黑龙江省对外贸易高质量发展路径研究

推动黑龙江省对外贸易高质量发展是推动东北全面振兴,构筑我国向北开放新高地的重要举措。黑龙江省作为多口岸城市省份,虽然地缘优势明显,但仍存在一些问题,主要包括贸易模式单一、贸易结构不合理、数字化应用不充分、政策实施尚不精准等。对此,黑龙江省应充分发挥地缘优势,政策落实精准发力,实现贸易模式多元化,推动产业结构升级并加强数字化建设,促进对外贸易高质量发展。

胆碱能抗炎通路在急性肺损伤治疗中的研究进展

急性肺损伤(ALI)可发展为急性呼吸窘迫综合征(ARDS),给临床带来严峻挑战,ALI的特征主要为剧烈的炎症反应以及较高的病死率。胆碱能抗炎通路(CAP)作为调节炎症反应的关键机制,通过迷走神经刺激、α7烟碱型乙酰胆碱受体激动剂以及乙酰胆碱酯酶抑制剂激活显著减少促炎性细胞因子的释放,减轻炎症和肺部损伤。目前关于CAP治疗ALI的研究已取得一定进展,未来深入研究CAP在临床治疗中的应用效果,可为ALI和ARDS患者提供更有效且安全的治疗选择。

以临床病例为中心的形态学实验教学改革的实施与反馈

目的为了探讨以临床病例为中心的形态学实验教学方法对提高病理及形态学实验技术教学质量的影响,进行了相关教学新模式的改革探索。形态学实验教学中融入形态学实验技术教学,让医学本科生尽早学习科研方法,使学生在人才培养和科学研究上得到双向提升。方法收集厦门医学院附属第二医院心胸外科2021年3月-2021年10月送检的20例肺鳞癌标本行石蜡、半薄及超薄切片。通过对石蜡切片技术、生物电镜技术基本原理、操作方法进行讲授,让学生掌握肺鳞癌光镜与电镜下图像。结果肺角化型鳞癌石蜡及半薄切片于光镜下可见癌细胞间形成良好的细胞间桥;非角化型鳞癌细胞间则无细胞间桥。超薄切片于电镜下可见,肺鳞癌无论高、中、低分化,细胞间均有多少不等的张力原纤维和/或桥粒,偶见少数癌细胞内含黏液颗粒。结论以临床样品为实例,以大型科研仪器为支撑,让医学本科生尽早跟随老师进入实验室,学习形态学常用技术的基本原理、相关仪器的操作步骤、样本的制备方法、实验结果的分析处理等知识,在实践中开拓学生科研思维、增强学生创新实践能力,提升对人体组织形态学的认识。

莱菔硫烷预处理对大鼠移植心脏冷缺血再灌注损伤的影响

目的:观察莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对大鼠移植心脏冷缺血再灌注损伤的影响。方法:健康雄性Lewis大鼠60只随机分成3组,每组20只。对照组:受体大鼠于移植前24 h经鼠尾静脉注射等量的生理盐水;NAC组:受体大鼠于移植前半小时经下腔静脉注射N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)300 mg/kg;SFN组:受体大鼠于移植前24 h经尾静脉注射SFN 2.5 mg/kg。其中供心冷藏于4℃HTK液18 h,建立大鼠心脏移植模型。采用半定量法评价心脏功能,再灌注后6、24 h分别从受体鼠内眦静脉和下腔静脉取血,检测血清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶同工酶(creatinekinase-MB,CK-MB)、肌钙蛋白(troponin T,TnT)的水平;移植后24 h摘取供心,观察心肌组织学及超微结构的变化,检测心肌组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性及脂质过氧化物(lipid hydroperoxide,LPO)含量。结果:心脏功能评分SFN组、NAC组较对照组均明显提高(P<0.05);再灌注6 h,与对照组相比,NAC组血清中LDH、CK-MB和TnT的活性均降低(P<0.05)。SFN组血清中LDH、CK-MB和TnT的活性均降低(P<0.05);再灌注24 h,NAC组LDH和TnT的活性亦均降低(P<0.05),CK-MB的活性未见明显变化,SFN组血清中CK-MB和TnT的活性亦均降低(P<0.05);NAC组和SFN组心肌组织学及超微结构的损伤程度均较对照组明显减轻;与对照组相比,NAC组心肌组织SOD活性及SOD/LPO比值明显升高(P<0.05),LPO含量未见明显变化(P>0.05);SFN组供心心肌组织LPO含量显著降低(P<0.05),SOD活性未见明显变化,SOD/LPO明显提高(P<0.01)。结论:SFN能保护移植心脏,其机制可能与其诱导Ⅱ期酶产生,提高心肌细胞对氧化应激的防御能力,减少自由基对心肌的氧化损伤有关。

