敲低WDHD1对鼻咽癌细胞增殖、铜含量及铜死亡相关因子的影响

目的探讨敲低WD重复序列和HMG框DNA结合蛋白1(WDHD1)对鼻咽癌细胞增殖、铜含量及铜死亡相关因子的影响。方法将鼻咽癌细胞(HK-1细胞和HONE-1细胞)分别分为对照组、敲低空载组(sh-NC组)、WDHD1敲低组(sh-WDHD1组)。对照组不做处理,sh-NC组、sh-WDHD1组分别转染阴性对照慢病毒、sh-WDHD1 RNA慢病毒。转染成功后,检测各组HK-1细胞和HONE-1细胞增殖活性、铜含量、铜死亡相关基因m RNA及蛋白表达情况;将sh-WDHD1组的HK-1细胞和HONE-1细胞分为sh-WDHD1对照组、sh-WDHD1/DMSO组、sh-WDHD1/ATTM组,分别使用完全培养基、含DMSO的完全培养基、含铜螯合剂ATTM的完全培养基进行培养,然后检测细胞铜含量。结果(1)与对照组和sh-NC组相比,sh-WDHD1组HONE-1细胞在24 h、48 h的增殖活力下降,HK-1细胞在48 h的增殖活力下降(P<0.05)。(2)在HONE-1细胞和HK-1细胞中,与对照组及sh-NC组相比,sh-WDHD1组的细胞铜含量增加,金属调节转录因子1(MTF1)的mRNA表达水平、硫辛酸合成酶(LIAS)的mRNA和蛋白表达水平增高,而血管内皮生长因子受体A(VEGFA)的mRNA表达水平、肿瘤蛋白p53(TP53)的mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。(3)与sh-WDHD1对照组及sh-WDHD1/DMSO组相比,sh-WDHD1/ATTM组HONE-1细胞和HK-1细胞的铜含量下降,HONE-1细胞在48 h的增殖活力增强,HK-1细胞在24 h、48 h的增殖活力增强(P<0.05)。结论敲低WDHD1可降低鼻咽癌细胞的增殖活性,增加细胞内铜含量蓄积,上调铜死亡促进因子LIAS、MTF1的表达,下调铜转运关键因子VEGFA及铜代谢关键因子TP53的表达。TP53和LIAS可能在WDHD1影响鼻咽癌细胞的铜蓄积和铜死亡进程中发挥重要作用。

汉黄芩素抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的研究

目的探究汉黄芩素对鼻咽癌细胞C666-1、HK-1增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用CCK8实验明确汉黄芩素对鼻咽癌细胞C666-1、HK-1的活性抑制作用,并计算IC_(50);采用平板集落形成实验明确汉黄芩素对鼻咽癌细胞C666-1增殖和独立生存能力的影响;采用划痕实验和Transwell迁移实验研究汉黄芩素对鼻咽癌细胞迁移能力的影响;最后采用Transwell侵袭实验研究汉黄芩素对鼻咽癌细胞侵袭能力的影响。结果CCK8实验结果显示,汉黄芩素对C666-1和HK-1细胞的活力均表现出明显的抑制作用,随药物浓度增加,抑制效果明显增强;同一药物浓度下,药物作用48 h的抑制效果高于24 h,抑制效果表现为剂量时间依赖性;汉黄芩素作用于C666-1细胞24 h的IC_(50)值为37.15μmol/L、48 h为20.75μmol/L;汉黄芩素作用于HK-1细胞24 h的IC_(50)值为29.09μmol/L、48 h为20.46μmol/L。平板集落实验结果显示,汉黄芩素干预后,鼻咽癌细胞C666-1细胞形成肉眼可见集落的数目更少,体积更小。划痕实验和Transwell迁移实验显示,C666-1及HK-1细胞的迁移能力明显受到抑制,且药物浓度越高,抑制作用越强。Transwell侵袭实验显示,汉黄芩素干预后,穿过基质胶后迁移至下室的细胞数目明显减少。结论汉黄芩素能抑制鼻咽癌细胞的活性、增殖、迁移以及侵袭的能力。