大鼠脂肪间充质干细胞的分离、培养及其向少突胶质前体细胞的诱导分化

目的改良酶消化法提取脂肪间充质干细胞(ADSCs),并探讨诱导其分化为少突胶质前体细胞(OPCs)的可行性,为脱髓鞘疾病治疗种子细胞来源提供有效途径。方法取SD大鼠腹股沟区脂肪,Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶联合消化法分离培养ADSCs,Ⅰ型胶原酶组作为对照,细胞计数,观察细胞形态。取第3代细胞,流式细胞术检测细胞的表面标志物CD29、CD90和CD45;成脂诱导,油红O染色;利用干细胞分化培养液及OPCs培养液将ADSCs诱导为OPCs,免疫荧光检测α-N-乙酰基神经氨酸α-2、8-唾液酸转移酶1(A2B5)、NG2;利用OPCs培养液继续培养OPCs分化为少突胶质细胞(OLs)。结果Ⅰ型胶原酶组分离的ADSCs为(9.143±0.5084)×10^(7)/L,联合酶组为(13.43±0.4809)×10^(7)/L,联合酶组较Ⅰ型胶原酶组ADSCs数量多,差异有统计学意义(P<0.05,n=7);细胞形态观察显示,ADSCs贴壁生长,呈长梭形;流式细胞术检测CD29阳性率为99.8%,CD90阳性率为99.4%,CD45阳性率为0.35%;成脂诱导后倒置光学显微镜下可见脂滴,油红O染色脂滴呈红染;ADSCs向OPCs诱导第16天,A2B5和NG2表达阳性,A2B5阳性率为(87.03±0.94)%,NG2阳性率为(90.07±0.96)%;继续培养OPCs 3 d,其分化为OLs,髓鞘碱性蛋白(MBP)表达阳性。结论联合酶消化较单独胶原酶消化获取的细胞数量多,分离培养的细胞符合ADSCs的特征,体外可诱导分化为OPCs。