基于16S rRNA测序对2型糖尿病患者肠道菌群特征的分析

目的分析比较2型糖尿病患者(T2D)与正常人群肠道菌群结构、丰度及多样性的差异。方法收集30例临床粪便样本(健康样本15例为研究组,2型糖尿病病例样本15例为对照组),应用Illumina MiSeq高通量测序技术进行Alpha、Beta多样性分析,比较研究组和对照组肠道菌群丰富度和多样性以及两组间的肠道菌群差异。采用Tax4Fun软件进行差异菌群功能预测。结果研究组和对照组OTU共有1565个,其中两组共有OTU为767个。与对照组比较,研究组肠道菌群α多样性下降;Unweighted Unifrac距离显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),β多样性存在差异。在门水平上,研究组中厚壁菌门(Fimicutes)、变形杆菌门(Proteobacteria)的相对丰度明显高于对照组,而拟杆菌门(Bacteroidetes)、放线杆菌门(Actinobacteria)、疣微菌门(Verrucomicrobiota)相对丰度低于对照组。在属水平上,研究组克雷伯氏菌(Klebsiella)、普拉梭菌(Faecalibacterium)的相对丰度明显高于对照组,狄氏副拟杆菌(Parabacteroides)、普雷沃菌(Prevotella)、艾克曼菌(Akkermansia)、双歧杆菌(Bifidobacterium)的相对丰度明显低于对照组。线性判别效应(LEfSe)分析发现糖尿病可选择克雷伯菌属作为关键的生物标志物,对照组可选择双歧杆菌属、艾克曼菌属、普雷沃氏菌属、狄氏副拟杆菌属作为关键的生物标志物。通过差异菌群进行KEGG代谢通路分析发现组间25条KEGG代谢通路存在显著差异,研究组的能量代谢和糖代谢等代谢途径均有上调。结论研究组和对照组肠道菌群丰度上具有显著差异,可作为2型糖尿病诊断和治疗靶标的候选标志菌群。

山莴苣苦素改善FFA诱导的HepG2细胞脂肪变性及氧化应激的研究

目的:研究山莴苣苦素对游离脂肪酸(FFA)诱导的HepG2细胞脂肪变性的改善作用,并初步探讨其可能作用机制。方法:观察山莴苣苦素对HepG2细胞活力的影响。采用FFA诱导培养HepG2细胞,构建脂肪变性模型(NAFLD体外模型),并用山莴苣苦素干预72h后,检测各组细胞内脂滴数量、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原性谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量和脂滴包被蛋白(Perilipin3)表达水平。结果:与模型组比较,山莴苣苦素干预能明显减少(P<0.05)细胞内脂滴数目、TG和TC含量,并能显著提高(P<0.05)SOD和GSH水平,显著降低(P<0.05)MDA含量以及Perilipin3表达水平,并有一定的剂量依赖性。结论:山莴苣苦素可显著降低FFA-HepG2细胞内脂滴数目、TG、TC和MDA含量,明显提高SOD和GSH水平,有效改善FFA诱导的HepG2细胞脂肪变性及氧化应激。因此,其作用机制可能与改变脂质代谢过程和缓解细胞内的氧化应激水平有关。

药桑不同部位中1-脱氧野尻霉素的提取工艺优化及含量测定分析

[目的]采用高效液相色谱-荧光法测定药桑不同部位1-脱氧野尻霉素(1-DNJ)含量。[方法]用AQC为衍生试剂进行衍生化反应,流动相为乙腈-乙酸铵(85∶15),流速1.0 mL/min,进样量10μL,最大激发波长250 nm,最大发射波长为395 nm下进行荧光检测;用正交试验考察最佳提取工艺条件。[结果]通过正交试验,得到最佳提取工艺为65%乙醇、料液比1∶150、超声功率150 W、提取次数2次、超声时间10 min,在最佳提取工艺下,桑叶、果实、桑枝中1-DNJ的含量分别是1.069%、0.341%、0.078%。[结论]高效液相色谱-荧光检测法操作简便、灵敏度高、准确可靠,可用于药桑不同部位的1-DNJ含量测定。

