奶牛布鲁氏菌的PCR鉴定

采集内蒙古某地区的可疑感染布鲁氏菌病奶牛的乳样及奶牛流产胎儿的肺、肝、脾等相关病料,分离并培养出11株病原菌,经BCSP31-PCR、VirB8-PCR、多重PCR及AMOS-PCR4种PCR方法鉴定,证实11株病原菌均为布鲁氏菌,并将11株菌定型为牛种5,6,9或3b型。

两奶牛场布氏杆菌分离鉴定及四种血清学检测方法比较

目的与方法用虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、间接酶联免疫吸附试验(iELISA)和竞争酶联免疫吸附试验(cELISA)4种血清学检测方法对华东区和新疆的两奶牛场的600头奶牛进行了布氏杆菌病检测,采集布氏杆菌病血清学检测为阳性的奶牛的奶样120份,进行病原分离与鉴定。结果分离到细菌17株,经革兰氏染色、柯兹罗夫斯基鉴别染色和PCR鉴定,17株分离菌株均为牛种布氏杆菌;4种血清学检测结果RBT平均阳性率为46.33%,SAT平均阳性率为41.00%,iELISA平均阳性率为48.17%,cELISA平均阳性率为40.50%。结论两奶牛场平均分菌率为14.17%,按国标标准方法SAT检疫血清阳性率为41.00%,RBT的敏感性和特异性为86.36%和85.71%,SAT的敏感性和特异性为84.09%和92.06%,iELISA的敏感性和特异性为86.36%和96.83%,cELISA的敏感性和特异性为95.45%和98.41%。iELISA和cELISA在敏感性和特异性方面均高于RBT和SAT。iELISA和cELISA可作为RBT和SAT的替代方法。

犬布氏杆菌外膜蛋白Omp31基因的原核表达

克隆了犬布氏杆菌外膜蛋白Omp31基因并构建原核表达系统,并对表达产物进行了初步的血清学鉴定。利用PCR技术扩增犬布氏杆菌RM6/66参考株Omp31基因,然后将其克隆到pGEMT-easy载体上进行测序。测序正确后,将该基因插入到pET-32a载体中构建原核表达载体,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,诱导表达融合蛋白,Western blot分析融合蛋白的免疫反应性。结果构建了犬布氏杆菌Omp31基因的原核表达载体pET-Omp31,并且在大肠杆菌中成功表达融合蛋白,经Western Blot鉴定该蛋白能被犬布氏杆菌阳性血清所识别。犬布氏杆菌外膜蛋白Omp31的表达成功,为犬布氏杆菌病血清学诊断方法的建立提供了基础资料。