益肾降浊冲剂对慢性肾衰大鼠肾组织细胞凋亡及BAX、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:观察益肾降浊冲剂对慢性肾功能衰竭大鼠肾细胞凋亡的影响及其机制.方法:雄性SD大鼠60只随机分为五组:假手术组、模型组、益肾降浊冲剂大、小剂量治疗组和大黄素治疗组.处理2个月后,处死大鼠并收集血清肌酐和尿素氮值,HE染色观察肾脏病理组织改变,Tunel染色检测肾细胞凋亡,免疫组织化学检测肾组织凋亡蛋白Bcl-2、BAX的表达.结果:(1)各组大鼠BUN、Scr 比较:模型组大鼠BUN(18.63±2.67)、Scr(120.96±20.43)明显高于假手术组BUN(7.42±0.92)、Scr(41.56±10.80),益肾降浊冲剂大剂量组BUN(14.23±1.76)、Scr(82.40±8.35)明显低于模型组,大黄素组BUN(16.33±1.95)、Scr(95.88±10.88)明显低于模型组,益肾降浊冲剂大剂量组BUN、Scr明显低于大黄素组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)各组大鼠肾细胞凋亡比较:假手术组凋亡指数(191.60±42.69)明显低于模型组(911.40±91.81),大黄素组(487.00±77.83)及益肾降浊冲剂大剂量组凋亡指数(266.60±59.50)明显低于模型组,益肾降浊冲剂大剂量组凋亡指数明显低于大黄素组;差异有统计学意义(P<0.05);(3)各组大鼠BAX、Bcl-2蛋白在肾脏组织表达的比较:模型组大鼠BAX(1 157.40±123.31)明显高于假手术组BAX(224.80±51.64),益肾降浊冲剂大剂量组BAX(505.20±14.04)明显低于模型组,大黄素组BAX(796.60±40.64)明显低于模型组,益肾降浊冲剂大剂量组BAX明显低于大黄素组;模型组大鼠Bcl-2(157.60±38.66)明显低于假手术组Bcl-2(789.00±73.23),益肾降浊冲剂大剂量组Bcl-2(559.60±73.15)明显高于模型组,大黄素组Bcl-2(412.80±70.96)明显高于模型组,益肾降浊冲剂大剂量组Bcl-2明显高于大黄素组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:益肾降浊冲剂通过有效减少BAX表达,增加Bcl-2表达,来减少CRF大鼠肾细胞的凋亡.可能是其改善临床症状及延缓慢性肾衰的机制之一.

益肾降浊冲剂对5/6肾切除模型大鼠肾纤维化及NF-κB和TGF-β_(1)/Smad3信号通路的影响

目的:探讨益肾降浊冲剂对5/6肾切除大鼠肾组织纤维化的影响及其机制。方法:利用大鼠5/6肾切除模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、益肾降浊冲剂低、中、高剂量组和大黄素组,每组10只。益肾降浊冲剂按照低、中、高剂量(9 g/kg,18 g/kg,36 g/kg)配成水煎剂,大黄素的剂量为500 mg/kg,灌胃量为1 mL/100 g,模型组和假手术给予等体积蒸馏水灌胃,连续用药8周。治疗结束后,取腹主动脉血检测各组大鼠尿素氮(BUN)、肌酐(SCR);ELISA法检测各组大鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;Masson染色观察肾脏纤维化程度;免疫组化法检测肾组织核因子κB(NF-κB)、转化生长因子β_(1)(TNF-β_(1))及Smad3蛋白含量。结果:与假手术组相比,模型组大鼠血清BUN、SCR水平升高(P<0.01),肾组织纤维化程度加重,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05,P<0.01),NF-κB、TGF-β_(1)、Smad3蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,益肾降浊冲剂各剂量组大鼠血清BUN、SCR水平下降(P<0.01),肾组织纤维化程度减轻,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05,P<0.01),NF-κB、TGF-β_(1)、Smad3表达下降(P<0.05,P<0.01)。结论:益肾降浊冲剂可以改善尿毒症大鼠的肾脏功能,减轻肾脏纤维化,其机制可能与下调NF-κB和TGF-β_(1)/Smad3通路进而改善尿毒症大鼠肾纤维化有关。

