马脐静脉内皮细胞分离培养及其功能验证

【目的】建立一种简便且高效的体外马脐静脉内皮细胞(equine umbilical vein endothelial cells,eUVECs)分离和培养方法,并提供一个可靠的细胞模型,用于研究马的血管生成功能。【方法】在无菌条件下,从马脐带中分离静脉,并用PBS液彻底冲洗。使用0.2%Ⅰ型胶原酶对脐静脉进行消化25~30 min后,收集分离的eUVECs进行培养。每12 h使用倒置显微镜观察eUVECs的生长状况。使用CCK-8法测定第1代(P1)和P3代eUVECs在7 d内的D450 nm值,并绘制生长曲线。通过免疫荧光染色方法鉴定内皮细胞标记物CD31和CD34的表达情况。使用间充质干细胞成脂和成骨分化诱导试剂诱导eUVECs,以验证其是否具有分化特性。确定内皮细胞后,添加梯度上升浓度(5、10、15、20、25 ng/mL)的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激eUVECs,使用CCK-8法检测细胞活性,观察细胞形态变化。使用Matrigel法培养eUVECs,用ImageJ软件分析数据,并统计新生血管的4个指标:成管交叉点、成管长度、成管数和成管面积。寻找体外血管生成能力的最佳TNF-α刺激浓度。【结果】使用0.2%Ⅰ型胶原酶消化法分离的eUVECs 4~5 d内的汇合度达到90%。在倒置显微镜下观察,这些细胞生长良好并呈铺路石状排列。通过免疫荧光染色确认了CD31和CD34在eUVECs中的阳性表达;并且eUVECs表现出薄弱的成脂和成骨分化能力。在Matrigel法培养条件下,20 ng/mL TNF-α处理组的成管交叉点数、成管长度、成管数和成管面积等血管形成能力指标最高,且极显著高于对照组(P<0.01)。然而,在常规培养条件下,随着TNF-α浓度增加到15 ng/mL,eUVECs的增殖受到显著抑制甚至开始导致细胞的凋亡。【结论】Ⅰ型胶原酶脐带注满消化法能够成功分离培养出原代eUVECs,20 ng/mL TNF-α显著增强eUVECs体外血管生成能力,eUVECs可以作为体外研究血管生成的细胞模型。

烤灯照射对下肢开放伤VSD术后水泡的干预效果

探讨烤灯照射是否具有预防负压封闭引流技术(vacuum sealing drainage,VSD)术后贴膜内水泡发生且促进水泡吸收的作用。方法 回顾科室2018年1月到2021年1月三年期间,科室下肢开放伤术后使用VSD患者100例,男64例,女36例。年龄15-60岁。观察治疗组(烤灯照射50例)和对照组(无烤灯照射50例)的水泡预防及治疗效果,从而分析烤灯照射是否具有对下肢开放伤VSD术后水泡的干预效果。结果 术后对照组膜内出现张力性水泡28例(水泡形成率56.0%),治疗组膜内出现张力性水泡18例(水泡形成率36.0%),治疗组创面张力性水泡形成率低于对照组组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。对照组膜内水泡吸收天数平均2.1天,治疗组膜内水泡吸收天数平均1.6天,治疗组创面张力性水泡吸收率低于对照组组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 烤灯照射具有预防VSD术后贴膜内水泡发生且促进水泡吸收的作用。

慢病毒包装体系的优化及其感染马胚胎成纤维细胞的研究

为了建立高效率的病毒包装体系,完善研究蒙古马相关基因功能的基础手段,试验采用脂质体3000和脂质体LTX两种试剂对编码绿色荧光蛋白基因的慢病毒质粒的转染效率和慢病毒感染效率进行比较,并使用其中转染效率和感染效率较优的脂质体进一步感染马胚胎成纤维细胞。结果表明:脂质体3000与脂质体LTX对编码绿色荧光蛋白基因的慢病毒质粒转染效率分别为(79.4±6.3)%和(74.6±6.2)%;脂质体3000与脂质体LTX包装病毒液后感染293T细胞的感染效率分别为(74.0±3.6)%和(69.2±3.4)%。两者之间的转染效率及感染效率均差异不显著(P>0.05),都可以有效改善病毒的感染,其中脂质体3000的应用效果更好,脂质体3000可成功感染马胚胎成纤维细胞,感染效率为(69.4±6.4)%。说明脂质体3000可以高效率包装慢病毒,并可用于感染马胚胎成纤维细胞。