N-乙酰半胱氨酸对大鼠心脏移植缺血再灌注损伤时基质金属蛋白酶的影响

目的观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理对心脏移植缺血再灌注损伤(IRI)时基质金属蛋白酶(MMP)的影响,并探讨其可能的机制。方法健康雄性Lewis大鼠60只,随机分为3组。对照组:摘取供体心脏前30 min经供体大鼠腹腔静脉注射生理盐水0.5 ml;供体预处理组:摘取供心前30 min经供体大鼠腹腔静脉注射NAC 300 mg/kg;受体预处理组:受体于移植前30 min经受体大鼠腹腔静脉注射NAC 300 mg/kg。供心冷藏于4℃组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐液(HTK)18 h后建立大鼠腹腔异体异位心脏移植模型。移植后24 h光镜下观察心肌胶原含量的变化;免疫组织化学法检测心肌组织中MMP2/9蛋白表达;采用实时PCR检测MMP2和基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP2)mRNA表达。结果 NAC供体/受体预处理组心肌胶原含量明显低于对照组(4.49±0.62/5.88±0.96 vs.10.43±0.93,P<0.01);免疫组织化学法半定量评分显示NAC供体/受体预处理组MMP2/9蛋白含量明显低于对照组(1.60±0.22/2.13±0.23,1.63±0.18/2.78±0.16 vs.3.00±0.15/3.78±0.15,P<0.01),受体预处理组心肌组织中MMP2 mRNA明显低于对照组(1.45±0.72vs.2.77±1.62,P<0.05),而供体预处理组TIMP2 mRNA明显高于对照组(2.59±2.12 vs.0.63±0.50,P<0.05)。结论在大鼠心脏移植中NAC对供心IRI具有保护作用,可能是通过NAC直接抑制活性氧所致的MMP2/9升高,激活TIMP2,减轻了心肌IRI。

一氧化氮合酶在N-乙酰半胱氨酸调控大鼠心肌冷缺血-再灌注损伤中的变化

目的:观察一氧化氮合酶(NOS)在N-乙酰半胱氨酸(NAC)调控大鼠心肌冷缺血-再灌注损伤中的变化。方法:将健康雄性Lewis大鼠60只随机分为3组。(1)对照组:摘取供心前30 min,经供体大鼠下腔静脉注射生理盐水0.5 mL;(2)供体预处理组:摘取供心前30 min,经供体大鼠下腔静脉注射NAC300 mg/kg,受体大鼠不作预处理;(3)受体预处理组:移植前30 min,经受体大鼠下腔静脉注射NAC300 mg/kg,供体大鼠不作预处理。将冷藏于4℃HTK液18 h的供心移植至受体大鼠腹腔,建立同种异体心脏移植模型。于再灌注24 h后取供心采用免疫组化方法检测诱导型一氧化氮合酶/内皮型一氧化氮合酶(iNOS/eNOS)蛋白表达水平,以免疫组化评分(IHS)表示。采用Real time-PCR法检测iNOS/eNOS mRNA表达。结果:与对照组相比,供、受体预处理组的iNOS蛋白表达降低,IHS评分分别为3.00±0.15、1.50±0.22、1.63±0.26,P<0.05;而eNOS蛋白表达升高,IHS评分分别为2.00±0.21,3.60±0.16,3.40±0.26,P<0.05。与对照组相比,受体预处理组iNOS mRNA表达降低(0.43±0.17对1.00±0.41,P<0.05),供体预处理组eNOS mRNA表达升高(3.06±1.47对1.00±0.65,P<0.05)。结论:NOS参与了NAC预处理减轻移植大鼠心肌缺血-再灌注损伤的过程。

