中药水蛭素对荷瘤鼠Ki-67与VEGF表达的影响

目的分析Ki-67增生抗原与VEGF细胞因子在荷瘤鼠组织中的表达,探讨其与肿瘤的内在关系。方法取小鼠48只,随机分成4组,左前腋下接种H22肝癌瘤细胞0.2毫升/只。连续用药水蛭素,第15天处死动物,剥离肿块称重。同时取荷瘤鼠肿块组织固定、包埋、切片、染色、孵育、滴加抗体等,用免疫组化法检测Ki-67增生抗原与VEGF细胞因子的表达。Ki-67阳性表达定位于细胞核,VEGF阳性表达定位于细胞质。结果Ki-67与VEGF模型对照组呈强阳性;水蛭素大剂量组呈弱阳性;水蛭素小剂量组呈阳性。结论水蛭素能抑制荷瘤鼠肝癌实体瘤Ki-67增生抗原与VEGF细胞因子的高表达,具有明显的抗肿瘤作用,这与中药水蛭素活血化瘀及强大的抗凝血功效有密切关系。

白血病NB4细胞凋亡过程中Fas蛋白和基因的表达及意义

目的探讨Fas蛋白及基因表达在三氧化二砷(As2O3)体外诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞NB4凋亡过程中的作用。方法采用MTT法检测As2O3作用后NB4细胞增殖情况,流式细胞仪检测Fas蛋白表达,RT-PCR法检测Fas基因表达。结果经As2O3作用后,细胞增殖受抑,细胞凋亡明显,Fas蛋白及基因表达均升高。结论Fas蛋白及基因高表达在As2O3诱导NB4细胞凋亡过程中起关键作用。

六亚甲基二乙酰胺诱导HL-60细胞分化及其分子机制的研究

本研究探讨六亚甲基二乙酰胺(HMBA)对髓系白血病HL-60细胞分化的作用及其分子机制。应用MTT比色法观察不同浓度HMBA在不同时间点对细胞增殖的抑制作用,采用Wright-Giemsa染色观察细胞形态学变化,运用流式细胞仪测定细胞分化抗原CD11b的表达,并进行细胞周期分析,半定量RT-PCR分析c-myc、mad1、p21、p27、hTERT、HDAC1基因mRNA的表达。结果表明:HL-60细胞经不同浓度(0.5、1、2mmol/L)HMBA处理后细胞增殖受到较明显的抑制,并随时间延长、剂量增大抑制作用明显增强。HL-60细胞经2mmol/L HMBA处理后,细胞形态学上趋于分化成熟,细胞停滞于G0/G1期;CD11b表达显著增高;c-myc、hTERT mRNA表达显著下调,mad1、p21、p27mRNA表达显著上调,而HDAC1mRNA表达无明显变化。结论:HMBA能诱导HL-60细胞分化,其分子机制可能是通过调节c-myc/mad1开关引起p21、p27上调,并且下调hTERT mRNA表达,与HDAC1活性抑制无关。

少量多次异基因骨髓移植的实验研究

目的：探讨少量多次异基因骨髓移植的ＧＶＨＤ反应。方法：采用不同少量异基因骨髓细胞的多次尾静脉注射。观察大小便，皮毛，体位及死亡率等ＧＶＨＤ反应一般表现。移植后不同天数进行体内混合淋巴细胞反应及嵌合体测定。外周血象及骨髓有核细胞按常规方法计数。半固体琼脂法进行骨髓ＣＦＵ－ＧＭ测定。肝、脾、小肠及皮肤病理学检查判断ＧＶＨＤ反应程度。外周血Ｌ６１５细胞及脾脏Ｌ６１５细胞比例判断ＧＶＬ作用。结果：一次性大剂量组ＧＭＨＤ反应表现明显，单纯多次异基因骨髓细胞移植的ＧＶＨＤ反应不明显，而少量多次骨髓移植组则ＧＶＨＤ反应强度界于两者之间，并且具有较好的造血恢复作用。在ＧＶＬ作用方面，一次性大剂量骨髓移植组产生较强的近期抗白血病作用，但多死于ＧＶＨＤ反应。少量多次骨髓移植１×１０６骨髓细胞及 １×１０６脾单个核细胞组抗白血病作用较强，３０ ｄ生存率达 ６０％，死亡原因主要为白血病。结论：少量多次骨髓移植可以减轻ＧＶＨＤ反应，保留部分ＧＶＬ作用。

