发育不同时期的中国卤虫总RNA提取方法

本文以中国卤虫各个时期的虫体为实验材料,通过对经典的RNA提取方法的改进与筛选,获得中国卤虫各个时期的总RNA。利用该方法提取的中国卤虫各个时期总RNA质量较高,完全能满足后续的分子生物学研究。研究为以卤虫或与卤虫生物学特征相似的实验材料的研究提供了技术参考。

Annexin5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中StarD7表达的影响

目的先前研究发现annexin 5刺激大鼠睾丸间质细胞后,3β-羟类固醇脱氢酶(3βbeta-hydroxysteroid dehydro-genase,3β-HSD)及睾酮水平都增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在联系。文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中的StarD7(START domain containing 7)表达的影响,探讨annexin 5影响睾酮分泌的机制。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,1nmol/L的annexin 5处理间质细胞24h,分别提取细胞总mRNA和总蛋白。RT-PCR检测StarD7的mRNA表达改变。Western blotting方法分析睾丸间质细胞中StarD7的蛋白表达变化。收取细胞爬片,利用免疫细胞化学的方法对StarD7在睾丸间质细胞中进行定位。结果与对照组相比,在mRNA水平上,加药组StarD7 mRNA的表达增加了44.5%(1.10±0.02 vs 1.59±0.09,P<0.05)。在蛋白水平上,加药组StarD7蛋白的表达增加了44.3%(1.49±0.10 vs 2.15±0.16,P<0.05)。StarD7主要定位在大鼠睾丸间质细胞的胞浆内,加药组的染色强度明显强于对照组。结论 StarD7在基因和蛋白水平均受annexin 5的调控,结合先前发现annexin 5可调控睾丸间质细胞睾酮合成的结果,提示annexin 5调控睾酮合成可能是通过调控StarD7的表达来实现的。

中国卤虫早期胚胎发育相关基因的研究——Orthodenticle基因克隆中简并引物的设计和优化

通过使用blastx、Blockmaker、CODEHOP和Primer Premier 5.0等在线网络工具和生物软件,针对中国卤虫Orthodenticle基因高度保守区域设计了简并引物.用所设计的简并引物克隆了中国卤虫Orthodenticle基因片段.在GenBank中以blastx方法进行比对,发现此段基因片段与美国卤虫Orthodenticle基因有高度的相似性.通过实验进一步证明,此种设计简并引物的方法可信性强,特异性高,能够快速得到满意的实验结果.

Annexin 5刺激大鼠睾丸Leydig细胞后的差异表达蛋白的研究

目的:研究annexin 5作用于大鼠睾丸Leydig细胞后的差异表达蛋白。方法:原代培养大鼠睾丸Leydig细胞,1 nmol/L的annexin 5处理Leydig细胞24 h,提取细胞蛋白用二维电泳分离蛋白并进行比较。选择与对照组有明显差异表达的蛋白点,进行质谱分析。结果:获得了分辨率和重复性均很好的差异蛋白图谱。筛选出的显著差异表达的50个蛋白点,共有36个蛋白点被成功鉴定,其中annexin 5处理组中高表达的为23个,低表达的为13个。结论:初步建立了annexin 5作用于大鼠睾丸Leydig细胞后的差异蛋白谱,筛选并鉴定出的这些蛋白质可能是影响睾丸Leydig细胞合成睾酮过程中的关键蛋白,研究结果为阐明annexin 5调控大鼠睾丸Leydig细胞分泌睾酮的具体机制奠定了基础。

StarD7与Wnt/β-catenin信号通路对Annexin 5刺激大鼠Leydig细胞睾酮分泌的影响

目的:研究StarD7以及Wnt/β-catenin信号通路促进睾酮合成的内在机制,探索睾酮合成的调控新途径。方法:用1 nmol/L的Annexin 5处理大鼠原代Leydig细胞24 h,化学发光法检测睾酮含量,利用RT-PCR和Westernblot方法分析StarD7和β-catenin在mRNA和蛋白水平上的表达变化,并利用免疫荧光法对β-catenin进行定位。结果:在Annexin 5的刺激作用下,与对照组相比,睾酮合成水平明显增加了176%[(7.83±0.32)vs.(21.6±1.1),P<0.05];在Annexin 5作用下,与对照组相比,StarD7在mRNA水平表达增加55%[(1.12±0.08)vs.(1.74±0.11),P<0.05],β-catenin表达增加48%[(1.15±0.08)vs.(1.70±0.05),P<0.05]。在蛋白水平上,与对照组相比,StarD7增加42%[(1.06±0.09)vs.(1.51±0.07,P<0.05)],β-catenin增加55%[(1.02±0.01)vs.(1.58±0.02),P<0.05],此外在Annexin 5作用下,β-catenin有入核积聚的趋势。结论:在Annexin 5作用下,StarD7和β-catenin的表达均有显著增加,且β-catenin有入核积聚的趋势,提示StarD7和β-catenin对Annexin 5刺激Leydig细胞睾酮的合成均有调控作用,该过程可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路,从而促进StarD7表达上升,最终导致睾酮合成增加。

膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞增殖过程中Ect2表达的影响

目的研究膜联蛋白5(annexin 5)对大鼠睾丸间质细胞增殖过程中上皮细胞转化序列2癌基因(epithelial cell transfor-ming sequence 2 oncogene,Ect2)表达的影响,探讨annexin 5影响睾丸间质细胞增殖的机制。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,不同剂量的annexin 5处理后,采用MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR检测Ect2的mRNA表达改变,western blot分析睾丸间质细胞中Ect2蛋白质表达变化。结果 MTT法检测结果显示,annexin 5对大鼠睾丸间质细胞增殖有明显的促进作用,且在2～3 d呈显著的剂量-时间依赖关系(P<0.01),在第5天细胞增殖作用已明显减弱。流式细胞分析发现,1 nmol/L annexin 5作用48 h时G2/M期细胞减少为24.49%,72 h时减少为16.43%,与对照组比较差异显著(P<0.05)。RT-PCR结果表明,0.1 nmol/L组和1 nmol/L组Ect2 mRNA表达[(0.77±0.06)和(0.85±0.04)]与对照组(0.67±0.06)比较,分别增加了14.9%(P<0.05)和26.9%(P<0.01),而10 nmol/L组Ect2 mRNA表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。western blot结果表明,1 nmol/L annexin 5作用组的Ect2蛋白质表达比对照组增加了20.9%[(1.50±0.15)vs(1.24±0.07),P<0.05],而0.1 nmol/L组和10 nmol/L组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 annexin 5对大鼠睾丸间质细胞增殖的促进作用是通过促进细胞周期由G2期向M期的转变来实现的。Ect2在基因和蛋白质水平均受annexin 5的影响,提示annexin 5调控睾丸间质细胞增殖可能通过增加Ect2的表达而实现。

高渗诱导因子NFAT5

NFAT5是Rel蛋白家族中目前最后一个被发现的成员,也是转录因子NFAT家族中惟一在哺乳动物细胞中调控由渗透压诱导的基因表达的成员。它以二聚体的形式与DNA形成蝶状复合体结构,通过磷酸化被激活,并受多种激酶的调控,对于维持高渗条件下细胞内的渗透压平衡具有极为重要的作用。论文就NFAT5的结构、功能以及调控机制等进行综述。

小热休克蛋白家族的研究进展

小热休克蛋白(sHSP)是热休克家族中的成员,是在进化中高度保守的一系列分子量较小的蛋白质,作为分子伴侣,它们部分结合在变性的蛋白上,防止了由于刺激蛋白不可逆转的集聚,并在细胞内发挥着不同的功能。由于利用热处理使热休克蛋白的表达量增加,从而使水果和蔬菜的抗冻性增强的方法已经得到认可,所以研究小热休克蛋白具有重要的生物学意义,在研究植物抗逆功能基因的表达、农业等方面的应用前景十分广阔。

对我国电视剧生产市场取向的几点质疑

电视剧生产的市场取向是指电视剧的生产要面向市场,遵循市场运行规律,经济效益将成为生产者追求的主要目标。关于这个问题的讨论原来主要在电视圈中进行。最近,随着41集电视连续剧《爱你没商量》的播出,这个问题的讨论日趋公开了。众多的专家、学者提出:十四大确立了社会主义市场经济的发展模式,我国的电视剧生产也应顺应潮流,采用市场取向的管理模式,以提高质量,调动广大生产部门和电视工作者的积极性。确实,市场经济的运行机制在合理调配资源,调动人的积极性等方面有很大的作用。但是在目前情况下,我国电视剧生产实行市场取向面临这佯几个问题的困扰。首先,是我国有关电视剧生产、经营的立法、司法工作非常薄弱,缺乏法律管理手段。这样,在价值规律的作用下,一些人利益薰心,为了赚钱。