蒙古马胎儿成纤维细胞永生化细胞体系建立的研究

【目的】试验旨在建立永生化蒙古马胎儿成纤维细胞(equine fetal fibroblasts,EFFs)系,为马繁殖与发育生物学研究提供参考。【方法】采用1 mg/mL胶原酶Ⅳ消化分离原代EFFs,利用表达人端粒酶逆转录亚基(hTERT)和潮霉素B抗性的pLV-hTERT-IRES-hygro慢病毒感染EFFs,经潮霉素B筛选得到阳性细胞hTERT-EFFs,以第3代EFFs为对照,采用实时荧光定量PCR检测hTERT mRNA的表达水平,CCK-8法绘制生长曲线检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况。使用DNAMAN软件比对分析人、马、小鼠、牛、绵羊、猪多物种TERT核苷酸、蛋白和端粒酶RNA组分(TERC)序列相似性。【结果】原代EFFs在实验室培养体系下可传至17代,但第17代细胞发生了衰老。hTERT基因可成功转入EFFs,并至少稳定表达20代。然而hTERT-EFFs增殖能力显著低于EFFs(P<0.05),hTERT-EFFs凋亡早期细胞率显著高于EFFs(P<0.05)。细胞衰老检测结果表明,hTERT-EFFsβ-半乳糖苷酶染色呈阳性。序列相似性比对结果显示,马TERT与hTERT mRNA保守性较高,相似性为73.2%;马TERT与hTERT蛋白保守性较其他物种高,相似性为76.3%,表明马TERT与hTERT在结构和功能上是高度相似;马TERC与人TERC相似性较高,在进化树上位于同一分支,但马TERC与TERT的结合及与端粒酶活性相关的关键核苷酸中存在突变。【结论】单独过表达hTERT可以延长EFFs体外传代次数不超过30代,但仍不足以使蒙古马EFFs细胞高质量永生化,这可能与hTERT与eTERC不相容有关。

睾丸支持细胞的功能、分离纯化及鉴定研究进展

支持细胞对维持精子形成过程中的微环境起决定作用,它可以通过分泌功能、细胞间连接形成的血睾屏障功能以及吞噬功能等来促进精子的形成过程,其发育异常会导致不同程度的雄性生殖缺陷。基于支持细胞在雄性动物生殖过程中的作用,体外培养高纯度支持细胞可成为研究睾丸两大核心功能—精子发生和性激素分泌功能相关调节机制重要的细胞模型。此外,体外培养睾丸支持细胞也可作为生殖毒理学等新兴热点领域的细胞模型,为评估和研究环境因素对雄性生殖的影响提供便利。因此,作者系统地归纳、总结了目前关于动物支持细胞生物功能的研究及常用的体外分离纯化、培养及鉴定方法,以期为利用动物支持细胞开展雄性生殖领域的研究提供参考。

马睾丸石蜡切片制作前期处理条件的优化

[目的]优化石蜡切片制作前期处理--固定和脱水条件。[方法]对比Bouin固定液与4%多聚甲醛两种不同固定液在4℃和室温不同时长下的固定效果;对比6 h和18 h时长的脱水效果。[结果]4%多聚甲醛4℃固定24 h后进行18 h脱水或Bouin 4℃或者常温固定24 h后进行6 h脱水均能达到有效支持后期石蜡切片制作的目的。[结论]Bouin固定液常温固定24 h后进行6 h脱水处理可作为野外采取马睾丸组织制作石蜡切片最佳的前期处理方案。

马属动物卵巢发育研究进展

随着国内经济发展,马、驴产业经济价值越来越高,产业需求量也日益增长,但马属动物是繁殖周期较长的季节性单胎动物,其独特的繁殖生理结构特性成为马属动物繁殖效益和相关繁殖技术开发应用的主要因素之一。卵巢作为雌性动物生殖系统中的核心器官,在神经系统和内分泌系统的作用和调节下,具有周期性产生卵子和分泌生殖激素的功能。然而由于排卵窝这一独特结构的存在,马属动物卵巢结构、发育、排卵和调控明显不同于其他家畜动物。因此,本文对国内外近些年在马属动物卵巢结构、排卵窝、卵泡分布及相关分子机理方面进行的研究进行归纳梳理,以期为在国内重启马属动物繁殖机理与技术研究提供理论帮助。

