日本血吸虫平衡型核苷转运蛋白3基因(SjENT3)的RNA干扰研究

血吸虫以雌雄合抱的方式生存,雌虫在合抱后才能发育成熟,雄虫通过某种非精子传递的机制调控血吸虫雌虫的生长发育,而成熟雌虫所产大量虫卵是血吸虫导致宿主严重病理损害和疾病再传播的根源,因此,了解雄虫对雌虫发育的调控对血吸虫的致病和传播具有重要意义.本实验室前期蛋白质组学研究结果显示日本血吸虫ENT3蛋白(SjENT3)在两性感染的合抱雄虫体内的表达高于其在单性感染雄虫体内的表达.本研究通过qRT-PCR发现SjENT3基因在日本血吸虫虫体各个检测时间点均转录,从7d到21d逐渐升高,在21d转录水平达到最高,随后逐渐下降;SjENT3基因在18,21,25,28,35,42d在合抱雄虫体内转录水平明显高于合抱雌虫;对合抱雄虫与单性感染雄虫转录水平分析发现其在21d,23d,25d 3个检测时间点与蛋白质组学结果一致,在合抱雄虫体内高表达.利用筛选出效果较好的siRNA对SjENT3在血吸虫体内的转录进行长期干扰,结果发现:特异siRNA干扰显著影响SjENT3转录水平,和NC对照组相比,干扰引起宿主虫荷率下降24.44%(P<0.05),宿主肝脏荷卵率下降57.47%(P<0.01),干扰后雌虫肝产卵能力下降42.28%(P<0.01).本研究结果初步表明SjENT3基因参与日本血吸虫尤其是雄虫的生长发育,并可能与血吸虫雌雄虫合抱及其相互间信息传递有一定的关系.

日本血吸虫融合表达抗原rSjELAV-like 1和rSjELAV-like 2的免疫保护研究

本研究通过克隆、表达、纯化日本血吸虫胚胎致死异常视觉基因1和2(SjELAV-like 1和SjELAV-like 2),并将获得的纯化蛋白rSjELAV-like 1和rSjELAV-like 2与206佐剂混合免疫BALB/c小鼠,评估rSjELAV-like 1和rSjELAV-like 2的免疫保护效果。结果显示:rSjELAV-like 1和rSjELAV-like 2在减轻宿主虫荷和肝卵方面均有一定的免疫保护作用,rSjELAV-like 2免疫可明显影响虫卵孵化能力;在第1次免疫后rSjELAV-like 2 的特异性IgG抗体水平与对照相比,呈显著升高,具有统计学意义。本研究结果表明,rSjELAV-like 2 比rSjELAV-like 1更适合作为疫苗候选分子,为日本血吸虫疫苗的研发奠定了物质基础。