RNAi研究进展

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是由双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)引发的转录后基因静默机制.RNAi 是真核生物中普遍存在的抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因表达的监控机制.目前已成功用于基因功能和信号转导系统上下游分子相互关系的研究,有可能为肿瘤基因治疗提供新策略.

P21^(ras)在胰腺疾病组织中的表达及其意义

目的 :探讨 P2 1ras在胰腺疾病组织中的表达和临床意义。方法 :应用 En Vision显色系统免疫组化方法分别检测胰腺癌组织 (2 4例 )、癌周组织 (77例 )、手术切缘正常组织 (16例 )和慢性胰腺炎组织 (2 4例 )中 P2 1ras的表达情况。结果 :P2 1ras在胰腺导管腺癌组织中的表达阳性率为 5 8.3% (14 / 2 4 ) ,与慢性胰腺炎胰腺导管增生组织的 4 5 .8% (11/ 2 4 )相比差异无显著性(P>0 .0 5 ) ;P2 1ras在良、恶性胰腺疾病增生性病变中的表达阳性率为 36 .6 % (30 / 82 ) ,与正常胰腺组织 (0 % )相比有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ;P2 1ras蛋白在正常胰腺组织、导管增生性病变、导管不典型增生中的表达阳性率呈渐进过程 ,而且增生性导管病变与不典型增生 (78.9% )相比差异显著 (P<0 .0 5 )。 结论 :P2 1ras过度表达在胰腺导管细胞向恶性转变的过程中起作用。

pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Gro α真核表达质粒的构建及鉴定

目的:构建并鉴定真核表达质粒pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Groα. 方法:据GeneBank中大鼠MCP-1和GroαcDNA序列设计并合成引物,提取急性胰腺炎模型大鼠总RNA,RT-PCR 扩增,并将扩增产物TA克隆至pGEM-T easy载体,然后分别双酶切pGEM-MCP-1和pGEM-Groα回收目的片段再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+). 结果:pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Gro α真核表达质粒构建完成后,用限制性内切酶、PCR及DNA序列分析等多种方法进行鉴定,证实其构建成功. 结论:pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Groα真核表达质粒构建成功,为进一步研究该真核表达质粒的免疫保护效果及制备急性胰腺炎pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-GroαDNA疫苗奠定了基础.

K-ras基因在胰腺癌和慢性胰腺炎中突变和表达异常及其临床意义

目的:探讨Ras蛋白过度表达与胰腺癌和慢性胰腺炎临床病理的关系,以及K-ras突变在慢性胰腺炎中的临床意义和在胰腺癌诊断中的价值. 方法:应用EnVision显色系统免疫组化方法分别检测胰腺癌组织(24例)、癌旁组织(77例)、手术切缘正常组织(16例) 和慢性胰腺炎(24例)石蜡包埋组织中P21 ras的表达情况.应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)方法分别检测胰腺癌、癌旁组织、手术切缘正常组织、慢性胰腺炎石蜡包埋组织的K-ras突变并进行DNA测序确认. 结果:P21ras在胰腺导管腺癌组织中的表达阳性率为58.3% (14/24),与慢性胰腺炎胰腺导管增生组织的P21ras表达阳性率45.8%(11/24)相比,二者差异无显著性(P>0.05); P21ras在良、恶性胰腺疾病增生性病变中的表达阳性率为36.6%(30/82),与其在正常胰腺组织中的表达阳性率(0%) 相比,有显著性差异(P<0.05);P21ras蛋白在正常胰腺组织、导管增生性病变、导管不典型增生中的表达阳性率分别为0%、36.6%和78.9%,呈渐进过程,而且增生性导管病变与不典型增生相比,P21ras表达阳性率的差异具有显著性(P<0.05).胰腺癌K-ras12密码子突变率(79%)显著高于慢性胰腺炎(33.3%)(P<0.01),且在切缘正常组织→癌周导管增生→癌周不典型增生→胰腺癌过程中,突变率有逐渐上升的趋势.突变方式以12密码子GGT→GAT、GTT、CGT为主且同1例患者突变方式一致. 结论:P21ras过度表达和K-ras基因突变在胰腺癌发生中起到作用,但K-ras基因突变作为胰腺癌诊断的分子标志缺乏特异性.

胰头部肿块型胰腺炎的临床特征及K-ras基因突变

目的 分析胰头部肿块型胰腺炎临床特征及K-ras基因突变以明确其与胰腺癌关系。方法 回顾性分析临床及随访资料并应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP）方法分别检测胰头部肿块型胰腺炎、胰腺癌、癌旁导管增生、手术切缘正常组织、石蜡包埋组织的K-ras突变。结果胰头部肿块型胰腺炎和胰头癌血清总胆红素、CA19-9、ERCP检查结果的差异有助于两者的鉴别诊断;肿块型胰腺炎增生导管K-ras突变率为40％（6/15）,与癌周增生导管31.2％（10/32）的突变率相近,但显著低于胰头癌83.3％（15/18）的突变率,且胰腺炎手术后患者随访至2000年12月均健在旦未发现胰头癌的临床表现。结论 良性胰腺疾病导管增生存在K-ras突变并不一定向恶性发展。