2型糖尿病气阴两虚患者血清胆汁酸代谢物的多元分析研究

目的研究2型糖尿病合并气阴两虚患者与正常气阴两虚患者血清胆汁酸的代谢差异。方法选取新疆医科大学第四附属医院2015年1月-2018年12月就诊的2型糖尿病气阴两虚患者30例及正常气阴两虚体检者25例,采集志愿者空腹血在3000 r/min离心10 min得到血清,采用超高效液相色谱-串联质谱分析仪(UPLC/MS-MS)检测血清样品中的29种胆汁酸含量。对检测所得的数据进行SPSS及多元统计分析,评价2型糖尿病中医的临床诊断分型并筛选出特征胆汁酸,对筛选出的胆汁酸临床诊断价值进行评估分析。结果与正常气阴两虚组比较,2型糖尿病气阴两虚组患者血清中甘氨氨熊脱氧胆酸、牛磺鹅脱氧胆酸、胆酸含量降低,差异有统计学意义(P<0.05),多元统计分析结果表明两组间样本区分显著,胆酸、甘氨熊脱氧胆酸、牛磺鹅脱氧胆酸、异石胆酸、熊脱氧胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸的含量在2型糖尿病气阴两虚患者中下降,与层次聚类分析结果一致,其中胆酸、甘氨熊脱氧胆酸、牛磺鹅脱氧胆酸变异重要性(VIP)>1,在两组间起着重要的作用。结合受试者工作特征(ROC)分析甘氨熊脱氧胆酸(AUC=0.71)、牛磺鹅脱氧胆酸(AUC=0.66)、胆酸(AUC=0.67)临床诊断效能较大,可作为2型糖尿病气阴两虚型患者的潜在生物标志物。结论2型糖尿病气阴两虚存在胆汁酸特征标志物。胆汁酸代谢谱可以对糖尿病气阴两虚证的临床分型提供诊断帮助。

响应面优化药桑椹多糖超声提取工艺及其抗氧化活性研究

为研究药桑椹多糖的超声提取工艺及体外抗氧化活性。以多糖得率为指标,采用单因素试验结合Box-Behnken响应面法得到最优的药桑椹多糖提取工艺。通过检测1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基,2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基,羟基自由基清除活性,铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)对药桑椹多糖的体外抗氧化活性进行研究。结果表明药桑椹多糖的最佳提取工艺为:超声功率100W,提取时间35min,液料比27mL/g,提取次数3次。在最优条件下,多糖得率为10.81%。体外抗氧化研究表明在质量浓度0.2~1.2mg/mL范围内,药桑椹多糖具有较强的抗氧化活性,其清除DPPH、ABTS、羟基自由基的最大清除率分别为71.21%、38.52%、62.57%,其在FRAP试验中,FRAP最大值为28.44。本研究为进一步研究药桑的药用价值提供了理论依据。

基于网络药理学-分子对接研究桑不同入药部位防治糖尿病的作用机制

采用网络药理学-分子对接研究桑不同入药部位防治糖尿病的作用机制,从TCMSP、TCMID等多个中药数据库获得桑不同部位桑叶、桑椹、桑枝中的成分信息,结合OMIM、TTD等疾病数据库获得糖尿病靶点信息,利用Cytoscape 3.7.2软件分别构建不同部位的“活性成分-疾病靶点”的复杂网络及拓扑分析,应用WebGestalt工具进行通路富集分析。使用Autodock vina软件对桑各入药部位主要活性成分与作用靶点进行分子对接。结果得到桑的不同入药部位主要有11个差异活性成分,调控MAPK8、AKT1、VEGFA、IL6、PPARG等32个核心靶点。靶点主要涉及急性炎症反应、有机氮化合物的反应、细胞增殖调控、对胰岛素刺激反应等生物过程。通过介素-17信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、PI3K-AKT信号通路和MAPK信号通路等来发挥治疗糖尿病的作用。本研究通过网络药理学分析桑不同入药部位防治糖尿病的活性成分群及作用机制,为桑的不同入药部位防治糖尿病的作用关系给出了参考依据。