干扰素对HL-60细胞与维甲酸耐药HL-60细胞作用的研究

目的 :探讨干扰素α对HL 6 0细胞增殖分化与凋亡的作用及特点。方法 :MTT法测定细胞增殖性变化。NBT方法测定细胞分化程度。流式细胞仪测定凋亡的发生程度。浓度递增法诱导HL 6 0细胞的维甲酸耐药性。结果 :IFNα体外抑制HL 6 0细胞增殖 ,并与维甲酸产生协同抑制作用。IFNα可单独诱导HL 6 0细胞分化 ,又能增加维甲酸诱导分化作用。单独IFNα无明显的诱导HL 6 0细胞凋亡作用。维甲酸耐药HL 6 0细胞经IFNα作用 3d后 ,可明显恢复其对维甲酸的反应性。结论 :IFNα既能促进维甲酸对HL 6 0细胞的诱导分化作用 ,又可逆转HL 6 0的维甲酸耐药性。

肝脾细胞输注在异种移植中的耐受诱导

目的 :观察肝脾细胞输注诱导异种胰岛移植的免疫耐受性。方法 :采用STZ制备BALB C小鼠糖尿病模型 ,经尾静脉注射供体猪肝细胞和 或脾细胞 3次后 ,腹腔内注射法进行猪胰腺细胞移植。测定血糖浓度变化 ,观察小鼠移植物有功能存活时间。选择常规方法测定小鼠移植后NK细胞活性变化 ,T细胞亚群和B细胞体外抗体形成实验。结果 :肝脾细胞联合胰岛移植组血糖在移植后 2 0d内均处于较低水平 ,并与同期其他各实验组的血糖有明显差异 (P <0 0 5 )。于 35～ 4 5d内出现移植物功能丧失。NK细胞杀伤活性移植后肝脾细胞联合胰岛移植组没有明显变化 (P >0 0 5 )。其他各实验组的NK细胞杀伤活性均明显升高 (P<0 0 5 ) ,T细胞亚群亦与NK细胞杀伤活性一样出现同样变化。脾脏B细胞体外溶血功能均增强 (P<0 0 5 )。结论

桑银降糖胶囊对链脲霉素致糖尿病大鼠的降糖作用

目的观察桑银降糖胶囊对链脲霉素(STZ)致糖尿病大鼠的降糖疗效。方法采用STZ制备糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病模型组、桑银降糖胶囊大剂量组(1.2 g/kg)、桑银降糖胶囊小剂量组(0.3 g/kg)、桑枝颗粒组各10只,另设对照组10只。采用微量血糖测试仪检测各组糖尿病大鼠血糖,125I-胰岛素放射免疫试剂盒测血清胰岛素水平,同时进行HE染色观察各组大鼠的胰腺病理变化,电镜观察肾脏、肝脏超微结构的变化。结果与模型组比较,桑银降糖胶囊大剂量、小剂量组大鼠血糖降低、血清胰岛素水平升高(P均<0.01),其中桑银大剂量组的降糖作用较桑枝颗粒组明显(P<0.01)。HE染色显示桑银大剂量组较模型组胰腺组织结构完好,细胞溶解、碎裂、浊肿、空泡样变等病理变化明显减少,胰岛数量及岛内细胞数量较多,结构清晰,淋巴细胞浸润减少。电镜结果显示桑银降糖胶囊可减轻糖尿病大鼠的肾脏、肝脏损伤。结论桑银降糖胶囊对STZ糖尿病大鼠有显著的降血糖作用,并对胰腺、肾脏、肝脏损伤具有一定的保护作用。