体外循环不阻断升主动脉低温室颤左室引流对犬脑组织保护作用的实验研究

目的:探讨体外循环不阻断升主动脉低温室颤左室引流技术对犬脑组织的影响。方法:14只健康成年杂种犬随机分为实验组和对照组,每组7只。右侧第4肋间进胸,常规建立体外循环。实验组不阻断升主动脉,血流降温到28℃,心包腔内注入4℃生理盐水诱导室颤,同时行充分左心引流;对照组阻断升主动脉,经主动脉根部灌注冷晶体停跳液。检测相应时间点血清IL-8和S100β蛋白浓度;检测CPB前及结束时脑组织S100β蛋白和神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达。结果:实验组与对照组的血清IL-8、S100β的浓度水平比较差异有统计学意义(P<0.05),各时间点之间也存在差异(P<0.05)。两组在CPB前IL-8、S100β浓度无明显差异,转机后均开始升高,且均在CPB2h达到高峰,并于CPB3h逐渐下降,但仍然高于CPB前水平。脑组织免疫组化显示:两组脑组织的S100β及NSE的积分光密度值比较差异有统计学意义(P<0.05)。在CPB结束时,两组脑组织的S100β和NSE的积分光密度值比CPB前显著增高(P<0.01)。结论:体外循环不阻断升主动脉低温室颤左室引流技术可减轻全身炎症反应,减少脑栓塞发生率,有利于脑保护,具有一定的临床价值。

KISS-1和MMP-2在非小细胞肺癌中的表达及其与转移和预后的关系

目的检测KISS-1蛋白和MMP-2蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,旨在探讨其表达水平与转移和预后的关系。方法采用免疫组织化学(Elivision)法检测85例非小细胞肺癌中KISS-1和MMP-2蛋白的表达水平,用图像分析方法测定其积分光密度(IOD)。结果 KISS-1在Ⅰ～Ⅱ期NSCLC及无转移NSCLC组中的表达,分别高于Ⅲ～Ⅳ期NSCLC及有转移NSCLC组中的表达水平(P<0.05);MMP-2在高～中分化NSCLC组、Ⅰ～Ⅱ期NSCLC组、无转移NSCLC组中的表达分别显著低于低分化、Ⅲ～Ⅳ期NSCLC、有转移组NSCLC中的表达水平(P<0.01);在NSCLC中,KISS-1和MMP-2的表达水平呈负相关(r=-0.478,P<0.01);KISS-1蛋白高表达组患者的术后5年生存率显著高于低表达组(20.9%vs2.4%)(P<0.01),而MMP-2高表达组患者的术后5年生存率显著低于低表达组(7.0%vs14.3%)(P<0.05)。结论 KISS-1的弱表达和MMP-2的强表达可能与NSCLC的转移呈正相关,两者的失衡可能是造成肿瘤转移的一个原因。

大鼠肾移植1000例经验总结

目的:对大鼠肾移植进行经验总结以指导实验与临床研究。方法:作者在2004-01/2009-07海德堡大学移植中心期间,采用大鼠肾动、静脉与腹主动脉、腔静脉行端侧吻合。对于急性肾移植模型,输尿管直接植入膀胱内;对于慢性肾移植模型,输尿管采用端端吻合法。术中直接切除对侧肾脏,完成大鼠肾移植1000例,并对其进行总结。结果:只要供体肾脏冲洗良好,吻合时暖缺血时间小于30min,手术时间60min左右,吻合技术娴熟,移植成功率达98%以上。结论:该实验模型安全、方便、可行。肾移植成功的关键是手术技术。

