抗污染扩增试剂在法医物证检验中的应用

客观、准确的法医遗传检验结果是作出准确鉴定意见的基础。随着检验设备、扩增检测试剂检验灵敏度日益增加,防控实验室污染、样品污染的压力与日俱增,其中PCR扩增产物对检测结果的污染最难防控。本文测试一款抗污染扩增试剂盒NH-18A,该试剂盒包含16个常染色体STR基因座,1个性别识别基因座(Amel)和一个Y染色体插入缺失基因座(Indel),NH-18A通过STR复合扩增可得到含有尿嘧啶碱基的DNA片段,该类型的DNA片段在50℃时可被尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)高效水解,每次新一轮PCR扩增前增加一步50℃保温孵育可以彻底消除既往扩增产物对结果的污染威胁。经实验验证,NH-18A具有优异的抗扩增产物污染能力,且替换碱基扩增不改变DNA分型结果,检测灵敏度和DNA产物片段稳定性不降低,后续电泳分析不受影响。利用此试剂盒可以有效消除扩增产物对鉴定结果的污染。

炎黄Y-STR识别系统的应用研究

目的验证炎黄Y染色体分型系统FGI 27Y试剂盒的性能并分析其法医学参数,评价其法医学应用价值。方法按照我国公共安全行业标准GA/T 815-2009《法庭科学人类荧光标记STR复合扩增检测试剂质量基本要求》,对FGI 27Y试剂盒进行灵敏度、混合样本、种属特异性等测试。并利用FGI 27Y试剂盒对269份中国汉族男性无关个体血卡进行检测,统计27个STR基因座的等位基因频率、基因多样性及单倍型多样性参数。同时查阅文献,收集不同人群的STR数据,与本文的汉族群体STR数据进行比较分析,统计群体遗传距离FST矩阵。结果 FGI 27Y在DNA模板量低至0.0625ng或大量女性DNA(男性与女性1:300混合)条件下仍然能获得男性DNA的完整分型结果。且在男性混合样本(1:9和9:1)中,等位基因检出率达到88%以上。27个Y-STR的基因多样性在0.4058~0.8973,单倍型多样性值为1。利用FST矩阵分析可得,不同人种间的遗传距离均较远,而相同人种间的遗传距离相对较近。结论炎黄Y染色体分型系统FGI 27Y试剂盒满足GA/T 815-2009《法庭科学人类荧光标记STR复合扩增检测试剂质量基本要求》,可用于Y-STR数据库建设以及男性家系排查。

基于切口酶的等温全基因组扩增体系的建立与应用

目的 建立依赖切口酶Nt.BstNBI的等温全基因组扩增体系,并对该体系的微量生物物证STR分型效能进行验证。方法 选用切口酶Nt.BstNBI(识别序列为GAGTC)和等温扩增的聚合酶Bst,建立切口酶依赖的扩增体系(NDA)。对DNA样本进行NDA并纯化NDA产物,对NDA前后的样本进行复合扩增和毛细管电泳,检测该方法的有效性、灵敏性。结果 007标准品12个常染色体基因座的扩增效率提高2倍以上,灵敏度约为3 pg/μL;19个Y染色体个基因座的扩增效率提高2倍以上,灵敏度约为6 pg/μL。8个人血样本扩增效率提高2倍以上的常染色体基因座与007标准品一致。结论 本文建立的NDA体系准确性好,能够对包含特定侧翼序列的STR基因座进行有效的线性扩增,对法医微量生物物证的高效扩增检测具有重要意义。