用二次电泳法研究核酸与蛋白质的相互作用

研究蛋白质与核酸的结合常遇到的问题是对蛋白质等电点及可溶度等要求较高，或难以同时处理大量标本。为克服此缺点，将待检蛋白经聚丙烯酰胺凝胶电泳后，通过洗涤去除凝胶中的ＳＤＳ，使蛋白质相对固定于凝胶中，改电泳液为ＴＡＥ或ＴＢＥ，继之用同位素标记寡核苷酸进行二次电泳，通过放射自显影直观地显现出蛋白结合核酸的结果。该法敏感，特异，对蛋白质等电点及可溶性要求低，可同时检测多个样本，值得推广使用。

贵州HCV感染株基因分型研究

用3种分型方法对贵州地区30份 HCV RNA 阳性血清进行基因分型,并对10份血清的分型结果用测序分析验证,旨在了解贵州 IHCV 感染株基因型及现有分型方法的适用性。资料与方法一、HCV RNA 阳性血清来源:1993～1994年间收集本院传染科、血液内科住院病人血清标本206份(其中慢性肝炎血清100份,血液病106份)。肝炎诊断根据1990年上海肝炎会议标准,血液病诊断根据临床、外周血象、骨髓象检查。经抗 HCVELISA 筛选及5′非编码区通用引物 RT/PCR 确认,18份慢性肝炎及12份血液病患者血清含有 HCV RNA,扩增产物为256bp片段,取这种血清再分型。二、HCV 基因分型:采用3种方法进行。1.核心区特异引物 PCR 法:按 Okamoto 法进行。2.非结构基因5(NS_5)区特异探针核酸杂交(blotting)

丙型肝炎病毒核心蛋白DNA结合区的测定

目的 阐明丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白的ＤＮＡ结合特性及其意义。方法 在大肠杆菌中表达谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）融合ＨＣＶ核心蛋白不同长度片段，并进行纯化。经聚丙烯酸胺凝胶电泳后，通过更换缓冲液的方法将这些蛋白片段相对固定在凝胶中，用ｒ－３２Ｐ［４６６７－０００９１］ＡＴＰ标记人工合成的ＤＮＡ进行２次电泳，通过放射自显影检测核心蛋白的ＤＮＡ结合区。结果 ＨＣＶ核心蛋白Ｎ端第１０～１６位氨基酸残基和第４６～７０位氨基酸残基可独立地结合ＤＮＡ，核心蛋白既能和单链ＤＮＡ结合又能和双链ＤＮＡ结合，对单双链ＤＮＡ的结合域相同。对所结合的ＤＮＡ序列无选择性。结论 ＨＣＶ核心蛋白的Ｎ端含有两个ＤＮＡ结合区，结合区序列与核内转移信号的部分重迭以及对结合靶ＤＮＡ序列的非选择性可能是ＨＣＶ核心蛋白具有多功能的基础。