莱州湾单环刺螠工厂化繁育关键技术研究

近年来,由于捕捞强度逐年增大和生存环境污染等因素,单环刺螠野生资源数量呈连年锐减态势,市场供不应求,价格飙升,单环刺螠养殖潜力和发展空间巨大。本文对单环刺螠不同养殖阶段关键技术进行研究,探索出较为成熟、可行的工厂化繁育新模式,以期为北方开展单环刺螠增养殖和海洋生态修复提供技术支持。

加快潍坊市海洋药物和生物制品产业发展的初步研究

海洋药物和生物制品业作为新兴海洋产业,在海洋产值中所占份额逐年增加,发展潜力巨大。近年来,潍坊加快推进海洋药物和生物制品产业高端优质项目培育和集聚,以人才和项目建设为突破,强化和加速海洋医药关键技术攻关及发展,整体产业发展呈良好态势。为充分摸清潍坊海洋药物和生物制品产业底数,着力提升整体产业创新能力,推动产业突破性发展,本文从产业发展现状与优势出发,深入剖析研发创新、集聚发展和产业链等方面制约产业发展的问题短板,提出突破发展的对策和建议,以期更好地打造海洋高质量发展新要地。

对加快潍坊市水产养殖业绿色健康发展的研究

随着近海渔业资源衰退和国家捕捞总量控制的实施,水产养殖成为今后渔业发展的主要增量。我国水产养殖业发展较快,增速远高于渔业捕捞业,已成为占渔业产量78%以上的渔业基础性产业。水产养殖业是山东省潍坊市的传统优势产业,产量位居山东省前列,在海洋经济中占据着重要地位,同时存在着养殖容量过大、养殖废水排放、生态红线区养殖等制约因素,加之环渤海综合治理、环保督察等生态环境监管政策的收紧,工厂化和池塘养殖受挫严重,传统粗放养殖模式已不适应当前经济发展形势。

人类胚胎嗅球嗅鞘细胞质量标准

为严格控制人类胚胎嗅鞘细胞培养和临床使用准备过程中诸多环节的质量,制定了人类胚胎嗅球嗅鞘细胞培养操作规范。因为完善的操作流程,可以最大限度的减少人为因素,确保细胞质量的稳定性。所以对嗅鞘细胞来源的标本要求,要严格规定人类胚胎嗅球嗅鞘细胞培养过程中的实验室条件以及细胞培养的规范,对操作中关键步骤进行严格规范要求,质控嗅鞘细胞冻存和复苏过程,提出细胞培养中微生物污染的检测方法,减少应用风险,为人类胚胎嗅球嗅鞘细胞临床使用提供高质量保证。

人胚嗅球嗅鞘细胞原代培养的实验研究

目的拟建立人胚胎嗅球嗅鞘细胞的培养方法并探讨这些细胞在活性、纯度方面是否具备临床应用水平。方法用含有促进细胞生长的谷氨酰胺、转铁蛋白、生物素、硒酸纳的无血清纯化液纯化嗅鞘细胞,胰蛋白酶消化收集细胞,制成单细胞悬液。采用台盼蓝染色法进行活性测定,P75NGFR和S-100双标免疫荧光染色鉴定,以Hoechst复染鉴定OECs的纯度。结果可见比较典型的嗅鞘细胞:双极或梭形、多突起形和扁圆形,主要以梭形和多突起形细胞为主。细胞活性大于95%,纯度大于90%。结论实验建立的人胚胎嗅球嗅鞘细胞原代培养的方法可行,细胞活性大于95%,纯度和均一性已达到临床应用水平。

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤后顽固性神经性疼痛17例报道

目的探讨嗅鞘细胞移植对脊髓损伤后顽固性神经性疼痛的治疗效果。方法对细胞学治疗后获得疗效的脊髓损伤合并顽固性神经性疼痛患者的临床资料进行总结。2004年11月～2007年11月间的17例患者,其中男性15例,女性2例,年龄18～68岁,平均40.4岁。受伤6～312个月,平均105.9个月,受伤原因包括车祸、坠落、放射性损伤、机器挤压伤、枪伤、跳水。疼痛持续时间6～309个月,平均102.2个月。嗅球嗅鞘细胞胰蛋白酶消化成单细胞后培养12～14d。细胞移植到损伤段的上下两端。疼痛评价使用国际神经修复学会脊髓损伤日常生活功能评价量表:0分为极度疼痛,止痛药无效;1分为中度疼痛,需用强效止痛药;2分为轻度疼痛,普通止痛药有效;3分为无疼痛。结果随访时间0.5～88个月,平均17.5个月,疼痛平均改善1.2分。结论嗅鞘细胞移植对脊髓损伤后神经性疼痛有一定治疗作用。

