改良腹腔镜Swenson与Soave术对儿童短段型先天性巨结肠疗效差异

目的对腹腔镜Soave术(LS)和改良腹腔镜Swenson术(MLSw)在儿童短段型巨结肠的治疗效果和并发症进行比较分析。方法回顾分析我科自2007年3月至2016年12月收治的77例儿童短段型巨结肠临床资料。LS术26例,MLSw术51例。收集两组术前、术中和术后临床资料进行分析,随访12~48个月。结果 MLSw组平均手术时间、术中出血量和住院时间比LS组少。两组术后平均进食时间无明显差异。MLSw组术后早期并发症的发生率较LS组低,但两组术后晚期并发症发生率无明显差异。结论 LS和MLSw术都适用于儿童短段型巨结肠的治疗。但MLSw操作更简单,术后早期的排便控制更好。更重要的是,MLSw术可完全切除无神经节细胞肠段,而无需保留直肠肌鞘。

左侧胎儿横纹肌样肾母细胞瘤1例分析

患者男,2岁6个月,2010年3月8日因＂发现左侧腹部包块10d＂入院,入院时食欲胃纳好,无发热,无咳嗽、无咳痰,大小便通畅,无血尿,无尿频尿急。入院查体：神清、精神好,营养中等,

腹股沟可触及睾丸的小儿隐睾的腹腔镜治疗体会

目的探讨腹腔镜技术在小儿腹股沟可触及隐睾中的应用。方法对23例26侧腹股沟可触及睾丸的隐睾患儿进行腹腔镜睾丸下降固定术治疗。其中左侧隐睾8例,右侧隐睾12例,双侧隐睾3例。结果 23例中有20例隐睾患者经腹腔镜手术均能分离到足够长度的精索及输精管,使睾丸能通过腹股沟管顺利降至阴囊中而I期完成手术。术后随访6月睾丸发育良好,睾丸无回缩,均未出现睾丸萎缩、腹股沟斜疝及鞘膜积液等并发症。3例转为腹股沟开放性手术。结论腹腔镜治疗腹股沟可触及的隐睾方法可行,疗效满意。

大鼠脂肪干细胞向肠神经样干细胞转分化的初步实验研究

目的初步探讨应用小分子SB431542、noggin和LDN1931897将大鼠脂肪干细胞(ADSCs)转分化成肠神经样干细胞的可行性,为先天性巨结肠的细胞治疗提供一种新的种子细胞。方法取SD大鼠腹股沟脂肪组织分离培养ADSCs。当ADSCs传代至第3代时,加入小分子SB431542、noggin、LDN1931897以及肠神经培养基进行转分化实验。通过光学显微镜观察细胞形态学变化和应用免疫荧光染色检测其肠神经干细胞特异性标记物表达情况。结果ADSCs在含有3种小分子的肠神经细胞培养基中转分化培养7天后形成神经球样的细胞团。免疫荧光染色法检测发现神经干细胞特异性标记物Nestin呈阳性表达,肠神经干细胞标记物Sox2呈阳性表达。结论小分子SB431542、noggin和LDN1931897可在肠神经培养基中将ADSCs转分化为肠神经样干细胞。ADSCs有可能作为先天性巨结肠干细胞移植的种子细胞来源。

先天性巨结肠的腹腔镜治疗体会

目的探讨腹腔镜技术在小儿先天性巨结肠治疗中的应用。方法对12例先天性巨结肠患儿行腹腔镜Swenson手术,其中短段型3例,普通型8例,长段型1例。结果 12例患者均在腹腔镜下完成手术,无中转开腹病例。手术切除痉挛段和扩张段病变肠管送病理检查,其中最短者约15cm,最长者约60cm。术后病理均显示符合先天性巨结肠诊断。所有病例均未出现吻合口漏、尿潴留、肛周感染等并发症。术后随访3～12个月,所有病例排便功能恢复良好,而且无大便失禁和便秘症状。结论腹腔镜先天性巨结肠根治术创伤小、术后恢复快,手术安全,效果满意。

猪脂肪干细胞体外多向分化潜能的实验研究

目的探讨猪脂肪干细胞(Adipose-Derived Stem Cells,ADSCs)在体外是否具有多向分化潜能。方法从猪项背部皮下脂肪组织中获取ADSCs,经过体外培养扩增至第2代分别进行成软骨细胞、成骨细胞和成脂肪细胞诱导分化,通过免疫荧光和RT-PCR对其相关表型进行检测。结果猪ADSCs在体外成软骨诱导分化2周后有特异软骨基质Ⅱ型胶原和Aggrecan表达,RT-PCR检测显示有Ⅱ型胶原、Aggrecan和Sox-9mRNA的表达;体外成骨诱导分化2周后有与成骨相关的OPN、OCN和ONN表达;体外成脂肪诱导2周后,经油红染色显示细胞内有脂滴形成。结论猪ADSCs在体外具有向成软骨细胞、成骨细胞和成脂肪细胞分化的潜能。