CFTR基因突变与特发性慢性胰腺炎

慢性胰腺炎发病机制中遗传因素的作用,目前尚未完全明确。研究表明,特发性胰腺炎患者可有CFTR基因突变。现就CFTR基因突变及其与特发性胰腺炎之间关系作一综述。

胰管刷检标本K-ras基因突变检测在胰腺癌诊断中的作用

目的 :探讨胰管刷检标本 K- ras基因突变检测在胰腺癌诊断中的价值。 方法 :应用突变富集聚合酶链反应 (PCR) -单链构象多态性 (SSCP)法检测胰腺疾病胰管刷检标本 K- ras基因第 1外显子第 12密码子点突变。结果 :35例胰管刷检标本PCR扩增均获成功 ,成功率 10 0 %。 2 0例胰腺癌中 14例检测到 K - ras突变 ,7例慢性胰腺炎 1例 K- ras突变 ,两组间差异显著(P<0 .0 5 )。胰腺囊腺瘤、十二指肠乳头癌均未见 K- ras突变。胰管刷检标本 K- ras突变与胰腺癌部位无关。胰管刷检 K- ras突变检测诊断胰腺癌的敏感性、特异性、准确性分别为 70 %、94 %、83%。结论 :检测胰管刷检标本中 K - ras基因突变有助于提高胰腺癌的诊断 ,具有良好的临床应用前景。

重组幽门螺杆菌过氧化氢酶对结肠粘膜上皮细胞氧化应激的影响

目的探讨重组幽门螺杆菌过氧化氢酶(rHpCAT)对大鼠结肠粘膜上皮细胞氧化应激的影响。方法在分离培养正常大鼠结肠粘膜上皮细胞的基础上,利用FeSO4+H2O2反应产生羟自由基攻击制备结肠粘膜细胞氧化损伤模型,同时预先加入rHpCAT并观察损伤减轻程度。实验设正常对照组、模型对照组、5-氨基水杨酸给药组(0.1 mmol/L)、重组幽门螺杆菌过氧化氢酶给药组(1×105、1×106、1×107 U/kg·b.w.)。培养一定时间后,取上清测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA) 和髓过氧化物酶(MPO)的活性进行测定,并同时测定上述各组谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果模型组大鼠结肠粘膜上皮细胞MDA、LDH和MPO水平增高,CAT、GSH-Px和SOD含量减少。不同单位rHpCAT呈剂量依赖性的减少LDH释放,抑制MDA和MPO的形成,而使CAT、GSH-Px及SOD恢复到正常水平。结论重组幽门螺杆菌过氧化氢酶对大鼠结肠粘膜氧化损伤具有保护作用。

特异性PCR法检测胰腺癌p16基因甲基化改变

目的 探讨胰腺癌p16基因启动子区5’CpG岛甲基化改变的特点及其与临床病理特征的关系。方法 应用甲基化特异性PCR法进行甲基化检测。结果 14/36例胰腺癌标本的p16基因启动子区5’CpG岛检测到甲基化,甲基化频率为38.9％,5例癌旁组织、1例正常胰腺组织、7例慢性胰腺炎及2例胰腺粘液性囊腺瘤未发现相应区域的甲基化。结论 p16基因启动子区5’CpG岛甲基化是胰腺癌p16基因失活的机制之一,是胰腺癌细胞区别与正常细胞的分子事件。检测p16基因甲基化可能有助于胰腺癌的诊断及鉴别诊断。

狙击幽门螺杆菌:征战“溃疡”3大战役

抗酸,保护胃黏膜,促进溃疡愈合——这是人们对治疗 消化性溃疡(包括胃溃疡和十二指肠溃疡)的传统认识和 治疗方法,也有不少患者经此治疗后溃疡病好转。然而, 现在患了溃疡病到医院就诊,医生不仅要求患者服用抗酸 或抑酸药物,而且还开出了针对细菌的抗生素。这是为什 么呢?

上消化道出血的急救

著名画家陈逸飞因“肝硬化,门静脉高压食管胃底静脉曲张破裂大出血”在上海华山医院突然去世,终年59岁。尚在英年的陈逸飞过早辞世除了提醒我们应对肝病加以重视以外,也提醒我们对上消化道出血这一常见急症,应该掌握最起码的辨识方法和院前急救方法,为院内急救争取更多的机会。

第2战 联合多“兵种”作战——药物治疗：抑酸抗菌双管齐下

发现幽门螺杆菌之后，治疗原则由过去的单纯抗（抑）酸转变为抗（抑）酸与抗幽门螺杆菌并重，世界各大药厂纷纷投巨资开发相关药物，使得原本治疗困难极易复发的溃疡病变成了短期治疗就可治愈的疾病。

K-ras基因在胰腺疾病中突变的检测及其临床意义

目的 探讨K ras基因突变在胰腺疾病中的临床意义和在胰腺癌诊断中的价值。方法 应用聚合酶链反应 单链构象多态性分析 (PCR SSCP)方法分别检测胰腺癌、癌旁组织、手术切缘正常组织、慢性胰腺炎石蜡包埋组织的K ras突变并进行DNA测序确认。结果 胰腺癌K ras 12密码子突变率 (79.2 % )显著高于慢性胰腺炎 (33.3% ,P <0 .0 1) ,且在切缘正常组织→癌周导管增生→癌周不典型增生→胰腺癌过程中 ,突变率有逐渐上升的趋势。突变方式以 12密码子GGT→GAT、GTT、CGT为主且同一例患者突变方式一致。结论 K ras基因突变在胰腺癌发生中起作用 ,但K ras基因突变作为胰腺癌诊断的分子标志缺乏特异性。

荷花

一朵纤尘不染的荷花， 从池塘中探出头， 宛如一位少女。 娴静地坐在碧枝翠叶间。