ghrelin对小鼠脓毒症肺损伤焦亡通路及炎症因子的影响

目的分析ghrelin蛋白对小鼠脓毒症肺损伤焦亡通路及炎症因子表达的影响,探讨其在脓毒症肺损伤中的保护机制。方法将健康雄性C57BL/6小鼠180只,分为假手术组(sham,n=24)、盲肠结扎穿刺模型组(the cecal ligation and puncture CLP,n=78)和ghrelin组(n=78)。使用盲肠结扎穿刺法建立脓毒症模型,ghrelin组于造模后3、20 h腹腔各给药ghrelin 12 nmol/kg,其他组给予等量生理盐水。观察各组120 h的生存率,分别留取术后6、12、24 h CLP组、ghrelin组和24 h sham组小鼠肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)以及肺组织,检测BALF中总蛋白浓度和细胞总数,ELISA法检测ghrelin、IL-10、IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18,免疫荧光染色法检测GSDMD表达,qPCR、Western blot检测焦亡信号通路NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD蛋白的表达。结果与sham组比较,CLP组的死亡率、肺组织病理改变以及炎症因子(IL-10、IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18)明显升高(P<0.05);肺组织ghrelin水平降低,NLRP3、ASC、Caspase-1和GSDMD蛋白水平明显升高(P<0.05)。给予外源性ghrelin后,ghrelin组小鼠死亡率降低,肺组织病理结构损害减轻,炎症因子以及NLRP3、ASC、Caspase-1和GSDMD蛋白水平表达降低(P<0.05)。结论ghrelin改善脓毒症肺损伤小鼠生存率,减轻肺组织病理学改变,可能通过抑制焦亡途径、降低炎症反应等发挥保护作用。

Drp1介导的线粒体动力学平衡在脓毒症心肌细胞损伤的机制研究

目的分析抑制动态相关蛋白1(dynamin related protein 1,Drp1)介导的线粒体过度分裂对脓毒症心肌细胞和线粒体功能的影响,探讨维持线粒体动力学平衡在脓毒症心肌病(sepsis induced cardiomyopathy,SIC)发病过程中的保护作用。方法培养大鼠H9C2心肌细胞,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激细胞建立SIC细胞模型,LPS刺激30 min前予线粒体分裂抑制剂(mitochondrial division inhibitor 1,Mdivi-1)干预,分为对照组(Control)、LPS刺激组(LPS)Mdivi-1对照组(Mdivi-1)和LPS+Mdivi-1干预组(LPS+Mdivi-1)。CCK-8检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测细胞损伤情况,MitoTracker探针染色激光共聚焦观察线粒体形态,JC-1探针染色检测线粒体膜电位水平,DCFH-DA探针检测细胞总活性氧(ROS)水平,Annexin V-FITC/PI探针流式细胞仪检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR、Western blot检测Drp1、视神经萎缩蛋白1(optic Atrophy 1,Opa1)、线粒体融合蛋白2(mitofusin 2,Mfn2)表达水平。组间差异比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果与Control组相比,LPS刺激组细胞存活率明显降低,LDH活性升高,线粒体平均长度减小,线粒体膜电位下降、细胞ROS生成增多,细胞凋亡增加(均P<0.05);予以Mdivi-1干预后,与LPS刺激组相比,细胞存活率升高,心肌细胞损伤减轻线粒体平均长度延长,线粒体功能障碍减轻,细胞凋亡受到抑制(均P<0.05)。结论Mdivi-1可能通过抑制Drp1介导的线粒体分裂维持线粒体动力学平衡,减轻线粒体功能障碍,从而保护LPS诱导的心肌细胞损伤。