RNAi抑制NANOG表达对肝癌细胞HepG2中MDR1表达及阿霉素敏感性的影响

目的探讨抑制NANOG表达对肝癌细胞HepG2中多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1)表达及阿霉素敏感性的影响。方法将靶向NANOG基因的特异性siRNA转染肝癌细胞HepG2,Real-time PCR和Western blot检测siRNA沉默NANOG基因后NANOG、MDR1 mRNA和蛋白的表达,平板克隆形成实验检测沉默NANOG基因后对细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测沉默NANOG基因后对细胞周期的影响,CCK-8法检测沉默NANOG基因后HepG2细胞对阿霉素的敏感性情况。结果靶向NANOG基因特异性siRNA转染肝癌细胞HepG2后,能有效抑制NANOG mRNA和蛋白表达,与Mock组比值分别为(0.32±0.05)和(0.38±0.08);与Mock组比较,沉默NANOG基因后,细胞克隆形成率下降[(8.51±3.63)%vs(17.13±2.24)%,P<0.05],进入G0/G1期的细胞比例增多[(75.33±8.21)%vs(57.81±5.05)%,P<0.05],HepG2细胞对阿霉素的敏感性增强(P<0.05),HepG2细胞内MDR1 mRNA和蛋白表达下降,与Mock组比值分别为(0.35±0.06)和(0.41±0.08)。结论抑制NANOG表达可引起肝癌细胞HepG2中MDR1的表达下调并增强细胞对阿霉素的敏感性。

应用淤胆血清“病理微环境”从ESC中筛选肝干细胞的研究

目的:探讨淤胆血清"病理微环境"培养体系诱导胚胎干细胞(ESC)向肝细胞分化的效果及对肝干细胞的筛选作用。方法:将小鼠ESC细胞系E14在无白血病抑制因子培养基中培养,使其自发分化为拟胚体,加入FGF-4和HGF初步诱导,然后置于5%淤胆鼠血清"病理微环境"筛选培养液中继续培养2周,然后进行细胞形态学观察,ALB和CK8/18免疫荧光染色,电镜检查和吲哚氰绿(ICG)摄取试验。结果:经初步诱导分化的ESC置于5%淤胆血清"病理微环境"筛选培养液中培养,初期细胞生长受抑制,部分细胞坏死、凋亡并脱落。1周左右可见上皮样细胞集落呈优势生长。2周左右可见较多肝细胞样集落形成单位(H-CFU),大部分细胞分化为多角形的肝细胞样细胞,呈现较好的均质性,从中央到周边呈逐渐分化成熟的趋势;免疫荧光染色显示ALB和CK8/18表达;电镜检查可见与肝细胞相似的超微结构;吲哚氰绿(ICG)摄取试验可见大量ICG阳性细胞,提示这些细胞具备部分肝细胞特性,且筛选诱导组ICG阳性率显著高于对照组(P<0.05)。结论:采用含淤胆血清的"病理微环境"培养体系从经FGF-4和HGF初步诱导的胚胎干细胞中有效筛选出了具有功能的肝细胞样细胞。

miRNA-122促进小鼠胚胎干细胞源性肝前体细胞的分化与成熟

目的:通过miRNA-122(miR-122)转染胚胎干细胞(ESCs)源性肝前体细胞,观察及评估其是否能推进ESCs向肝细胞的分化过程。方法:采用丁酸钠、成纤维细胞生长因子4(FGF-4)及地塞米松(Dex)联合序贯诱导小鼠ESCs使之初步分化为肝前体细胞,然后利用Gateway技术构建出pAV.Ex1d-CMV>miR122/IRES/eGFP重组腺病毒表达载体,使其转染贴壁诱导第9天的小鼠ESCs源性肝前体细胞,获得稳定高表达miR-122的细胞后继续培养。采用荧光显微镜观察转染后细胞形态的变化;使用real-time RT-PCR检测肝特异性基因的表达;免疫荧光检测肝特异性蛋白表达水平;吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验检测肝细胞功能。结果:丁酸钠、FGF-4及Dex联合序贯诱导可将小鼠ESCs成功地诱导为肝前体细胞。转染miR-122后,细胞在形态学上更接近成熟肝细胞;肝特异性基因白蛋白(ALB)、甲状腺素运载蛋白、α1抗胰蛋白酶、葡萄糖-6-磷酸酶、细胞角蛋白8、胆固醇7α-羟化酶及细胞色素P450 3A4的mRNA表达均增高;肝特异性蛋白ALB及细胞角蛋白18均表达增高,而甲胎蛋白表达降低;吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验结果均显示转染miR-122后肝细胞功能较对照组明显增强。结论:丁酸钠、FGF-4及Dex联合序贯诱导可将小鼠ESCs成功地诱导为肝前体细胞;miR-122能够有效地促进小鼠肝前体细胞的分化与成熟。

