细胞穿透肽递送的流感病毒M2胞外区通用DNA疫苗在小鼠体内的免疫效力

目的设计通用甲型流感病毒DNA疫苗,并检测其在小鼠体内的免疫效力。方法合成含H1N1、H3N2、H9N2亚型甲型流感病毒M2(3M2e)胞外结构域的DNA序列,克隆至载体pVAX1中,构建真核表达质粒pVAX1-3M2e。将质粒pVAX1-3M2e分别与细胞穿透肽(cell penetrating peptides,CPPs)RVG9dR、Protamine、RVG9dR+Protamine多肽复合物(质量分数1∶1)按不同质量分数混合(1∶0.5、1∶1、1∶2、1∶4、1∶8),进行凝胶阻滞试验,以确定DNA与CPPs的正确结合;并通过细胞荧光试验在细胞水平(293T细胞)检测CPPs的递送效率。选择RVG9dR+Protamine递送质粒pVAX1-3M2e经肌内免疫雄性BALB/c小鼠(多肽复合物两种剂量:25μg pVAX1-3M2e+500μg多肽复合物、50μg pVAX1-3M2e+1000μg多肽复合物,每组8只小鼠),检测通用甲型流感病毒DNA疫苗对3种亚型流感病毒(H1N1、H3N2、H9N2)的交叉保护作用。结果DNA与RVG9dR、Protamine、RVG9dR+Protamine的最佳结合比分别为1∶2、1∶2、1∶1;RVG9dR+Protamine在1∶20的质量分数下对质粒pVAX1-3M2e具有超强的递送效率;50μg pVAX1-3M2e+1000μg多肽复合物对3种亚型流感病毒攻毒组小鼠的保护率均为100%。结论由RVG9dR+Protamine多肽复合物递送的质粒pVAX1-3M2e在小鼠中提供了针对3种亚型甲型流感病毒的交叉保护。