广东汉族人群TLR2基因的多态性研究

目的:人类Toll样受体2(TLR2)是先天免疫系统中一个重要的病原微生物识别受体。本研究将建立广东汉族人群TLR2基因座位的功能性多态性图谱,为下一步疾病相关性研究打下基础。方法:收集200例健康、无亲缘关系的中国广东汉族人外周血液,随机抽取其中24例样品,对TLR2基因的启动子区、3个外显子以及它们周围的部分内含子序列进行聚合酶链式反应(PCR)扩增和直接测序,找出多态性位点,对剩余176例样品分别用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)及PCR技术对发现的单核苷酸多态性(SNPs)和插入/缺失(INDEL)多态性位点进行基因分型,分型结果进行Hardy-W e inberg平衡分析、中性进化分析以及连锁不平衡分析。结果:发现5个SNPs位点,其中2个位于启动子区的SNPs是首次发现,位于编码区的3个SNPs位点均为同义突变,频率最高的SNP是rs3804099,其次要等位基因频率为26.3%;在第1外显子区发现1个长度为22bp的INDEL多态位点(-196到-174),其缺失等位基因所占的频率为31.8%。所有多态性位点均符合Hardy-W e inberg平衡。中性检验显示广东汉族人群TLR2基因符合中性进化假说。连锁不平衡分析显示位于调控区的-18945 C/T和-18883 C/G 2位点之间完全连锁,而位于编码区的rs3804099和rs3804100两位点之间紧密连锁。结论:本研究首次建立了汉族正常人群TLR2基因座位的功能性多态性图谱,并研究了其分布频率,发现了一些种族特异性的多态性位点,为今后开展汉族人基因多态性与疾病相关性研究以及人群进化研究提供了重要资料。

中国九江汉族人群TLR2基因单核苷酸多态性与Graves病易感关系

目的:研究九江汉族人群TLR2基因多态性与Graves病的易感关系。方法:本研究采用特异性引物PCR方法,基于病例-对照研究的实验设计,对333例甲亢病例和368例正常对照的TLR2基因上的rs3804100和rs5743705位点进行了基因分型。结果:患者男女比例约为1∶2.6,女性有更高的患病风险;所有位点均符合哈迪-温伯格平衡。没有在总体病例、对照之间观察到多态位点基因型和等位基因频率的显著差异。然而,在对发病年龄和性别进行分层分析后发现,在GD早发病人中(≤40岁),SNP位点rs3804100的A/A基因型(P=0.013,OR=1.53,95%CI=1.11-2.12)以及A等位基因频率(P=0.020;OR=1.37;95%CI=1.05-1.79)显著高于正常对照组。结论:TLR2基因rs3804100位点的A/A基因型可能会显著增加人群40岁以前患GD的风险。

儿童1型糖尿病外周血Foxp3^+调节T细胞和细胞因子变化及相关分析

目的探讨初发儿童1型糖尿病(T1DM)外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Foxp3+Treg)及相关细胞因子的表达水平与自身抗体和胰岛细胞功能的关系。方法 45例儿童T1DM(T1DM组)患儿根据有无并发酮症酸中毒(DKA)和是否出现自身抗体分为DKA组、非DKA组、自身抗体阳性组、自身抗体阴性组,30例正常健康儿童作为对照组。采用流式细胞术检测外周血Foxp3+Treg百分率,ELISA法检测血清IL-18、IL-10的表达水平,免疫印迹法(IB)检测血清谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、胰岛素瘤相关蛋白2自身抗体(IA-2A)和胰岛素自身抗体(IAA);电化学发光法(ECLIA)检测血清空腹C肽(FC-P)水平。结果 T1DM组外周血Foxp3+Treg百分率、血清IL-10水平和FCP含量明显低于正常对照组(P<0.01),而血清IL-18水平则显著高于正常对照组(P<0.01);DKA组、自身抗体阳性组外周血Foxp3+Treg百分率和FCP含量明显低于非DKA组和自身抗体阴性组(P<0.01),血清IL-18水平则显著高于非DKA组和自身抗体阴性组(P<0.01),IL-10在T1DM各组间差异无统计学意义。T1DM组患者GADA、IA-2A和IAA的检出率明显高于正常对照组(P<0.01,P<0.05)。相关分析显示,Foxp3+Treg百分率与IL-10、FC-P水平呈正相关,而与IL-18水平及自身抗体呈负相关;IL-18与自身抗体呈正相关,而与IL-10、FC-P呈负相关;IL-10水平与FC-P含量及胰岛自身抗体无明显相关性。结论初发儿童1型糖尿病外周血Foxp3+Treg百分率减低及相关细胞因子的表达水平失衡可能参与了儿童T1DM的发生和发展,并与自身抗体和胰岛细胞功能相关。

类风湿性关节炎患者microRNA-146a的表达及与血清学指标的相关性

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是常见的以关节滑膜慢性炎症为主要特征的自身免疫性疾病,其主要病理改变为关节滑膜明显增厚并有大量炎症细胞浸润,血管翳形成以及软骨组织的侵蚀与破坏[1]。microRNA可被分泌释放到细胞外,参与多种炎性和自身免疫性疾病的发病过程[2]。Micro-RNAs（miRNAs）是一类短的（大约20～22个核苷酸）非编码RNA,介导RNA干扰和在翻译水平抑制蛋白表达。miRNAs与自身免疫性疾病进程有关且可能参与RA新的调控机制[2-4]。miRNA-146a与类风湿性关节炎密切相关,TNF-α[5]和IL-17[6]目前被认为是RA的一种重要致炎因子,均与疾病活动程度相关;而C-反应蛋白（C-reactive protein,CRP）[7]是一种急性时相反应蛋白,可以反映患者的疾病活性;一直以来,类风湿因子（rheumatoid factor,RF）是美国风湿病协会RA诊断标准中的血清学指标之一[8-9];因此本研究采用实时荧光定量PCR检测miR-146a在RA患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononu-clear cell,PBMC）表达水平,同时检测血清CRP、RF、IL-I7、TNF-α含量,分析miR-146a在RA外周血中的表达及与CRP、RF、IL-I7、TNF-α的相关性,有助于进一步探讨其在RA发病及疾病进展中的意义。