儿童重型β-地中海贫血异基因造血干细胞移植后出血性膀胱炎的影响因素分析

目的探讨儿童重型β-地中海贫血(重型地贫)异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,Allo-HSCT)后出血性膀胱炎(HC)的影响因素。方法对我院儿科造血干细胞移植中心2008年12月～2009年11月儿童重型地贫Allo-HSCT33例病例,进行回顾性分析。结果HC发病率为24.24%(8/33),其中Ⅰ度1例,Ⅱ度6例,Ⅲ度1例。HC的中位时间为22.9(6～35)d,持续的中位时间为11.9(3～27)d。年龄影响HC的发病率(P=0.042,P<0.05);年龄≥6岁的儿童发病率明显高于年龄<6岁儿童。结论儿童重型地贫Allo-HSCT,年龄是HC的主要影响因素。

异基因造血干细胞移植后慢性移植物抗宿主病小鼠模型的建立和评价

目的采用化疗药物预处理方案建立异基因造血干细胞移植的慢性移植物抗宿主病小鼠模型,并进行评价。方法以BALB/c^(H-2kd)小鼠作为供鼠,C57BL/6^(H-2kb)小鼠为受鼠。对受鼠使用不同的化疗药物进行预处理[方案1:白消安20mg/(kg·d)×4d+环磷酰胺150mg/(kg·d)×2d;方案2:白消安20 mg/(kg·d)×4d+环磷酰胺100 mg/(kg·d)×2d],然后经尾静脉注射不同剂量的供鼠脾细胞(6×10~7或4×10~7个)和(或)相同剂量的骨髓细胞(2×10~7个),建立慢性移植物抗宿主病小鼠模型;采用嵌合体分析、临床评分、组织病理学等进行评价。结果采用白消安20mg/(kg·d)×4d+环磷酰胺150mg/(kg·d)×2d的方案进行预处理、2×10~7个骨髓单个核细胞+6×10~7个脾单个核细胞进行移植可形成较高水平的供受者混合嵌合体。移植物抗宿主病发生时间多集中在供鼠脾细胞输注后30~90d,化疗药物剂量大的预处理方案及移植细胞数高的移植组小鼠的临床评分和慢性移植物抗宿主病的发生率高于化疗药物剂量小的预处理方案及移植细胞数少的移植组(P<0.05)。模型小鼠肠、肝脏、皮肤、脾脏等器官出现细胞和结构异常、炎症细胞浸润等病理改变。结论采用白消安和环磷酰胺预处理、给予2×10~7个骨髓单个核细胞+6×10~7或4×10~7个脾单个核细胞可形成较稳定的慢性移植物抗宿主病小鼠模型,为进一步指导临床治疗慢性移植物抗宿主病奠定了实验基础。

化疗药物对CD19嵌合抗原受体T细胞的体外抑制作用

目的:利用CCK8法研究不同的化疗药物对嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞的抑制作用,为临床制定化疗方案提供理论支持。方法:从正常成人外周血提取T细胞,制作成CD19-CAR-T细胞。将不同浓度化疗药物与CD19-CAR-T细胞共培养24,48,72 h和(或)96 h后,计算抑制率。结果:(1)氟达拉滨(Fludarabine,FDR)及马磷酰胺(Mafosfamide,MFA)对CD19-CAR-T细胞的抑制率随时间及浓度的增加而增加(P<0.05);(2)白舒非(Busulfan,BU)对CD19-CAR-T细胞在体外无抑制作用(P>0.05);(3)环磷酰胺(Cyclo-phosphamide,CTX)对CD19-CAR-T细胞在体外无抑制作用(P>0.05)。结论:在体外MFA及FDR对CD19-CAR-T细胞有抑制作用。CTX在体外无活性。

新生儿化脓性脑膜炎31例诊治分析

目的探讨新生儿化脓性脑膜炎的临床特点。方法回顾分析我科2007年1月—2011年12月确诊的新生儿化脓性脑膜炎31例。结果治愈26例(占83.9%),自动出院4例(占12.9%),死亡1例(占3.2%)。结论新生儿化脓性脑膜炎临床表现不典型,对有发热、惊厥、脑室扩大、反应低下任一表现者应常规做脑脊液检查并积极选用有效抗生素治疗。