脑内神经网络修复关键点的临床验证

背景:细胞移植的安全有效靶点选择,是临床研究的重要方向。对脑内是否存在能发挥重要治疗作用的点或区域,以最大限度对神经网络发挥良性影响进而修复,是研究先行者必须优先考虑的课题之一。目的:通过临床资料分析,证实细胞移植脑内神经网络修复关键点(KPNNR)理论的客观性、真实性和实用性。方法:2003-05/2009-01共有631例各类中枢神经系统疾病患者接受神经网络修复关键点嗅鞘细胞移植,其中609例资料齐全,男392例,女217例;年龄1.2～84(42.87±19.64)岁,病程0.4～35(5.11±5.46)年。疾病分布:肌萎缩侧索硬化432例次、脑性瘫痪110例次、多发性硬化25例次、共济失调12例次、多系统萎缩7例次、遗传性痉挛性截瘫6例次、持续性植物状态6例次、痴呆2例次、脑缺氧后遗症2例次、帕金森叠加综合征2例次、非特异性脑炎后遗症2例次、肾上腺脑白质营养不良1例、核黄疸后遗症1例、皮质基底核变性1例。患者来自75个国家或地区。结果与结论:细胞移植后随访2～8周,平均4周,609例次中526例次神经功能获不同程度改善,近期总改善率为86.37%,其中肌萎缩侧索硬化改善率为87.96%。脑性瘫痪改善率为82.7%,特别是4例伴有癫痫者,术后发作明显减少。共济失调改善率为83.3%。遗传性痉挛性截瘫改善率为83.3%。围手术期出现不良事件共33例次,发生率为5.4%,主要为术后头痛、发热等,多经对症治疗后痊愈。结果提示,大脑内神经网络修复关键点(KPNNR)客观存在,在该点进行嗅鞘细胞移植安全可行,能改善多种中枢神经系统疾病患者的神经功能和(或)延缓病情的进行性恶化。

成人鼻腔嗅区黏膜细胞的分离培养与免疫学特点

目的探讨成人鼻腔嗅区黏膜细胞的分离培养方法及嗅鞘细胞(OECs)的免疫学特点。方法通过手术取成人嗅区黏膜7例,将其消化为单个细胞后采用差速贴壁法除去成纤维细胞。倒置显微镜下行形态学观察,并利用p75、S100、GFAP抗体对嗅鞘细胞进行免疫荧光化学染色,共焦显微镜下进行各种抗体阳性率的统计。结果共焦显微镜下可见嗅黏膜细胞中S100和p75阳性细胞多见,GFAP阳性细胞在嗅黏膜细胞中较少见。一般在同一细胞上可见S100和p75共同表达,而GFAP与S100、p75未见有共同表达现象;p75阳性细胞胞体大小和形态也大不相同。经统计S100和p75阳性细胞的平均百分率为(35.0±8.3)%。结论成功进行了成人鼻腔嗅区黏膜细胞的分离培养。

人骨髓基质细胞培养、纯化和鉴定

目的：介绍一种为临床细胞学治疗提供自体骨髓基质细胞（BMSCs）的分离纯化方法。方法：采用红细胞沉降和密度梯度离心相结合的分离纯化方法从骨髓血中分离BMSCs。台盼蓝染色实验测定BMSCs活力；对BMSCs进行CD44、CD34抗体免疫荧光显色，激光共聚焦显微镜观察。结果：BMSCs活性大于95％，纯度大于85％，细胞的纯度和均一性均符合中国卫生部第三类医疗技术的要求，已达到临床应用标准。结论：本细胞制备方法简单易行，可批量获得BMSCs，满足临床治疗的需要。

疼痛神经修复学细胞移植干预策略治疗慢性疼痛8例

目的：探讨静脉细胞移植治疗慢性疼痛的安全性和有效性,提出疼痛神经修复学干预新策略。方法：2010年3~8月,采用一次静脉输注（1.1~1.5）×107个脐带间充质基质细胞治疗8例慢性疼痛患者,使用疼痛评估采用数字评分法评定疗效。结果：7例患者在治疗后1~3 d内疼痛大部缓解或完全消失,1例30 d后明显缓解。随访时间1~6个月,无任何不良事件发生。术前疼痛平均分为（7.3±1.0）分,随访平均分为（1.1±0.2）分（P〈0.001）。结论：疼痛神经修复学细胞移植干预策略治疗慢性疼痛简便、安全,能迅速缓解严重的顽固性疼痛,是疼痛治疗的最新研究方向,前景广阔。