中药癌痛克抗炎镇痛的实验研究

目的 :研究中药抗癌痛克抗炎镇痛的作用效果。方法 :取小鼠随机分成 4组 ,每组 11～ 12只。阴性对照组给予生理盐水 30mL/kg ,阳性对照组给予消炎痛 1 2 5mg/kg ,中药大剂量组给予癌痛克2 5 0mg/kg ,中药小剂量组给予癌痛克 12 5mg/kg ,连续灌胃给药 3～ 8d ,每天 1次 ,每次 0 6 5mL ,将二甲苯涂于各组小鼠右耳致炎 ;腹腔注射 0 6 %的醋酸溶液致痛使其产生扭体反应 ;将小鼠置于YSD IX药理热板仪中 ,调节温度 5 5℃ ,观察记录小鼠在不同时间内接触热板至舔后足的时间。结果 :中药癌痛克对二甲苯致炎的小鼠耳肿胀具有明显的抑制作用 ,同时能显著抑制小鼠扭体反应的发生率和延长小鼠舔足反应的潜伏期。结论 :实验研究表明 ,中药癌痛克具有较强的抗炎镇痛作用。

白血康胶囊对辐射小鼠免疫学功能影响的研究

目的 :探讨白血康胶囊对辐射小鼠免疫学功能恢复的促进作用。方法 :吞噬功能按照常规方法进行 ,脾脏淋巴细胞转化功能和NK细胞活性按照常规同位素方法测定。结果 :与对照组比较 ,白血康胶囊灌胃第 6天后 ,小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数提高 ,小鼠脾脏淋巴细胞转化功能和NK细胞活性明显增强。结论

化痰活血法改善2型糖尿病胰岛素抵抗的作用机制研究

目的:研究化痰活血法对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠的葡萄糖激酶(GK)和磷酸烯丙醇羧激酶(PEPCK)的影响与作用机制。方法:将健康的SD大鼠随机分为正常对照空白组和造模组,采用文献法建立2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型;模型鼠又随机分成三组,即胰苏灵组、罗格列酮组、模型组,分别于给药后测定血糖、血脂、胰岛素、胰岛素受体数目与结合力,4周后禁食处死大鼠,留取血清并剪取肝组织以检测GK、PEPCK。结果:胰苏灵在改善胰岛素敏感指数,降糖、降脂、降低FFA等指标方面与罗格列酮无显著性差异(P>0.05),且胰苏灵可减轻大鼠体质量,胰苏灵组大鼠GK、PEPCK活性与罗格列酮组无显著性差异(P>0.05)。结论:胰苏灵可通过增加肝脏细胞葡萄糖激酶的mRNA及其蛋白质的表达达到改善胰岛素抵抗,发挥治疗糖尿病的作用。

桑银降糖胶囊对实验性糖尿病大鼠脂质过氧化物酶水平的影响

目的观察桑银降糖胶囊对实验性糖尿病大鼠脂质过氧化物酶水平的影响。方法用微量血糖测定法测定链脲霉素(STZ)实验性糖尿病大鼠实验前后各组空腹血糖浓度。用放免法测定血清胰岛素和C肽。用黄嘌呤—鲁米诺化学发光法测定血液超氧化物歧化酶(SOD)的活性。用硫化巴比妥酸(TBA)比色法测定血清丙二醛(MDA)的含量。用HE染色方法观察桑银降糖胶囊治疗前后胰腺、肝脏、肾脏的组织学变化。结果桑银降糖胶囊可升高糖尿病动物模型SD大鼠胰岛素(36.08±11.40μIU/ml)和C肽(0.10±0.04μIU/ml)的浓度,具有明显降糖(6.33±1.66)mmol/L作用,对糖尿病动物模型SD大鼠具有提高血液SOD的活性(591.00±53.03ug/g.HB),降低MDA水平的功效(6.3±0.85umol/L)。对糖尿病动物模型SD大鼠的胰腺、肝脏、肾脏等组织有改善作用。结论桑银降糖胶囊减少自由基对糖尿病动物模型SD大鼠的胰腺、肝脏、肾脏等组织的损伤并具有保护作用,纠正糖尿病动物模型SD大鼠的糖代谢紊乱,减少并发症的发生。