白消安联合环磷酰胺诱导小鼠急性移植物抗宿主病模型的建立

目的以白消安(BS)联合环磷酰胺(CP)作为移植前预处理方案建立稳定的小鼠急性移植物抗宿主病(a GVHD)模型。方法雄性BALB/c(H-2kd)为受体鼠,雌性C57BL/6(H-2kb)为供鼠,受体鼠接受100 mg/kg BS和200 mg/kg CP预处理后,输入2×107个供鼠的骨髓细胞或2×107个骨髓细胞联合2×107个脾细胞。记录移植后小鼠一般情况,观察a GVHD临床表现,HE染色后检查组织病变情况,流式细胞术检测脾脏、骨髓中细胞嵌合度。结果移植骨髓联合脾细胞组小鼠,移植后7 d开始出现典型a GVHD临床表现,肝、脾、肠、皮肤、肺等组织出现GVHD相关病理形态学改变,并达到完全供者嵌合,中位生存期为10 d,30 d内全部死亡;单移植骨髓细胞组小鼠无a GVHD表现,生存期大于45 d。结论成功建立了稳定可靠的a GVHD小鼠模型,可用于a GVHD的发病机制、防治效果的实验性研究。

PDGF-BB对放射诱导骨髓抑制模型小鼠的造血保护作用研究

目的:探讨血小板衍生生长因子(PDGF)-BB对放射诱导骨髓抑制模型小鼠的骨髓保护作用和减少人巨核细胞系Meg-01细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法:用4 Gy的^(137)Csγ射线辐照小鼠,建立小鼠骨髓抑制模型。在小鼠辐照前(d 0)和照射后d 7、14和21对小鼠进行体重称量和外周血细胞计数;取d 21处死后的小鼠胸骨组织进行形态学观察和股骨骨髓细胞进行集落细胞形成单位的培养。无血清培养Meg-01细胞24 h诱导细胞凋亡,PDGFBB处理Meg-01细胞48 h后进行细胞计数,应用流式细胞术检测细胞的早期凋亡、线粒体膜电位(JC-1)和凋亡蛋白酶CasPpase-3活性的表达。结果:小鼠外周血计数结果表明,PDGF-BB可刺激放射后小鼠白细胞、红细胞和血小板的恢复(<0.05),对白细胞尤为明显。PDGF-BB处理组小鼠可观察到骨髓增生,巨核细胞及其祖细胞数量均高于对照组。细胞集落形成的培养结果显示,PDGF-BB处理组可明显刺激CFU-MK、CFU-GM、BFU-E和CFU-F的形成。不同浓度PPDGF-BB处理Meg-01细胞后,结果显示,PDGF-BB在5-50 ng/ml浓度范围内对细胞具有较强的促进增殖作用(<0.001)。PDGF-BB(50 ng/ml)可明显降低Annexin V的阳性表达(P<0.01);与PDGF-BB处理组相比,对照组细胞中线粒体膜电位下降,表明凋亡细胞数量明显增加(PP<0.01);PDGF-BB处理组的Caspase-3的表达明显低于对照组(<0.05)。结论:PDGF-BB对放射诱导骨髓抑制模型小鼠的造血系统具有保护作用,尤其是巨核细胞及其祖细胞。对Meg-01有促增殖和抗凋亡作用,其抗凋亡作用可能是通过JC-1和Caspase-3通路介导的。

化疗药物诱导CD19嵌合抗原受体T细胞凋亡的信号通路

目的探讨氟达拉滨(FDR)及马磷酰胺(MFA)诱导CD19嵌合抗原受体T细胞(CD19-CAR-T)凋亡的信号通路,为研究化疗药物对CD19-CAR-T细胞抑制作用的机制奠定理论基础。方法 FDR及MFA与CD19-CART细胞相互作用后采用Annexin V/PI双染法检测CD19-CAR-T细胞膜的变化。结果经过FDR及MFA处理过的CD19-CAR-T细胞相对于未经处理过的细胞,凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过细胞膜的变化可以判断FDR及MFA对CD19-CAR-T细胞具有诱导早期凋亡的作用。