莱菔硫烷抗凋亡对移植大鼠心脏的保护作用

目的莱菔硫烷(Sulforaphane,SFN)抗氧化作用减轻心肌的缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,IRI)的研究已有报道,文中研究SFN抗细胞凋亡作用对移植心脏IRI的影响。方法健康雄性Lewis大鼠40只随机分成2组,每组20只。对照组受体大鼠于移植前24 h经鼠尾静脉注射等量的等渗盐水,实验组受体大鼠于移植前24 h经尾静脉注射SFN 2.5 mg/kg。实验组和对照组的供心均冷藏于4℃HTK液18 h,建立大鼠异体异位心脏移植模型。半定量方法分析评价移植心脏功能,免疫组织化学检测移植心脏心肌组织Caspase-3蛋白的表达,Tunel法检测心肌细胞凋亡,Kaplan-Meier分析移植心脏存活时间(BN→Lewis)。结果实验组移植心脏的中位生存期明显高于对照组(7 d vs 5 d,P<0.05),心脏功能评分实验组较对照组明显提高[(3.67±0.21)分vs(2.44±0.29)分,P<0.05],心肌组织Caspase-3蛋白的表达实验组较对照组明显降低[(1.38±0.14)分vs(2.03±0.21)分,P<0.05],心肌细胞凋亡指数较对照组明显降低(0.56±0.04 vs 0.78±0.01,P<0.05)。结论 SFN对移植心脏的保护作用可能与其抑制Caspase-3蛋白的表达、减少心肌细胞凋亡有关。

肺癌可溶性抗原致敏的DC诱导CTL特异性杀伤肺癌细胞的实验研究

目的通过对负载人肺癌GLC-82细胞可溶性抗原的树突状细胞(DC)体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)对肺癌细胞的杀伤研究,为以DC为基础的肺癌免疫瘤苗的临床应用提供一定的实验依据。方法通过用3MKCl提取法和弱酸洗脱法获得人肺腺癌细胞GLC-82的可溶性抗原多肽,用GLC-82细胞抗原多肽冲击致敏从人外周血单核细胞(PBMC)中用GM-CSF、IL-4和TNF-α体外诱导扩增并经鉴定的DC;利用负载GLC-82细胞抗原多肽的DC,刺激同种异体外周血T淋巴细胞活化增殖,诱导产生具有识别肺癌细胞抗原的特异性CTL;进一步探讨该CTL对GLC-82,肺癌CALU-6和人红白血病K562细胞的体外杀伤效应。结果人PBMC体外经7d诱导出的DC,经光镜、电镜、免疫组化证实具有典型的树突状细胞特性;经GLC-82抗原致敏的DC诱导同种异体T淋巴细胞活化增殖产生CTL,诱导激活的CTL与靶细胞共育时镜下发现CTL靠近并聚集在肿瘤细胞周围,致使肿瘤细胞发生凋亡和坏死。结论肺癌可溶性蛋白抗原能活化致敏DC,无需明确肿瘤特异抗原,获取方法简便可行;联合应用GM-CSF、IL-4和TNF-α诱导人PBMC中的单核细胞,能诱导出功能较强的DC;致敏DC能强烈刺激初始型同种异体T淋巴细胞增殖产生CD8+表达增加的CTL;激活的CTL对肺癌靶细胞发挥高效而特异的细胞毒效应,对非肺组织瘤靶细胞也具有非特异性杀伤效应。