大动物多能干细胞建立研究进展

多能干细胞(pluripotent stem cells,PSCs)是可以无限增殖更新并具有分化为各种组织细胞潜能的一类干细胞系。而其中的iPS细胞(induced pluripotent stem cells,iPS cells)的建立更是进一步拉近了干细胞和临床疾病治疗的距离,并且对农业经济发展和动物医学领域具有巨大的潜在应用价值。然而目前干细胞深层次的机制与应用研究主要还是集中在小鼠和人类干细胞上,而对于农牧业与兽医学关系紧密的大动物干细胞的研究主要还在初步建立与应用尝试阶段。而本文通过归纳整理相关文献,简述了胚胎多能干细胞以及诱导多能干细胞在猪、牛、马等大动物中的建立研究现状。

静压法油罐计量系统在油库的应用

对静压法计量系统在油库中的应用做了说明,该系统运行稳定可靠,加强了罐内油品的管理及液面控制,可降低劳动强度,经济效益显著,并从计量原理、系统构成和计量精度等方面进行了详细的介绍。

马卵巢石蜡切片制作体系的优化

为了建立和优化马卵巢石蜡切片制作体系,为完善马属动物繁殖理论知识奠定基础,试验以2~3岁蒙古马为研究对象,选择6匹健康母马卵巢组织,对比了不同固定方法、组织脱水方法、浸蜡方法及苏木精-伊红(Hematoxylin and Eosin,H.E.)染色体系对石蜡切片制作效果的影响。结果表明:大于0.5 cm卵巢组织片段、经过3种固定液均达不到有效支持后期石蜡切片制作的条件;马卵巢石蜡切片制作需组织片段小于0.5 cm并采用Bouin固定液进行75%酒精浸泡24 h→85%酒精浸泡1 h→95%浸泡酒精2 h→100%酒精2 h脱水;二甲苯透明剂中放置10 min×2次;纯蜡与二甲苯按1∶1比例混合并浸蜡40 min→纯蜡Ⅰ40 min→纯蜡Ⅱ0.05 Mpa真空浸蜡40 min条件,以此为制作马卵巢组织石蜡切片的最佳体系。

谈加油站的电气设计

介绍了加油站所需的用电负荷，给出了一般加油站适用的配电系统。阐述了加油机的控制和目前的一些加油机所存在的问题，说明了站房和罩棚的照明设计要求及设备选型等。同时还介绍了加油站的防雷及系统接地和仪表等。

续论西域之疆

Mr.WeiYue Wang:随信将寄有打印的论文(望按:邮件迟缓,有关资料尚未接到),其中包括有些已发表的和仅是复制的图案,很遗憾,这些图案并不十分清晰。此外,还有我从塞蒂·豪珊的伊朗历史地图册里复制的地图,如图五所见,喀什噶尔及叶尔羌地区当时留在阿基梅尼德王朝的版图之内。虽然我们现已无法从这些地区本身看出什么,但我想借助于这些地图来追溯其原貌,如成功的话,我会使这一切明了。

浅谈蒙古族英雄史诗的英雄主义与理想主义

蒙古族英雄史诗有着鲜明的英雄主义与理想主义的倾向,从它的内容和情节都可以明显地看出。蒙古族英雄史诗所表现的英雄主义具有两个方面的特征。其一,是史诗的英雄都有十分突出的坚韧顽强的英雄性格。史诗不但用美好的语言歌颂正面形象的英雄性格,而且还通过正面英雄与对立面—恶魔的较量,突出他们的英雄形象。史诗中的恶魔往往有一种原始自然力那样巨大的破坏力:

蒙古学情报工作座谈会在呼市召开

1984年9月上旬，内蒙古自治区社会科学院情报研究所在呼和浩特市召开了蒙古学情报工作座谈会，应邀参加会议的有全国蒙古学界的专家、学者、蒙古学翻译、编辑以及有关新闻，出版界的代表共六十余人．