ROMA与TSGF联合检测在早期卵巢上皮癌风险评估中的应用价值

目的探讨卵巢上皮癌风险预测模型(ROMA)与肿瘤特异性生长因子(TSGF)联合检测在卵巢上皮癌风险评估中的应用价值。方法采用雅培i2000化学发光仪(微粒子免疫法)检测85例卵巢上皮癌患者(卵巢癌组,Ⅰ期46例、Ⅱ期39例),88例卵巢良性肿瘤患者(良性肿瘤组),81例健康女性体检人员(健康对照组)血清人附睾蛋白4(HE4)与糖类抗原CA125Ⅱ(CA125Ⅱ)水平,结合女性绝经情况计算出ROMA值;同时用日立7600-120全自动生化分析仪(速率法)检测其血清TSGF水平,并对单项及组合检测诊断早期卵巢癌的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值进行比较,探讨其联合诊断的效能。结果卵巢癌患者组血清中CA125Ⅱ、HE4、TSGF水平及ROMA值均明显高于良性肿瘤组及健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROMA及TSGF联合检测对卵巢癌诊断的敏感性为89.4%,特异性为98.9%,阳性预测值98.7%,阴性预测值90.6%,与单项检测卵巢癌敏感性和特异性相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ROMA联合TSGF检测对于早期卵巢上皮癌风险评估具有很高的临床应用价值,适用于临床首诊患者及健康体检女性的卵巢上皮癌早期风险评估。

梅毒螺旋体Hsp40蛋白的生物信息学分析及基因克隆

目的分析梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)Hsp40蛋白的生物学特性并克隆其基因。方法通过GenBank查到Hsp40蛋白的序列,利用生物信息学软件分析其生物学特性。根据Tp Hsp40基因序列设计特异性引物,利用PCR扩增Hsp40基因,并把该DNA片段连接到pMD19-T载体,转化大肠杆菌后挑取阳性克隆采用PCR和DNA测序进行验证。结果 Tp Hsp40基因能够编码374个氨基酸的蛋白质,其分子量为40.1 k Da,无信号肽,呈亲水性。Swissmodel预测得到Tp Hsp40的三级结构与嗜热杆菌(Thermus thermophilus)Hsp40结构最接近。从Tp基因组中扩增得到1125 bp的Tp Hsp40基因并将其连接到pMD19-T载体。结论本文预测了梅毒螺旋体毒力因子Hsp40蛋白的结构和克隆得到Tp Hsp40基因。

趋化因子受体3对乳腺癌调控机制的探究及其临床意义

目的研究趋化因子受体3(CCR3)在乳腺癌组织中的表达情况,并分析嗜酸性粒细胞(EOS)在CCR3对乳腺癌调控中的作用。方法通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析61例乳腺癌患者乳腺癌组织及其癌旁组织中CCR3的表达情况;检测50例乳腺癌患者(乳腺癌组)和50例健康体检者(对照组)外周血中EOS的计数及及其所占白细胞比例;运用基因集合富集分析(GSEA)法分析CCR3与乳腺癌细胞增殖和转移的关系;通过GEO数据库选取914例乳腺癌患者的乳腺癌基因芯片数据分析CCR3与乳腺癌患者预后的关系。结果乳腺癌组织中CCR3的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01)。乳腺癌患者外周血中EOS的计数及其所占白细胞比例中位水平均明显低于对照组(P<0.01)。基因富集分析结果显示,CCR3的表达与乳腺癌细胞的增殖和转移呈正相关。CCR3低、中、高表达患者的无复发生存(RFS)比较,CCR3高表达患者的RFS情况更优(P<0.01)。结论CCR3可能通过调节EOS促进乳腺癌细胞的增殖和转移,且CCR3与乳腺癌患者的无复发生存情况有关。