脐血管去内皮细胞后血管顺应性及抗原表达量变化的实验研究

目的 评价酶原法、低温法去除脐血管内皮细胞的优劣，为研究开发符合生理、无排斥、结构和功能类似自体的血管支架提供理论依据。方法 自愿捐赠的健康、足月顺产、无损伤胎儿新鲜脐动、静脉各60根，每根长10cm，抗生素液37C灭菌24h后，分为正常组、酶原组和冷冻组（n=20）。分组时每根血管取0．5cm细菌培养。酶原组加入0．1％Ⅱ型胶原酶后夹闭两端，37C水浴消化5、10、15、20min，去除内皮细胞；冷冻组置入冷存管中，加入DMEM培养液，逐步冷冻，最后置入液氮中，贮藏24h以上，37C水浴30～60s快速复温，无菌生理盐水灌冲血管腔数次，去除残留血管内皮细胞；正常组4CKerb’s保存液恒温存放。将标本分别行HE、弹力纤维及胶原纤维染色及扫描电镜观察；比较各组血管顺应性差异；采用免疫组织化学染色测定人类白细胞抗原ABC（human leukocyte antigen ABC，HLA-ABC）和HLA-DR，分析抗原表达量的变化。结果 各组标本均无细菌生长。组织学观察：冷冻组，内皮细胞完全去除，脐动脉显示内皮下发达的纵行平滑肌层，脐静脉可见内弹力膜；酶原组，胶原酶作用20min，血管内皮细胞完全去除，脐动脉露出内层纵行平滑肌细胞，脐静脉显示内皮下层。血管顺应性：冷冻组脐血管顺应性大于正常组，正常组大于酶原组，但组间差异均无统计学意义（P〉0．05）；脐静脉的顺应性约为脐动脉的2～3倍。HLA-ABC、HLA-DR免疫组织化学染色：冷冻组、酶原组与正常组比较，脐动、静脉抗原性均明显降低（P〈0．01）；冷冻组与酶原组比较，脐动、静脉HLA-ABC、HLA-DR抗原表达量均降低，且差异有统计学意义（P〈0．01）。结论冷冻法及0．1％Ⅱ型胶原酶作用20min均可完整去除脐血管内皮细胞，低温冷冻法优于酶原法。

老年人心肌梗死与血管紧张素原基因T174M多态性关系

目的探讨血管紧张素原(angiotensinogen,AGT)基因T174M变异与老年人心肌梗死(M I)的发病关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)、限制性片段长度多态性(RFLP)分析,对55例呈M I患者和60例无冠心病证据的对照组(老年人)进行AGT基因T174M等位基因检测。结果M I患者AGT基因174MM型(7.27%)和M174等位基因(16.36%)的频率显著高于健康对照组(分别为1.67%和9.17%,2χ=7.55,P=0.022,χ2=5.79,P=0.016),经校正冠心病的主要危险因素后,AGT基因174MM仍可显著增加心肌梗死发生的危险性(比数比3.66,P=0.018)。结论AGT基因T174M可能是老年人M I发病的重要危险因素之一。

不阻断升主动脉低温室颤左室引流技术对犬肺组织保护作用的实验研究

目的:探讨体外循环不阻断升主动脉低温室颤左室引流技术对犬肺组织的影响。方法:14只健康成年杂种犬随机分为2组。常规建立体外循环,实验组:不阻断升主动脉,血流降温加心包腔内冰盐水诱导室颤;对照组:阻断升主动脉,经主动脉根部灌注冷晶体停跳液心脏停跳。用ELISA法、免疫组化法检测IL-8、NF-κB及ICMA-1的表达及光镜下观察犬肺组织形态学变化。结果:实验组血清IL-8浓度水平显著低于对照组(P<0.05)。实验组肺组织病理损伤较对照组轻;在CPB结束时,两组肺组织的NF-κB和ICAM-1的积分吸光度值(A值)显著增高(P<0.05),但对照组肺组织的NF-κB及ICAM-1的A值显著高于实验组(P<0.05)。结论:体外循环不阻断升主动脉低温室颤左室引流技术可减轻肺组织的损伤,对肺功能有一定的保护作用。