桑银降糖胶囊对实验性糖尿病大鼠微血管的影响

目的观察桑银降糖胶囊对实验性糖尿病大鼠治疗后心脑微血管病的变化,探讨桑银降糖胶囊对实验性糖尿病大鼠血管调节因子的影响。方法用微量血糖测试仪检测各组糖尿病大鼠血糖和糖耐量,用化学比色法测定血清中NO的含量,应用放免法测定血浆内皮素(ET-1)含量。电镜观察心脑超微结构。结果与模型组比较,桑银降糖胶囊对STZ大鼠均有显著的降血糖作用(P<0.01);2h血糖曲线下面积为38.88±8.59(P<0.01)。大剂量组ET-1为(149.60±16.83)pg/ml(P<0.01),NO为(61.20±11.36)μmol/L(P<0.01)。结论桑银降糖胶囊可提高糖尿病大鼠血清NO含量,下调血浆ET水平,有效抑制由于高血糖等因素引起血管内皮细胞损伤。对糖尿病内皮细胞损伤及微血管病变具有一定的保护作用。

MDS相关基因检测及其临床意义的研究

目的:探讨骨髓增生异常综合征(myelo dysplastic syndrome,MDS)患者发生与演变相关基因。方法:采用RT-PCR方法测定WT1、Evi1、Evi1-MDS1和微卫星遗传不稳定性。结果:Evi1和MDS1-Evi1基因阳性表达率分别为51·9%(14/27)和62·9%(17/27)。其中低危组RA/RAS和高危组RAEB/RAEB-T/CMML的Evi1基因总表达率分别占14·8%(4/27)和37·0%(10/27),MDS1-Evi1基因总表达率分别占25·9%(7/27)和37·0%(10/27);MDS患者WT1表达阳性率为55·6%(15/27),低危组RA/RAS和高危组RAEB/RAEB-T/CMML的WT1基因总表达率分别占14·8%(4/27)和40·7%(11/27);MDS患者微卫星遗传不稳定性检测结果表明,6例RA患者中发生Mfd27位点LOH0例,MI1例,9p21位点发生LOH1例,MI0例。5例RAS中发生Mfd27位点LOH2例,MI0例,9p21位点发生LOH0例,MI0例,低危组RA/RAS患者发生LOH或MI的共4例。7例RAEB中发生Mfd27位点LOH2例,MI0例,9p21位点发生LOH0例,MI1例,7例RAEB-T中发生Mfd27位点LOH1例,MI3例,9p21位点发生LOH0例,MI1例,2例CMML中1例Mfd27位点发生LOH。高危组RAEB/RAEB-T/CMML患者发生LOH或MI的共9例。结论:WT1、Evi1和微卫星遗传不稳定性与MDS发生和演变有关。

桑银降糖胶囊在体外对猪胰岛细胞增殖及分泌功能的影响

目的观察桑银降糖胶囊对体外培养猪胰岛细胞分泌功能的影响。方法体外分离纯化猪胰岛细胞进行单层细胞培养,链脲霉素(STZ)处理后分别与桑银降糖胶囊及其组分桑叶多糖、牛磺酸、银杏黄酮等共同孵育24、48 h,用放射免疫法检测培养液中胰岛素、C肽水平;光镜下观察细胞形态变化;MTT法检测胰岛细胞增殖情况。结果与其他组分比较,桑银降糖胶囊可明显提高培养液中胰岛素、C肽水平,胰岛β细胞数目明显增多。结论桑银降糖胶囊可减轻STZ对胰岛β细胞的损伤,促进胰岛细胞增殖,并使损伤的胰腺恢复正常功能,增强胰岛素的分泌功能。