肺肠同治法治疗肺脾气虚型儿童哮喘慢性持续期疗效观察

目的观察肺肠同治法治疗肺脾气虚型儿童哮喘慢性持续期的效果。方法采用随机数余数法,将2018年11月—2019年6月珠海市人民医院诊治的108例肺脾气虚型慢性持续期哮喘患儿分为对照组、益生菌组、中药组,每组36例。对照组予规律规范吸入布地奈德粉吸入剂治疗,疗程持续试验全过程;益生菌组在对照组治疗基础上加服双歧杆菌乳杆菌三联活菌片,连用2个月;中药组在对照组治疗基础上加服补肺涩肠汤,连用2个月。比较3组患儿干预结束治疗时、随访3个月时中医症状积分、中医症状控制率及C-ACT评分、哮喘控制率。结果干预治疗结束时、随访3个月时,中药组中医症状积分均明显低于对照组和益生菌组(P均<0.05),中医症状总控制率均明显高于对照组和益生菌组(P均<0.05),对照组和益生菌组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);干预治疗结束时、随访3个月时,中药组、益生菌组的C-ACT评分及哮喘控制率均明显高于对照组(P均<0.05),中药组有高于益生菌组的趋势,但差异无统计学意义(P均>0.05)。结论补肺涩肠汤所代表的中医肺肠同治法和肠道益生菌代表的西医肺肠同治法治疗肺脾气虚型儿童哮喘慢性持续期疗效显著,补肺涩肠汤能够显著改善患儿肺脾气虚的体质,并在哮喘控制方面有更高的评分和控制率。

单倍体造血干细胞移植联合后置大剂量环磷酰胺治疗儿童恶性血液病25例

目的探讨单倍体造血干细胞移植联合后置大剂量环磷酰胺治疗儿童恶性血液病的临床疗效。方法回顾性分析2009年6月至2012年11月期间接受单倍体造血干细胞移植25例患儿的资料，患者中位年龄为9．0岁（1．2～13．0岁），男女比例为13：12。其中原发疾病分别为急性淋巴细胞白血病13例，急性粒细胞白血病7例，非霍奇金淋巴瘤2例，慢性粒细胞白血病2例，幼年慢性粒一单核细胞白血病1例。供者均为1级血缘亲属，供、受者HLA配型2个位点不合6例，〉2个位点不合19例。移植前预处理主要为环磷酰胺＋氟达拉滨＋白消安，部分患者加用达利珠单抗、阿糖胞苷、依托泊苷或司莫司汀及接受全身照射等。移植物抗宿主病（GVHD）的预防采用大剂量环磷酰胺（40或50mg·kg^-1·d^-1，用3～4d）＋他克莫司＋吗替麦考酚酯。结果中位随访时间为25个月。25例28d内供者细胞嵌合率均大于95％，60d后1例骨髓衰竭。粒细胞植活中位时间为22．5d（17～46d），血小板植活中位时间为20．5d（12~67d）。I～Ⅱ度急性GVHD、Ⅲ～Ⅳ度急性GVHD和慢性GVHD分别发生7例（28％）、1例（4％o）和3例（12％），另3例（12％）因复发给予供者淋巴细胞或外周血造血干细胞输注后发生Ⅲ～Ⅳ度急性GVHD。移植后3年总体存活率、无事件存活率、非复发死亡率及复发率分别为28％、28％、40％和32％。结论单倍体造血干细胞移植联合后置大剂量环磷酰胺治疗儿童恶性血液病能有效地预防GVHD，早期植入效果较好，但复发及移植后继发全血细胞减少的发生率高，治疗方案有待进一步改善。

外用黄丹粉致婴幼儿高铅血症、铅中毒16例

目的分析16例因外用黄丹粉所致的高铅血症、铅中毒婴幼儿的临床表现及血锌、钙、铁、铜、镁变化的意义。方法采用原子吸收法检测16例外用黄丹粉儿童的全血微量元素水平,并进行高血铅诊断分级;对其临床症状以及低锌、低钙、低铁发生情况进行分析。对16例儿童均停用黄丹粉,并给予锌、钙和(或)铁及多种维生素制剂等综合治疗。结果16例儿童中高铅血症、轻度铅中毒、中度铅中毒分别占62.50%、12.50%和25.00%,无重度铅中毒;纳差、贫血、生长迟缓、低锌、低钙和低铁发生率分别为87.50%、43.75%、37.50%、37.50%、18.75%和37.50%,血铜、镁无变化;16例儿童血铅分别于治疗2～4个月降至正常水平,临床症状改善,血锌、钙、铁水平恢复正常。结论外用黄丹粉可导致婴幼儿高铅血症,甚至铅中毒,应加强健康教育;采用锌、钙和(或)铁及多种维生素等治疗,可取得较好效果。