仔猪常见12种致病菌的23S rRNA基因序列分析

以107条从NCBI下载和测序的12种仔猪常见致病菌的23S rRNA基因序列为研究对象,运用DNASTAR软件进行系统发育分析。结果显示:以各种细菌的23S rRNA基因代表序列所进行的种间序列分析结果与伯杰氏细菌分类手册和http://www.wiki.cn/wiki/细菌分类表的分类结果一致,也与这12种菌的16S rRNA基因序列分类结果一致。因此,在23S rRNA基因序列保守区设计通用引物,在其变异区设计各种细菌特异性探针,用PCR捕捉被检样品中未知细菌的23S rDNA片段并与种特异性23S rRNA基因探针进行杂交,有可能将未知细菌鉴定到种。

用反向斑点杂交方法检测猪常见致病菌

目的:建立检测猪常见致病菌的反向斑点杂交方法。方法:将23S rRNA基因芯片用的针对12种细菌的25～30 mer探针加长到30～38 mer,2对通用引物序列不变。用地高辛标记下游引物,以尼龙膜为载体制备膜芯片,检验探针/膜杂交的特异性和敏感性;另外设计1条大肠杆菌K88基因探针、一段带K88探针的报告基因和1对报告基因的反向PCR引物,在PCR体系中增加封口的K88报告基因和反向引物对,被检样品扩增后进行膜杂交。结果:修改的13条探针与参考目标菌株在膜上成特异性杂交,对52个参考菌株和野外分离株的检测准确率为92%;膜杂交的敏感性与玻片芯片接近,最小检出量为100 fg DNA;在尼龙膜上增加K88探针,与3重PCR产物杂交,可以检测到大肠杆菌K88毒力基因。结论:建立的反向斑点杂交方法简便快速,检测成本低,可用于仪器设备不足的实验室,同时可以加入检测如大肠杆菌K88等致病基因,提高基于保守基因的芯片的诊断能力。

猪蓝耳病在规模化猪场的流行趋势与防控

猪蓝耳病,又称繁殖与呼吸综合征(PRRS),是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的1种繁殖障碍与呼吸道疫病的传染病,其特征是发热、食欲减退、怀孕母猪后期发生流产、产死胎和木乃伊胎,幼龄动物发生呼吸道障碍。同时欧洲基因型新变异型的出现,加重了仔猪的死亡与妊娠母猪的流产,以及与其他高热病混合感染并难以清除,对养猪业造成了重大经济损失。笔者对PRRS在我国的流行趋势与防控对策进行了论述,以期为规模化猪场的PRRS防控提供参考依据。

猪蓝耳病在规模化猪场的流行趋势及防控对策

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)又称猪蓝耳病,由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种繁殖障碍与呼吸道疫病的传染病。其特征是发热、食欲减退、怀孕母猪后期发生流产、产死胎和木乃伊胎,幼龄动物发生呼吸道障碍。同时,欧洲基因型新变异型的出现,加重了仔猪的死亡与妊娠母猪的流产,以及与其它高热病混合感染并难以清除,对养猪业造成了重大经济损失。该文阐述了猪蓝耳病在我国的流行趋势,提出了接种疫苗防控、药物防控、综合防控等防控对策。

用于检测仔猪致病菌的23S rRNA基因芯片的研制

以副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、肠道沙门氏菌、猪链球菌等12种仔猪致病菌为目标细菌,23SrRNA基因为靶基因,从GenBank中下载其23SrDNA全序列,在其变异区设计特异性探针,在保守区设计通用引物。通过序列分析、PCR靶标与探针杂交试验,建立了有13条寡核苷酸探针和2对通用引物的仔猪常见致病菌基因芯片检测方法。以参考菌株粗提基因组DNA的10倍系列稀释模板做PCR,扩增产物与探针杂交,检出芯片的灵敏度为100fg。对33个参考菌株用芯片检测,结果有1例不正确,只鉴定到属;在61个野外分离株中,55株的芯片检测结果与生化或测序结果一致,有6例不一致,符合率为90%。初步研究证明,该检测方法能快速、有效地鉴定多种仔猪常见致病菌,但要区分某些细菌的致病株与非致病株,还要检测毒力/毒素基因。

发酵床养殖对猪常见疾病防控效果的影响

为评估发酵床模式对安全养猪的影响,对4个猪场的猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体和致病性大肠杆菌、沙门菌、猪链球菌及寄生虫携带情况进行了检查。结果显示:发酵床与水泥地2种模式饲养猪的病毒病抗体水平和寄生虫检查结果差异不明显;发酵床猪群的致病菌检出率略低于水泥地面养殖猪群。从半年间的试验数据和观察看,与水泥地面相比,发酵床养殖没有对猪常见疾病的防控产生不良影响。