MDS患者细胞因子、端粒酶活性及凋亡相关蛋白检测与意义

探讨骨髓细胞凋亡和MDS患者无效造血的分子机制。采用ELISA法检测血清细胞因子水平。PCR ELISA法测定骨单个核细胞端粒酶活性。流式细胞仪分析Fas和Bcl 2表达水平。结果 :初发各亚型MDS患者的血清TNF α水平均高于正常对照 (P <0 0 5 ) ,MDS患者骨髓单个核细胞或基质细胞分泌TNF α水平均高于正常对照组。血清IL 1α和G CSF升高者分别为10 7% (3/ 2 8)例和 5 3 6 % (15 / 2 8)。MDS患者血清IL 8和IL 6高于正常对照组 ,各亚型之间无明显差别。在MDS向恶性克隆演变的过程 ,端粒酶活性水平随着恶性演变而逐渐升高。随着MDS患者恶性类型的演变 ,Fas基因表达逐渐降低 ,Bcl 2表达则逐渐升高。负性造血因子TNF α升高和抗凋亡Bcl 2的消长与MDS骨髓细胞凋亡有关。

糖克丸降糖机理的实验研究

目的 :探讨中药糖克丸的降糖机理。方法 :手术切除胰腺法制备糖尿病实验犬模型。糖克丸为纯中药制剂。血糖测定用微量血糖测试仪。血清胰岛素水平和C肽测定均为实验室常规方法。结果 :胰腺完全切除组与大部切除组的犬血清胰岛素均降至敏感值以下 ,实验组用糖克丸灌喂后可使胰岛素水平恢复至 5 .9～ 9.19μIU/ml,血清C肽不随胰岛素的升高而升高 ,反而有降低趋势。结论 :糖克丸在ATP的辅助下 ,有可能促使外分泌腺和 /或导管细胞转分化成胰岛素表达的 β细胞。

三龙丹药效学研究

探讨中药三龙丹抗肿瘤的作用机制,为临床用药提供理论依据。①体内抑瘤实验:阳性对照组给予环磷酰胺;中药组分别给予不同剂量的三龙丹药物。②体外抑瘤实验:将受试药物三龙丹稀释成1:10、1:20、1:1280等浓度,然后接种于多孔培养板内的HEL和NKM上,观察细胞病变, 计算抑瘤指数。③三龙丹对SOD和MDA的影响:用微量快速检测法测定SOD和MDA的含量。结果显示,中药三龙丹对W256肿瘤具有显著抑制作用;该药在1:80药物浓度时(最大抑瘤浓度) 抑制肿瘤靶细胞的效应最大;同时,还能明显提高小鼠血中SOD的活性和降低MDA代谢产物。提示,中药三龙丹对体内肿瘤W256、体外靶细胞NKM和小鼠血中SOD、MDA具有显著影响。

供受体混合骨髓移植GVHD反应的动物实验研究

目的观察混合骨髓移植的GVHD反应。方法以急性放射病BALB/C小鼠(H-2d)为受鼠,C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠。供体鼠骨髓和脾细胞中混合一定比例的受体鼠脾脏细胞,进行混合骨髓移植。观察移植后小鼠死亡率、白细胞系造血重建、脾结节、体内混合淋巴细胞培养、嵌合体及病理学改变,观察混合骨髓移植方式的GVHD反应。结果异基因骨髓移植组发生明显的GVHD反应。供受鼠脾脏3∶1混合骨髓移植不能明显降低GVHD反应,供受鼠脾细胞比例1∶1和2∶1移植组可以明显减轻GVHD反应。表现为外周血白细胞及骨髓造血恢复快,体内混合淋巴细胞反应降低及嵌合体百分率升高。结论混合骨髓移植方式可以降低GVHD反应,并与同基因和异基因脾细胞比例有关。