肺炎克雷伯菌夹膜多糖激活AP-1诱导人支气管上皮细胞表达β-防御素-3

目的:观察肺炎克雷伯菌夹膜多糖(CPS)对人支气管上皮细胞表达β-防御素-3(hBD-3)的影响,并探讨其作用机制。方法:用肺炎克雷伯菌CPS刺激人支气管上皮细胞BEAS-2B。使用实时定量PCR和ELISA分别检测hBD-3 mRNA和蛋白表达的影响。测定CPS处理前后丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)以及c-Jun的磷酸化。采用MAPKs和NF-κB抑制剂或RNA干扰TLR4表达,观察其在介导hBD-3表达中的作用。采用染色质共沉淀技术检测核转录因子AP-1与hBD-3启动子的结合情况。结果:CPS处理细胞后,hBD-3 mRNA的表达呈剂量依赖性升高,ELISA获得类似结果。CPS能激活MAPKs,采用p38、ERK及NF-κB抑制剂SB203580、PD98059和PDTC处理细胞后,不影响hBD-3的表达,而JNK抑制剂SP600125处理后,hBD-3分泌明显降低。CPS可诱导AP-1亚基c-Jun磷酸化及能增强AP-1与hBD-3启动子的结合。结论:肺炎克雷伯菌夹膜多糖激活AP-1诱导人支气管上皮细胞表达β-防御素-3。

46,XY,inv(7)(q21.2q32)1例

男,51岁,2020年5月30日因"妻子孕11周自然流产"就诊。其妻32岁,双方外观及智力均无明显异常,否认近亲结婚以及放射或有毒有害物质接触史。双方肝肾功能、血脂、血常规、尿常规、凝血功能以及女方妇科检查均未发现明显异常。先证者家族中有头发早白者,曾与前妻生育1个健康女儿。本研究通过了本院伦理委员会的审查(KY-2020052501),双方均签署了临床研究知情同意书。

梅毒螺旋体Hsp10蛋白的原核表达与纯化

目的原核表达及纯化梅毒螺旋体(Treponema palludim,Tp)热休克蛋白10(Heat shock protein 10,Hsp10)。方法利用Clustal Omega软件对Tp与其他物种的Hsp10蛋白进行多序列比对并运用生物信息学方法分析Hsp10蛋白亲水性和结构。设计特异性引物,以Tp基因组为模板,PCR扩增Hsp10基因。回收PCR产物并用EcoRI和HindIII双酶切,酶切片段与同样酶切的质粒pET28a相连,构建表达重组质粒pET28a-Hsp10,转化大肠埃希菌BL21(DE3),采用IPTG诱导重组Hsp10蛋白表达,用镍离子柱纯化目的蛋白。结果 Tp Hsp10基因编码蛋白是一个亲水性蛋白,α-螺旋、无规卷曲和β片层分别占5.7%、47.7%和45.4%,三级结构与结核分枝杆菌Hsp10(PDB:1p3h.1.C)类似,可由7个Hsp10组成一个圆形结构。PCR扩增获得的Hsp10基因全长为267bp,连接到表达载体pET28a得到重组质粒pET28a-Hsp10,编码含His标签的重组Hsp10蛋白。重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达分子质量单位为13.7ku的重组Tp Hsp10蛋白,与理论值相符。重组蛋白经镍离子柱层析纯化,获得单一条带的Hsp10。结论成功构建重组质粒pET28a-Hsp10并表达和纯化获得Hsp10蛋白,为研究其功能奠定了基础。

梅毒螺旋体Hsp40蛋白的表达、纯化及免疫学活性分析

目的表达梅毒螺旋体(Tp)Hsp40蛋白并分析其免疫学活性。方法利用软件预测TpHsp40蛋白的B细胞表位,构建重组质粒pET28a-TpHsp40,转化大肠埃希菌BL21 star(DE3),培养后利用IPTG诱导重组TpHsp40蛋白的表达。收集菌体,破碎、离心后用Ni2+层析柱进行纯化。收集80、120和200 mmol/L咪唑洗脱蛋白,经脱盐、去内毒素后取纯度良好的一组TpHsp40蛋白免疫小鼠,制备抗血清,采用ELISA检测抗体效价并分型。取小鼠脾脏,制成脾细胞悬液,采用CCK-8法检测淋巴细胞增殖情况,ELISA法测定淋巴细胞分泌的细胞因子水平。结果生物信息学分析TpHsp40含有多个B细胞表位。构建的重组质粒转染DE3后经IPTG诱导表达分子质量单位约为42.4 ku的重组TpHsp40蛋白,经亲和层析纯化后免疫小鼠,能够刺激产生高滴度(105log10)的血清抗体。且能够诱导小鼠淋巴细胞增殖(SI值为2.41)和IFN-γ、TNF-α高表达,但不能够诱导Th2型细胞因子表达。结论重组表达的梅毒螺旋体TpHsp40蛋白能够诱导小鼠产生Th1型应答,有望成为Tp疫苗的新靶点。