miRNA-204对宫颈癌SiHa细胞放疗敏感性的影响

目的:探讨微小RNA(miR)-204过表达对宫颈癌SiHa细胞放疗敏感性的影响。方法:分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测放疗敏感组、放疗抵抗组的宫颈肿瘤组织和宫颈癌Me180、SiHa细胞中miRNA-204的表达情况。克隆形成实验验证宫颈癌细胞株(Me180、SiHa)的放疗敏感性。利用LV(pGV369/EGFP+Puro)慢病毒载体,将LV-miR-204过表达病毒和LV-miR-NC(miR-Negative Control)转染到SiHa细胞株中,CCK-8方法检测在放射剂量照射下各组宫颈癌SiHa细胞的增殖情况及流式细胞术检测放射剂量照射前后各组SiHa细胞凋亡情况。结果:qPCR结果显示,miR-204在放疗抵抗组宫颈鳞癌组织中表达水平显著低于放疗敏感组,在SiHa细胞上的表达量显著低于Me180细胞,差异均有统计学意义(均P<0.05)。克隆形成实验结果显示,在6MV-X线8 Gy的照射条件下,SiHa及Me180细胞的存活分数(SF)相差最大,SiHa细胞呈现放疗抵抗。CCK-8和流式细胞凋亡实验结果显示,在放疗剂量照射下,转染了过表达LV-miR-204的SiHa细胞存活率明显下降,凋亡率明显上升(P<0.05)。结论:miR-204在放疗抵抗的宫颈鳞癌肿瘤组织和SiHa宫颈癌细胞中均呈低表达,过表达miR-204使SiHa宫颈癌细胞在放疗照射后抑制增殖和促进凋亡,进而影响放疗敏感性。

宫颈鳞癌放疗抵抗中异常表达lncRNA相关ceRNA网络的构建与分析

目的:旨在基于TCGA数据库构建宫颈鳞状细胞癌(CSCC)放疗抵抗竞争性内源性RNA(ceRNA)网络,鉴定潜在的预测放疗疗效生物标志物及探讨放疗抵抗的机制。方法:依据纳入研究标准在TCGA数据库的宫颈癌数据集中筛选出23个CSCC放疗抵抗与67个放疗敏感样本的RNA表达谱数据,运行R"edger"包鉴定差异表达lncRNAs、miRNAs和mRNAs,基于miRcode、TargetScan和miRTarBase数据库构建ceRNA网络并通过Cytoscape软件可视化。进一步结合KEGG、GO及生存分析等生物信息学方法筛选出关键分子。结果:设定阈值为|log2差异倍数(FC)|>1.5且FDR<0.05,共鉴定出237个DElncRNAs,16个DEmiRNAs和565个DEmRNAs,其中17个DElncRNAs、3个DEmiRNAs和15个DEmRNAs参与构建ceRNA网络。DEmRNAs富集到3个GO术语和8个KEGG途径(P<0.05)。5个DElncRNAs在不同临床病理特征中有显著差异(|log2FC|>2且FDR<0.05)。结论:成功构建CSCC放疗抵抗特异性lncRNA相关的ce RNA网络,鉴定了预测CSCC放疗疗效分子标志物,为理解CSCC产生放疗抵抗的机制提供理论依据。