小鼠骨桥蛋白重组腺病毒的体外构建及表达

目的:构建表达小鼠骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因的重组腺病毒载体,并在主动脉平滑肌细胞(smooth musclecells,SMC)中初步探索其参与血管重塑的相关机制。方法:提取FVB/N遗传背景小鼠的主动脉总RNA,利用针对OPN基因序列设计的特异性引物,应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增OPN基因,将PCR产物酶切后连接入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV载体中,构建pShuttle-CMV-OPN重组穿梭质粒。PCR及测序鉴定正确后,经酶切线性化转染携带腺病毒骨架载体pAdEasy-1的BJ5183感受态细胞进行同源重组,获得pAd-CMV-OPN重组腺病毒质粒。利用磷酸钙法将线性化的pAd-CMV-OPN质粒转染人源胚肾293AA (human embryo kidney 293AA,HEK293AA)细胞进行包装和生产,获得携带OPN基因的重组腺病毒。通过PCR检测病毒原液中重组OPN质粒的包装情况。利用已构建的OPN重组腺病毒感染小鼠SMC,初步探究OPN对血管重塑相关蛋白的调控。结果:成功构建携带OPN基因的重组腺病毒质粒,经磷酸钙-DNA共沉淀转染HEK293AA细胞后,7天可见明显的细胞病变效应,8天后约有60%细胞脱落,收集细胞,反复冻融后分装冻存。与空载体病毒相比,过表达OPN显著上调血管重塑相关蛋白I型胶原(collagen I,Col I)和基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases 2,MMP-2)的表达。结论:利用pAdEasy-1腺病毒载体系统成功构建携带OPN基因的重组腺病毒,在SMC中OPN可能通过上调Col I与MMP-2参与血管重塑。

2009—2014年国产中药批准情况分析

目的为了解国产中药批准情况及发展趋势提供参考。方法对2009—2014年间国家食品药品监督管理局批准注册的12 297条中药数据记录进行统计分析。结果2010年国产中药批准数量激增,2011年中药批准数量出现回落,2012年后,中药批准数量稳步上升,逐渐趋于平稳。不同地区间中药获批数量存在明显差异。批准的国产中药仍以传统剂型为主。结论药品年批准数量逐渐趋于稳定,地区间药品获批数量不均衡,中药新兴剂型注册有待增加。

已上市核酸类药物的制剂学研究进展

近年来,随着对疾病基因相关机制的不断深入研究,包括质粒DNA、反义寡核苷酸、小干扰RNA、微小RNA及其他基因疗法在内的核酸类药物,引发了全球的广泛关注,其中一些核酸类药物已获得批准上市,用于临床治疗。然而,核酸在体液和细胞内运输所面临的一系列障碍,如容易在血液中快速降解、肝肾清除速度快、细胞摄取效率低以及难以从内吞体逃逸等问题,极大阻碍了核酸类药物的临床应用。病毒和非病毒基因传递系统能将基因传递至胞浆或细胞核,并显示出良好的疗效,已成为核酸类药物体内递送的主要技术手段。本文主要介绍核酸类药物在机体内传递的各种挑战,总结近年来已获批上市的核酸类药物的发展,同时重点从制剂学角度探讨这些已上市的核酸类药物所采用的基因传递系统特点。