沉默NANOG表达对人肝癌细胞HepG2中cyclin D1表达及细胞增殖的影响

目的:探讨RNA干扰沉默NANOG表达后对肝癌细胞HepG2中细胞周期素D1(cyclin D1)表达及细胞增殖的影响。方法:将以NANOG基因为靶点的NANOG-siRNA瞬时转染肝癌细胞HepG2,real-time PCR和Western boltting检测NANOG、cyclin D1 mRNA和蛋白的表达,CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期情况。结果:与mock组比较,转染NANOG-siRNA后,肝癌细胞HepG2中NANOG、cyclin D1mRNA和蛋白水平均下调(P<0.05),细胞增殖能力下降(P<0.05),进入G0/G1期的细胞比例增多(P<0.05)。结论:沉默NANOG表达可引起肝癌细胞HepG2中cyclin D1的表达下降,导致细胞增殖能力下降。

NANOG基因在侧群表型干细胞样肝癌细胞中的表达及意义

【目的】基于侧群(SP)细胞分选方法,从肝癌细胞Huh7和Hep3B中分选SP表型干细胞样肝癌细胞,观察干细胞标记物NANOG基因在该SP表型肝癌细胞中的表达。【方法】采用流式细胞术检测和分选肝癌细胞Huh7和Hep3B中的SP细胞和非侧群(NSP)细胞,细胞生长曲线法检测SP和NSP细胞的增殖能力,Transwell侵袭实验检测SP和NSP细胞的侵袭能力,MTT法检测SP和NSP细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)和阿霉素(DOX)的药物敏感性;Real-time PCR和WB检测SP与NSP细胞中NANOG基因的表达。【结果】肝癌细胞Huh7和Hep3B中分选的SP细胞比例分别为(5.3±0.8)%和(13.49±1.0)%。生长曲线表明Huh7和Hep3B的SP细胞的增殖速度快于NSP细胞(P<0.05),体外侵袭实验结果显示Huh7和Hep3B的SP细胞体外侵袭能力高于NSP细胞(P<0.05),MTT结果显示Huh7和Hep3B SP细胞对5-FU和DOX有耐药性,高于NSP细胞(P<0.05)。Huh7和Hep3B SP细胞NANOG mRNA平均表达水平分别是NSP细胞的4.17和5.51倍(P<0.05),NANOG蛋白平均表达水平分别是NSP细胞的3.78和5.01倍(P<0.05)。【结论】肝癌细胞Huh7和Hep3B中分选的SP细胞符合肿瘤干细胞的部分生物学特征,NANOG基因在SP表型干细胞样肝癌细胞中高表达。

小儿腹腔镜阑尾切除与开腹阑尾切除的临床对比研究

目的 对比研究小儿腹腔镜阑尾切除术（LA）与传统开腹阑尾切除术（OA）的临床疗效及安全性.方法 回顾性分析2009年1月～2012年12月期间进行LA和OA的93例小儿阑尾炎患者的临床资料,对两组手术时间、术中出血情况、术后恢复情况等进行统计对比分析.结果 两组患儿手术及恢复顺利,术后无严重并发症.两组手术时间及术中出血量差异均无统计学意义（P＞0.05）;LA组术后肛门排气时间、下床活动时间、切口疼痛时间、术后住院天数均低于OA组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 与OA比较,小儿LA具有创伤小、并发症少,恢复快及美容等优势,是治疗小儿阑尾炎理想的手术方式.