日本对虾养殖技术之二 日本对虾育苗水质调控技术探讨

自上世纪九十年代爆发大规模虾病以来,日本对虾以其生长快,肉质鲜美,抗病力强及运输成活率高等优点成为南北方重要养殖品种。但在苗种培育中,因种种原因经常出现蚤状及糠虾幼体发育停滞,进而大量死亡导致育苗失败现象,蚤状幼体阶段尤为突出。针对这一问题,笔者结合多年对虾育苗经验,于2003年￣2005年在山东省潍坊市第二海水养殖试验场,从水质处理与控制角度,本着改良水质、优化幼体发育环境,强化幼体体质,促进变态的方向进行深入探讨,取得了良好效果。

嗅鞘细胞移植入淀粉样前体蛋白转基因小鼠脑内降低β淀粉样蛋白沉积

目的观察嗅鞘细胞移植入淀粉样前体蛋白(APP)转基因小鼠脑内后的存活和迁移状况及其对模型β淀粉样蛋白沉积的作用,以进一步探索嗅鞘细胞移植对阿尔茨海默病的治疗效果。方法取自发绿色荧光蛋白的新生3d龄增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠,体外分离培养嗅球嗅鞘细胞,在小鼠脑立体定位仪的固定下,参照AP小鼠脑立体定位图谱,将收集的嗅鞘细胞移植入APP转基因小鼠脑内。移植1个月后,取脑组织冷冻切片,在双光子共焦显微镜下观察细胞存活和迁移状况并采集图像。移植1个月后,行荧光免疫组织化学和免疫印迹法检测淀粉样蛋白沉积,每组4只。结果嗅鞘细胞移植入APP转基因小鼠脑内存活良好,并以移植点为中心向外迁移,部分绿色荧光细胞呈现成血管现象,移植之后APP转基因小鼠脑内的β淀粉样蛋白沉积减少,APP表达明显减少(P<0.05)。结论嗅鞘细胞对减少APP转基因小鼠脑内淀粉样蛋白沉积有一定帮助。

两种冻存液中海马神经元细胞复苏后生物学特性比较

目的：建立海马神经元适宜的冻存方法。方法：将新生24h以内的大鼠海马消化成单个细胞后分别直接冻存于血清浓度不同的冻存液中，复苏后进行台盼蓝染色观察细胞活性；培养后观察其生长状态并在第7天固定细胞，分别进行Hoechst，微管蛋白（Tubulin）和神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）显色后，荧光显微镜下计数海马神经元、胶质细胞的百分率，从而建立最佳冻存方法。结果：冻存于高浓度血清冻存液中的神经元百分率为87．5％，冻存于低浓度血清冻存液中的神经元百分率为73．8％，高浓度血清冻存液中的细胞复苏后的状态及神经元存活率明显优于保存于低浓度血清冻存液中的；而冻存于高低浓度血清冻存液中的胶质细胞百分率分别为9．5％和16．5％，胶质细胞在高浓度血清的相对含量明显低于低血清组。结论：高浓度血清冻存液更利于海马神经细胞冻存后的复苏和生长。

亲虾越冬需采取的几项技术措施

亲虾越冬是指冬季自然水温低于7℃期间,采取自然或人工措施,使亲虾度过漫长冬季的一项管理过程,其目的是促使卵巢缓慢的正常发育.

庭院房顶科学养鳅技术

山东省昌乐县养鳅大王冯子祥,利用居住楼房顶部,加以改造,建成鳅池,通过科学喂养管理,获得良好的经济效益,被当地群众称之为投资少、见效快,不占土地,发展庭院经济,快速致富的好项目。现将其科学养殖技术总结如下: 1.鳅池建造 建造鳅池的房顶,是加强型钢筋混凝楼板,顶部做防渗水处理。池壁为“外二四墙,

塑料大棚人工调控养殖海蜇技术

海蛰是大型海洋食用水母,它味鲜质脆,广受人们喜爱,过去一直以自然捕捞为主,最近两三年,因其生长快、养殖成本低、市场销路好、经济效益高,而一跃成为水产养殖的热点之一,各地纷纷进行了各种形式的试养.

对虾亲虾越冬需重视的几项技术措施

对虾亲虾越冬是指在冬季自然水温低于7℃时,采取多种措施使亲虾安全过冬。此项工作需历经5个多月,稍有疏忽或不慎。