妇科千金方及其拆方、单味饮片主要成分分析及10种成分测定

目的分析妇科千金方(穿心莲、单面针、功劳木等)及其拆方(抗炎方、抑菌方、补益方)、单味饮片主要成分,并测定原儿茶酸、木兰花碱、芦丁、染料木苷、党参炔苷、小檗碱、穿心莲内酯、染料木素、脱水穿心莲内酯、藁本内酯的含量。方法制备全方、拆方、单味饮片,其70%甲醇提取物的HPLC分析采用Kromasil 100-5-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长254 nm。结果 10种成分在各自范围内线性关系良好(R^(2)≥0.998 5),平均加样回收率96.51%~102.03%,RSD 0.88%~2.97%。木兰花碱、小檗碱、穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯归属于抑菌方,染料木苷、染料木素、芦丁归属于抗炎方,原儿茶酸、党参炔苷、藁本内酯归属于补益方。各成分含量在单味饮片中最高,全方中最低。结论妇科千金方主要成分均可归属于拆方、单味饮片中。该方法稳定可靠,可为研究妇科千金方质量控制及配伍规律提供参考。

妇科千金胶囊的抗炎作用与其调节NF-κB信号通路的关系

目的研究妇科千金胶囊总浸膏(Fuke Qianjin capsule extract, FKE)体外抗炎活性及其抗炎作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度FKE单独使用和FKE叠加100 ng/mL脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)使用时对小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)活性的影响;采用ELISA法检测不同浓度FKE对LPS刺激后RAW 264.7细胞炎症因子一氧化氮(NO)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)释放的影响;通过RT-PCR法检测不同浓度FKE对炎症相关蛋白环氧合酶2 (COX-2)、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、TNF-α转录水平的影响;采用Western blot检测不同浓度FKE对炎症相关蛋白IκBα、iNOS表达的影响;利用激光共聚焦技术检测FKE对NF-κB p65核转位的影响;采用双荧光素酶报告基因检测不同浓度FKE对核转录因子-κB (nuclear factor-κB, NF-κB)的影响。结果 MTT测定结果表明,与对照组相比,FKE在50~800滋g/mL浓度范围内对RAW 264.7细胞活性的影响无显著差异(P>0.05);ELISA检测结果显示,FKE能明显降低LPS刺激诱导的RAW 264.7细胞NO含量,在400滋g/mL浓度时,呈现出对IL-6、TNF-α的抑制作用(P<0.05);Western blot检测结果表明,FKE对IκBα的表达无影响,但对iNOS活性具有一定的抑制作用;激光共聚焦检测发现,与对照组比较,FKE部分抑制p65核转位;FKE在400滋g/mL时,可明显抑制NF-κB的激活(P<0.05)。结论 FKE具有明显减轻细胞炎症反应的作用,其机制可能与FKE抑制炎症通路关键信号分子NF-κB激活从而导致TNF-α、IL-6、iNOS等释放减少有关。

夏枯草果实石油醚提取物GC-MS分析及抗炎活性研究

目的表征夏枯草果实石油醚提取物化学成分,评价其抗炎活性。方法采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)对夏枯草果实的化学成分进行分析。建立RAW264.7细胞炎症模型,评价其抗炎效果。结果共鉴定夏枯草果实石油醚提取物中19个化学成分。抗炎活性发现,夏枯草果实石油醚提取物均具有明显的抗炎效果。结论夏枯草果实石油醚提取物成分及抗炎活性均具一定差异性。

夏枯草茎叶复合菌发酵工艺、成分及活性变化研究

目的选用复合菌(乳酸菌90%,芽孢杆菌5%,酵母菌5%)发酵夏枯草茎叶,筛选发酵工艺,比较转化前后成分迷迭香酸、咖啡酸的含量以及抗炎、抗氧化活性。方法通过单因素考察,筛选复合菌对夏枯草茎叶的最佳发酵工艺;采用HPLC动态监测转化过程中迷迭香酸和咖啡酸含量变化;采用体外模型进行转化前后样品抗炎、抗氧化活性比较。结果筛选得到复合菌发酵夏枯草茎叶的最佳工艺:夏枯草茎叶粉碎至40目,60℃干燥,加入8%玉米粉,灭菌1h,接种复合菌液,调pH为4,含水量75%,发酵温度37℃,周期为10天。含量测定发现:转化后迷迭香酸由0.087%减少至0.017%,咖啡酸则由0.007%增加到0.07%。活性研究表明:发酵前夏枯草茎叶抗炎活性强于发酵后,而发酵后样品抗氧化活性强于发酵前。结论复合菌可用于夏枯草茎叶发酵,能改变物质基础及活性,为中药材非药用部位开发利用提供参考。