MYCN-siRNA和神经生长因子联合诱导神经母细胞瘤细胞分化凋亡的实验研究

目的:探讨应用MYCN-siRNA和神经生长因子(NGF)联合诱导神经母细胞瘤细胞分化凋亡的分子机制。方法:实验分组包括MYCN-siRNA与NGF联合诱导组、NGF诱导组、siRNA诱导组和空白对照组。观察各实验组神经母细胞瘤细胞的形态学变化及细胞的增殖变化,通过Real-TimePCR检测MYCN-mRNA和NSE的表达、Western Blot检测MYCN基因沉默后MYCN蛋白的表达情况。结果:神经母细胞瘤MYCN基因沉默后,RT-PCR检测IMR-32细胞MYCN-mRNA表达的抑制率达到89%;Western Blot检测IMR-32转染MYCN-siRNA后的第3天MYCN蛋白的表达率达到最低,表达率下降至26.6%。在NGF和MYCN-siRNA的共同作用下,神经母细胞瘤细胞出现了较明显的细胞形态学分化,细胞的增殖能力明显下降,IMR-32细胞NSE的表达明显下降。结论:MYCN-siRNA和NGF联合诱导神经母细胞瘤细胞,可使MYCN-mRNA的表达和NSE的表达均明显下降,并促进神经母细胞瘤细胞分化凋亡。

腹腔镜下单孔法治疗小儿腹股沟斜疝的优势探讨

目的通过比较腹腔镜下单孔法及双孔法治疗小儿腹股沟斜疝的临床应用,探讨腹腔镜下单孔法在治疗小儿腹股沟斜疝中的优势。方法通过回顾性分析我科自2006年1月至2011年3月收治的80例小儿腹股沟斜疝患儿,分别采用腹腔镜下双孔法及单孔法缝扎腹股沟斜疝单侧疝囊内环治疗,每组各收治40例,年龄在6个月到5岁范围。结果在缝合正常大小内环口的病例中,腹腔镜下单孔法缝扎单侧内环口操作时间平均为11.8min(手术用时范围10～13min),双孔法操作平均时间为12.3min(手术用时范围11～14min);而在缝合较大内环口的用时时间上,单孔法手术用时明显较双孔法手术时间短(11.3min,14.23min)。术后随访平均6个月(3个月～1年),手术患儿均无腹股沟斜疝复发。结论相比较腹腔镜下双孔法高位结扎腹股沟疝疝囊,采用腹腔镜下单孔法高位缝扎腹股沟斜疝疝囊,不仅具有美观、创伤小的优势,同时操作时间较短,更适合治疗较大内环口的腹股沟斜疝。

大学生情感心理与性心理健康课程教育成效分析

目的 :探索大学生心理素质课程教育的可行性、有效性 ,以促进大学生作为心理素质重要内涵的情感心理与性心理健康水平的提高。方法 :应用认知学习、行为主义、人本主义等心理教育与辅导的原理 ,采用知识讲授、行为指导、情景扮演、互助讨论、自我发现与完善等启发指导性、互动性、情景式的综合教学方法开展课程教育。结果 :大学生对课程教育的内容、形式及时间安排持积极肯定性评价者分别为 90 5 %、65 0 %及 83 4% ,认为总体效果很满意、较满意者达 92 8%。认为自己在情感心理与性健康知识学习方面发生中等以上变化者达 80 9%以上 ,同时认为在情感与恋爱情感心理的内涵、问题处理与把握能力、方法的学习方面发生变化者达 66 7%以上 (仅 1项为 3 8 1% )。对自我和社会的性伦理道德建设持积极态度者达 5 2 3 %以上。结论 :课程教育是开展心理素质教育的有效途径 ,有助于促进大学生情感心理与性心理健康发展。启发指导性、互动性、情景式的综合教育方法适合于大学生。

大学生情感心理与性心理健康课程教育方法探讨

目的 :探索大学生心理素质课程教育的可行性、有效性和情感心理与性心理健康课程教育方法的适合性。方法 :运用认知学习、行为主义、人本主义等心理教育与辅导的原理 ,采用知识讲授、行为指导、情景扮演、互助讨论、自我发现与完善等启发指导性、互动性、情景式的综合教学方法开展课程教育。结果 :大学生对课程教育的内容、形式和时间安排持积极肯定性 (很满意、较满意 )评价者分别为 90 5 %、65 0 %和 83 4% ,认为总体效果很满意、较满意者达 92 8% ;其中“情景互动式”的“心理情景剧”教学内容和形式最优选择频数加权总和排序为第一。同时提出改进教学内容、形式等方面 11项积极的建设性意见。结论 :课程教育是开展心理素质教育的有效途径 ,启发指导性、互动性、情景式的综合教育方法有助于促进大学生情感心理与性心理健康发展。课程教育中应注重教育内容和形式的协调统一 ,不断改进教学方法 。