汉族群体血管紧张素原基因T174M多态性与心肌梗死相关

目的: 探讨血管紧张素原(angiotensinogen,AGT)基因T174M变异与中国人汉族群体心肌梗死(MI)的关系.方法: 采用聚合酶链反应(PCR)、限制性片段长度多态性(re strictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)分析,对105例MI患者和201例无冠心病证据的对照组(汉族群体)进行AGT基因T174M等位基因检测. 结果: MI患者AGT基因174MM型(7 6% )和M174等位基因(16 7% )的频率显著高于健康对照组(分别为1 49%和9 45%,χ2 =7 57,P<0 025,χ2 =5 79,P<0 05 ),经校正冠心病的主要危险因素后,AGT基因174MM仍可显著增加心肌梗死发生的危险性(比数比3 66,P=0 018).结论: AGT基因T174M可能是汉族群体MI发病的重要危险因素之一.

体外循环不阻断升主动脉低温心室颤动左心室引流技术对心肌保护作用的实验研究

目的检测内皮素、NO、丙二醛和超氧化物歧化酶（SOD）血液学指标及心肌组织局部内皮素受体A（ETA）mRNA的表达，评价体外循环不阻断升主动脉低温心室颤动左心室引流技术对心肌的保护作用，探讨更好的心肌保护方式。方法建立体外循环动物模型，实验动物分为对照组（停跳组）及实验组（心室颤动组），体外循环前、体外循环1h、体外循环2h、体外循环结束后1h4个时间点分别抽取静脉血，同时于各时间点分别钻取左心室壁局部心肌组织100mg。测定血浆内皮素、NO、丙二醛和SOD水平。用逆转录聚合酶链反应方法检测心肌ETA mRNA的表达。结果随体外循环时间延长，2组内皮素、丙二醛水平均有升高。于体外循环2h和体外循环结束后1h两个时间点，对照组内皮素、丙二醛水平明显高于实验组[（70．27±7．03）ng／L比（56．53±12．11）ng／L，（106．36±6．61）ng／L比（72．71±12．72）ng／L；（4．71±1．31）μmol／L比（3．32±0．82）μmol／L，（8．27±1．99）μmol／L比（4．38±1．02）μmol／L，均P〈0．01]；2组NO、SOD平均呈下降趋势，但实验组下降和缓，在后两个时间点，对照组NO、SOD水平明显低于实验组[（28．57±9．20）μmol／L比（45．36±16．59）μmol／L，（12．14±7．03）μmol／L比47．50±17．18）μmol／L；（7．23±2．59）μg/L比（17．69±7．96）μg／L，（2．78±0．88）μg／L比（18．52±10．30）μg／L，P〈0．05或P〈0．01]；2组ETA mRNA的表达水平均有升高，对照组升高幅度比实验组要高，体外循环1h、2h和体外循环结束后1h差异明显[（0．35±0．01）比（0．28±0．05），（0．49±0．05）比（0．31±0．04），（0．67±0．05）比（0．38±0．07），P〈0．01]。结论体外循环不阻断升主动脉低温心室颤动左心室引流技术对心肌具有良好保护作用。

非小细胞肺癌中Survivin和Rb2/p130的表达及意义

目的:检测Survivin和Rb2/p130在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,探讨表达水平与预后的关系。方法:采用原位杂交和免疫组化法检测100份NSCLC石蜡标本中两者的表达。结果:(1)Survivin mRNA及蛋白随TNM分期增高,阳性表达率增高(P<0.01),淋巴结转移者较无转移者阳性表达率增高(P<0.01)。(2)Rb2/p130mRNA及蛋白随TNM分期增高,阳性表达率降低(P<0.05),有淋巴结转移者较无转移者阳性表达率降低(P<0.05)。(3)Survivin mRNA和蛋白的表达与Rb2/p130mRNA和蛋白的表达均呈负相关。(4)Survivin蛋白阳性组患者术后5年存活率(6.9%)显著低于阴性组(17.9%)(P<0.05),Rb2/p130蛋白阳性组术后5年存活率(16.7%)显著高于阴性组(7.1%)(P<0.01)。结论:Survivin与Rb2/p130的表达水平可能与NSCLC的进展和患者预后相关。