黄芪多糖对硫酸吲哚酚诱导的心肌细胞损伤的保护作用

目的:研究黄芪多糖对硫酸吲哚酚诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)损伤的保护作用。方法:体外培养H9c2细胞,实验分为空白对照组、硫酸吲哚酚组、硫酸吲哚酚+黄芪多糖不同浓度组。CCK-8检测各组细胞的细胞活力,荧光分光光度计检测各组细胞ROS水平,利用RT-qPCR检测各组细胞中的Caspase-3、Caspase-9的mRNA表达水平,western blot检测各组细胞Caspase-3,Caspase-9蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,硫酸吲哚酚组能够显著降低H9c2的细胞活力,同时增加细胞中ROS的含量(P<0.01)。与硫酸吲哚酚组比较,硫酸吲哚酚+不同浓度黄芪多糖组,细胞活力逐渐上升,ROS含量逐渐下降(P<0.05)。此外,与硫酸吲哚酚组相比,硫酸吲哚酚+不同浓度黄芪多糖组能够明显下调caspase-3、caspase-9的mRNA及蛋白表达水平(P<0.01)。结论:硫酸吲哚酚可能通过引起氧化应激从而诱导H9c2细胞损伤,而黄芪多糖可能通过降低ROS水平,以及降低细胞中Caspase-3、Caspase-9基因及蛋白表达水平,从而改善硫酸吲哚酚对H9c2细胞的损伤。

培土制水法对尿毒症心肌病大鼠心脏组织中ATP含量、线粒体凋亡途径的影响

目的研究培土制水法中药方益肾降浊冲剂对尿毒症心肌病大鼠心脏保护作用的相关机制。方法采用大鼠5/6肾切除模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、大黄素组和培土制水法中药方益肾降浊冲剂低、中、高剂量组各10只。各药物组大鼠给予相应的药物灌胃,每日1次,疗程为2个月,假手术组和模型组给予等量的蒸馏水灌胃。治疗结束后,取腹主动脉血检测各组大鼠尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠心脏病理变化;化学发光法检测各组大鼠心脏组织中三磷酸腺苷(ATP)含量;原位末端转移酶标记法(Tunel)检测心脏组织中心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测心脏组织中细胞色素C(Cytochrome C)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、半胱氨酸蛋白酶9(Caspase-9)蛋白表达。结果与模型组比较,益肾降浊冲剂能够减轻尿毒症心肌病大鼠的心脏病理改变,改善尿毒症心肌病大鼠的BUN、Scr、CK-MB、LDH水平,提高尿毒症心肌病大鼠心脏组织中ATP的含量,降低心肌细胞的细胞凋亡率,心肌细胞Cytochrome C、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论培土制水法中药方益肾降浊冲剂对尿毒症心肌病大鼠的心脏保护作用可能与其抑制线粒体凋亡途径有关。

益肾降浊冲剂对尿毒症心肌病大鼠心脏Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨益肾降浊冲剂对大鼠尿毒症心肌病心脏Bcl-2、Bax的影响。方法:5/6肾切除术制作尿毒症心肌病模型。SD大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、大黄素组及益肾降浊冲剂低、中、高剂量组。益肾降浊冲剂低、中、高剂量组及大黄素组在大鼠术后予益肾降浊冲剂、大黄素灌胃,假手术组和模型组大鼠术后予等量蒸馏水灌胃。免疫组织化学法观察心脏组织中Bcl-2、Bax表达情况;Western blot及RT-qPCR检测心脏组织中Bcl-2、Bax蛋白及mRNA表达情况。结果:与假手术组比较,模型组Bax蛋白及mRNA表达显著上升(P<0.01),Bcl-2蛋白及mRNA表达显著下降(P<0.01);与模型组比较,益肾降浊冲剂中、高剂量组Bax蛋白及mRNA表达显著下降(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白及mRNA表达显著上升(P<0.05,P<0.01)。结论:益肾降浊冲剂对尿毒症心肌病心脏的保护作用可能是与增加大鼠心肌组织中Bcl-2的表达,降低其Bax的表达有关。

大黄素对硫酸吲哚酚诱导的心肌细胞损伤的保护作用

目的观察大黄素对硫酸吲哚酚(IS)诱导的H9c2细胞损伤的保护作用,探讨大黄素对尿毒症心肌病细胞模型保护作用的机制。方法体外培养大鼠心肌细胞H9c2后,IS刺激H9c2细胞为细胞损伤模型,以大黄素为干预药物,将细胞随机分为空白组,IS组以及不同浓度大黄素组(20、40、60 μmol/L)。采用MTT法测定各组细胞活力,流式细胞术测定各组细胞间的活性氧(ROS)以及细胞凋亡水平,RT-qPCR、Western Blot检测各组细胞中Bcl-2、BAX、Caspase-3和Caspase-9 mRNA及蛋白表达水平。结果与空白组比较,IS组细胞活力降低(P<0.01),ROS水平及凋亡率升高(P<0.01),细胞内BAX、Caspase-3、Caspase-9 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.01);与IS组比较,不同浓度大黄素组细胞活力升高(P<0.05,P<0.01),ROS水平及凋亡率降低,细胞内BAX、Caspase-3、Caspase-9 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.01),Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论大黄素可能通过抗氧化应激以及抑制凋亡等途径对IS诱导的心肌损伤起到一定的保护作用。