德国洋甘菊和罗马洋甘菊多糖的单糖组成及体外抗氧化活性研究

本文旨在研究德国洋甘菊和罗马洋甘菊多糖的单糖组成和体外多糖的抗氧化活性。采用超声水提,乙醇沉淀得多糖,再经三氟乙酸水解,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化,采用高效毛细管电泳法(HPCE)测定两种洋甘菊多糖中单糖组分的摩尔比。采用5种不同的方法测定两种洋甘菊多糖的体外抗氧化能力。结果表明,高效毛细管电泳(HPCE)测定两种洋甘菊多糖中单糖组分摩尔比存在差异。两种洋甘菊多糖有不同的抗氧化能力,可以针对性的进行抗氧化活性开发和利用。

基于UPLC-MS/MS的2型糖尿病患者血清胆汁酸代谢产物分析

应用基于超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术的代谢组学方法检测2型糖尿病患者血清胆汁酸代谢谱,获得代谢标志物,发掘可预测糖尿病的潜在预防治疗靶点。采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(150 mm×2.1 mm,1.7μm)分离,0.05%乙酸水溶液-乙腈为流动相,以0.40 mL/min流速进行梯度洗脱,用此方法测定了30例糖尿病患者和50例正常人血清胆汁酸代谢谱。41种胆汁酸标准品在30 min内均得到良好分离,各成分在一定浓度范围内呈良好线性关系,检出限(LOD)为0.24~7.81 nmol/L,定量下限(LOQ)为0.49~15.63 nmol/L,相关系数(r2)为0.9867~0.9997。血清中胆汁酸代谢谱与两组间存在相关性,通过正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)发现,有12种胆汁酸(包括甘氨熊脱氧胆酸、甘氨胆酸、牛磺鹅脱氧胆酸、胆酸、熊去氧胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、12-酮基石胆酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸、异石胆酸、石胆酸)承载了分组的重要信息。结合受试者工作特征(ROC)分析,最终获得牛磺鹅脱氧胆酸(AUC=0.68)、甘氨鹅脱氧胆酸(AUC=0.66)、甘氨熊脱氧胆酸(AUC=0.63)、胆酸(AUC=0.63)、脱氧胆酸(AUC=0.63)、甘氨脱氧胆酸(AUC=0.58)6种胆汁酸代谢标志物,对于糖尿病的早期诊断及深入研究具有潜在的科研及临床价值。

基于分子对接筛选药桑中抑制α-葡萄糖苷酶活性成分

目的通过分子对接筛选药桑中抑制α-葡萄糖苷酶活性成分,为从天然产物中发现新的α-葡萄糖苷酶抑制剂提供参考。方法应用Autodockvina软件将药桑中的12种成分作为配体与α-葡萄糖苷酶进行对接,以阿卡波糖评分5.14作为阈值,筛选出药桑中潜在的抑制α-葡萄糖苷酶活性的成分,并对得分值高的成分测定其体外α-葡萄糖苷酶抑制活性。结果12种成分进行对接后,11种成分对接得分高于阈值,其中1-脱氧野尻霉素(10.49)、荞麦碱(9.17)、白藜芦醇(8.5)、异槲皮苷(10.32)、异鼠李素(8.49)等得分较高。体外实验表明异槲皮苷、异鼠李素、紫云英苷、新绿原酸、隐绿原酸,白藜芦醇、各药用部位提取物具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性。结论药桑中8种成分对α-葡萄糖苷酶皆具有潜在抑制活性,为药桑抑制α-葡萄糖苷酶抗糖尿病的物质基础做了新的补充参考。