miRNA与糖尿病及其并发症的研究进展

糖尿病是由于胰腺β细胞产生的胰岛素减少所致胰岛素缺乏（1型糖尿病，T1DM）或胰岛素的敏感性降低（2型糖尿病，T2DM）。两种类型的糖尿病都有严重的并发症．如微血管病变、心血管功能障碍和肾功能衰竭。近年来．miRNA的特异性表达，特别是在糖尿病及其并发症中的作用已成为研究热点。miRNA作为内源性调节因子在转录后水平抑制靶mRNA的表达。本文将系统阐述不同miRNA在糖尿病及其并发症中的作用。

外周免疫耐受机制的研究进展

在T细胞发育过程中,体内自身反应性T淋巴细胞在胸腺中会通过阴性选择而清除,少数自身反应性T淋巴细胞可逃避阴性选择到达外周淋巴器官。外周免疫耐受机制的作用是抑制及限制从胸腺中逃逸出来的成熟的自身反应性T淋巴细胞的活性。维持外周免疫耐受包括克隆清除、克隆无能、免疫忽视、Treg细胞的免疫抑制、耐受型DCs等多种机制。一旦外周免疫耐受被打破,外周的自身反应性T细胞会引发自身免疫反应,从而导致严重的自身免疫疾病。

miRNA和动脉粥样硬化的研究进展

miRNA是一类大小为22个碱基左右的小RNA分子．能够在转录后水平调控基因的表达。最近已证实这类内源性基因表达抑制因子在动脉粥样硬化（As）中具有重要作用。miRNA作为AS病变各个阶段的不同刺激因子调节内皮细胞（EC）、血管平滑肌细胞（VSMC）和巨噬细胞的功能，

畸形表皮自调节因子1相关功能蛋白的筛选

目的获得畸形表皮自调节因子1(DEAF1)稳定高表达的HEK293T细胞株,通过免疫共沉淀(Co-IP)和质谱分析技术筛选能与DEAF1相互作用的蛋白质因子。方法用Turbo Fect转染试剂将p EGFP-m DEAF1和p EGFP-N1质粒分别转染HEK293T细胞和2F-2B细胞、荧光显微镜观察DEAF1在2种细胞中的定位。将质粒p3×FLAG-m DEAF1分别转染HEK293T和2F-2B细胞株,同时设置相应未转染的空白对照组;通过反转录PCR法和实时定量PCR(qRT-PCR)检测DEAF1在2种细胞中mRNA表达水平,通过Western blot法检测DEAF1在2种细胞中蛋白表达水平。p3×FLAG-m DEAF1质粒转染HEK293T细胞,G418筛选阳性克隆,Western blot法、免疫荧光染色和流式细胞术鉴定DEAF1稳定表达的HEK293T-DEAF1细胞株。抽提HEK293T-DEAF1细胞和正常HEK293T细胞的核蛋白,用EZviewTMRed ANTI-FLAG M2亲和珠子进行Co-IP,SDS-PAGE分离,挑选明显富集和对照泳道没有的条带进行质谱分析,明确DEAF1的相关功能蛋白。结果荧光显微镜下可见DEAF1定位于细胞核;反转录PCR、qRT-PCR检测发现转染组DEAF1的mRNA表达水平明显高于未转染组;Western blot法检测发现转染组有融合蛋白m DEAF1-FLAG表达,成功获得稳定高表达DEAF1的HEK293T-DEAF1细胞。经Co-IP筛选和质谱分析,得到一些DEAF1的相关功能蛋白,如前mRNA处理所需的因子及酶,参与起始后RNA聚合酶,参与肽键断裂、蛋白空间结构形成的分子和其他转录因子等。结论成功获得稳定高表达DEAF1的HEK293T-DEAF1细胞,经Co-IP筛选和质谱分析获得了一些DEAF1相关的功能蛋白。

小鼠DEAF1多克隆抗体的制备及应用

为研究DEAF1在小鼠胰淋巴结中的内源性表达及调控外周组织抗原基因表达的机制,将DEAF1的原核表达质粒转化至E.coli BL21中,诱导获得重组DEAF1蛋白;经尿素梯度裂解包涵体纯化获得的重组DEAF1蛋白分期免疫Balb/C小鼠,获取鼠抗DEAF1的多克隆抗血清;采用ELISA、Western blot、免疫荧光、免疫沉淀分别鉴定其效价、特异性、敏感性和亲和力。结果表明,抗血清可与抗原发生特异性的免疫反应,可用于检测DEAF1的表达及荧光定位,抗血清与抗原有较高的亲和力。结果证明所制备的多克隆抗血清具有较高的特异性、敏感性和亲和力。

心脏康复运动对慢性心力衰竭患者运动耐力、6分钟步行距离、左心室射血分数及血浆氨基末端脑钠肽前体水平的影响

探讨心脏康复运动对慢性心力衰竭(CHF)患者运动耐力、6min步行距离(6MWD)、左心室射血分数(LVEF)及血浆N端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平的影响。方法采用随机数字表法将84例CHF患者分为观察组和对照组,每组各42例。对照组患者采用常规康复干预6个月,观察组患者采用心脏康复运动干预6个月。比较两组患者干预前、后运动耐力[峰值耗氧量(VO_(2peak))、最大通气量(MVV)及二氧化碳通气当量斜率(VE/VCO_(2slope))]、6MWD、最大吸气压(MIP)及吸气峰流速(PIF)、心功能指标[左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(FS)、NT-proBNP]及生活质量[明尼苏达州心衰患者生活质量问卷(MLHFQ)评分]。结果干预后两组VO_(2peak)、MVV、6MWD、MIP、PIF、LVEF及FS均高于同组治疗前,VE/VCO_(2slope)、NT-proBNP及MLHFQ评分均低于同组治疗前;干预后观察组VO_(2peak)、MVV、6MWD、MIP、PIF、LVEF及FS均高于同期对照组,VE/VCO_(2slope)、NT-proBNP及MLHFQ评分均低于同期对照组(P<0.05)。结论心脏康复运动可改善CHF患者的运动耐力,同时改善其心功能、步行功能及吸气肌功能,提高其生活质量。