经肛门I期先天性巨结肠根治术临床观察

目的探讨经肛门I期先天性巨结肠根治术的治疗方法和临床效果。方法对12例已证实为短段型或普通型先天性巨结肠患儿行经肛门I期先天性巨结肠根治术。年龄3月至5岁,平均1.8岁。结果全组手术顺利,无死亡。术后1周左右出院,随访半年,术后有1例出现轻度排便困难,经保守治疗痊愈。有3例出现不同程度的污粪,3～6月后痊愈。无严重并发症,生长发育良好。结论经肛门I期巨结肠根治术适用于患短段型或普通型先天性巨结肠症的婴幼儿,手术创伤小,不需开腹,合并症少、手术时间短,效果满意。

不同气腹压力对腹腔镜疝囊高位结扎患儿生命体征的影响

目的评估不同气腹压力对腹腔镜疝囊高位结扎患儿围手术期恢复的影响。方法采用前瞻性随机对照的研究方法,将60例接受腹腔镜疝囊高位结扎的患儿随机分为3组。A组为常规气腹压力组(9 mm Hg)、B组为低气腹压力组(7 mm Hg)、C组为阶梯式气腹压力组(9 mm Hg^5 mm Hg)。观察并比较不同气腹压力下,建立气腹前10 min、建立气腹后10 min、手术结束时3个时间点患儿的生命体征、血气变化及术后疼痛情况。结果 3组患儿手术均顺利完成,无中转改开放手术,无围手术期并发症发生。气腹后10min各组内收缩压、舒张压较气腹前升高,手术结束时常规气腹压组收缩压及心率较气腹前升高(P<0.05);在建立气腹后10min及手术结束时各组间及组内脉血二氧化碳分压(Pa CO_2)、呼末二氧化碳分压(PETCO_2)差异有显著性差异(P<0.05);3组患儿CO_2消耗量、手术时间无显著性差异(P>0.05);在疼痛评估方面,低气腹压组、阶梯式气腹组患儿术后12h疼痛程度低于常规气腹压组患儿(P<0.05)。结论医护人员密切配合、适时动态调节气腹压力(阶梯式气腹压力)下实施腹腔镜疝囊高位结扎术是安全、可行的,并可显著降低患儿术后疼痛程度。

394例小儿可触及隐睾的腹腔镜治疗体会

目的:探讨腹腔镜在小儿可触及隐睾手术中的应用价值。方法:分析了2012年1月至2020年6月,我院小儿外科收治的394例隐睾患儿,分别施行腹腔镜睾丸下降固定术;腹腔镜结扎鞘状突,直接于阴囊取切口行睾丸下降固定术;腹腔镜打开同侧鞘状突,将睾丸拉入腹腔分离,再行睾丸下降固定术。结果:394例可触及隐睾患儿中双侧隐睾有113例(28.7%),右侧隐睾有160例(40.6%),左侧隐睾有121例(30.7%)。其中有325例存在一侧或双侧鞘状突未闭,均在术中同时行腹腔镜下鞘状突高位结扎术。另有6例患儿,术中发现同侧鞘状突已闭合,但睾丸位于腹股沟中段,遂于腹腔镜下打开鞘状突,将睾丸拉入腹腔分离后行睾丸下降固定术。394例患儿均能Ⅰ期将睾丸下降及固定于阴囊,术后均不存在腹股沟区切口。结论:腹腔镜下治疗小儿可触及隐睾,可以更彻底地分离精索血管及输精管,创伤小,手术效果好,术后美观,在临床中值得推广。

应用商环行小儿改良包皮环切术800例治疗体会

目的探讨应用商环行改良包皮环切术的临床效果。方法应用商环行改良性包皮环切术,用3把血管钳提起包皮口,将商环内环倾斜塞入龟头与包皮内板之间,再将商环外环套于包皮外板外并卡紧,对800例患儿行包皮环切术,分析其手术时间、出血量、脱环时间、术后并发症、术后外观满意情况。结果手术时间为4.65±1.25 min,平均出血量<3 mL,术后并发症主要为感染0.50%(4/800)、包皮明显水肿3.12%(25/800)、伤口裂开0.25%(2/800)、伤口出血0.25%(2/800),脱环时间14±5 d,术后再粘连2.25%(18/800),外观满意率达99.38%(795/800),98.13%(785/800)的家长觉得治疗费用合理。结论应用商环行小儿改良包皮环切术,手术时间短、出血量少、术后并发症少、外观满意率高,是治疗小儿包茎、包皮过长的良好方法,具有优势。