立细胞感染模型,研究白叶藤天然衍生物抗CCHFV的效果。方法首先通过反向遗传学系统构建CCHFV微基因组质粒(PSMART-LCK-vL-NanoLuc)及辅助质粒(PCAGGS-LCK-L、PCAGGS-M、PCAGGS-S、PCAGGST7),在此基础上利用共转染方式构建包含NanoLuc荧光素酶报告基因微基因组及所有结构蛋白的CCHFV tecVLP,利用qRT-PCR和Nano-Glo^(■)Luciferase Assay试剂盒检测被感染细胞中NanoLuc荧光强度及基因的相对表达,以此建立CCHFV tecVLP细胞感染模型。最后利用该模型研究白叶藤天然衍生物的抗CCHFV效果。结果经PCR验证后,微基因组质粒PSMART-LCK-vL-NanoLuc在560 bp左右检测到预期大小的目的条带;辅助质粒PCAGGS-T7在2800 bp左右检测到预期大小的目的条带;经双酶切鉴定后,辅助质粒PCAGGS-LCKF-L、PCAGGS-M以及PCAGGS-S分别在11000、5000和1600 bp处检测到预期大小的目的条带。电镜结果显示,在上清及细胞中均观察到了直径大小约50 nm的CCHFV tecVLP颗粒,滴度为105TCID50。与对照组比较,CCHFV tecVLP感染组细胞的NanoLuc荧光值和基因相对表达明显升高,差异均有统计学意义(t=80.63、28.35,P均<0.001)。上述结果表明成功建立了CCHFV tecVLP的细胞感染模型,并利用该模型进行后续研究。qRT-PCR结果显示,白叶藤天然衍生物在浓度为50和100μmol/L时,可显著降低已感染CCHFV tecVLP的Huh7细胞中NanoLuc基因的相对表达(t=32.59、34.43,P均<0.001);Nano-Glo^(■)Luciferase Assay试剂盒检测结果显示,白叶藤天然衍生物在浓度为50和100μmol/L时,亦可显著降低已感染CCHFV tecVLP的Huh7细胞中NanoLuc荧光强度(t=152.60、182.00,P均<0.001)。根据Auto Dock评分显示,白叶藤天然衍生物(Z24)与CCHFV-核衣壳蛋白(NP)结合能为-6.42 kcal/mol,绝对值>5,结合度良好,稳定性较强。结论白叶藤天然衍生物对CCHFV tecVLP具有明显的抑制效果,该抑制效果主要作用于病毒复制周期的转录及翻译阶段。