ATRA通过抑制铁死亡缓解脂多糖诱导的小鼠急性心肌损伤

目的研究全反式维甲酸(ATRA)对脂多糖(LPS)诱导C57BL/6小鼠急性心肌损伤的影响及机制。方法20只C57BL/6雄性小鼠随机均分成正常组、模型组、ATRA组、ferrostatin-1组。ATRA组和ferrostatin-1组小鼠分别腹腔注射ATRA[15 mg/kg·d]、ferrostatin-1[2 mg/(kg·d)],正常组和模型组给予溶剂,持续给药一周后,模型组、ATRA组、ferrostatin-1组腹腔注射LPS(6 mg/kg),6 h后处死所有小鼠。检测小鼠血清中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量;qPCR检测心脏组织IL-6、TNF-α的mRNA水平;苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠心脏组织变化;透射电子显微镜(TEM)观察小鼠心肌线粒体的结构;蛋白质印迹法(Western blot)检测铁死亡标志物[谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)]以及相关调控蛋白[核因子E2相关因子2(NRF2)、kelch样ECH关联蛋白1(KEAP1)]的表达。结果与正常组小鼠相比,模型组小鼠血清中MDA含量上升、GSH含量下降、还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的比值(GSH/GSSG)下降,ATRA组和ferrostatin-1组逆转以上变化;与正常组小鼠相比,模型组小鼠心脏组织IL-6、TNF-α的mRNA水平增高,与模型组相比ATRA组和ferrostatin-1组mRNA水平降低;各组小鼠心肌组织HE染色无明显差异;TEM显示与正常组相比,模型组心肌线粒体出现嵴减少或消失的现象,与模型组相比,ATRA组和ferrostatin-1组心肌线粒体嵴数量增多;Western blot显示,与正常组相比,模型组小鼠心肌组织中GPX4、FTH1、SLC7A11、NRF2蛋白表达减少,ACSL4、KEAP1蛋白表达增加,ATRA组、ferrostatin-1组逆转以上变化。结论ATRA通过抑制铁死亡缓解脂多糖引起的小鼠急性心肌损伤。

载Cas9-RNP细胞膜囊泡仿生纳米粒的制备及其对小鼠巨噬细胞NLRP3基因的敲低作用

目的通过使用小鼠巨噬细胞膜包裹Cas9核糖核蛋白复合物(RNP),制备Cas9-RNP仿生纳米粒Cas9-RNP@MMs,旨在利用此仿生纳米粒递送Cas9-RNP复合物用于基因编辑,并进一步在体外研究小鼠巨噬细胞RAW264.7对Cas9-RNP@MMs的内吞情况及其基因编辑效果,为开发低毒性的抑制NLRP3治疗靶点的仿生纳米粒载体提供证据。方法将提取的小鼠巨噬细胞细胞膜与制备的Cas9-RNP混合,超声后使用脂质体挤压仪挤压得到Cas9-RNP@MMs。使用纳米颗粒跟踪仪检测Cas9-RNP@MMs的颗粒直径,透射电子显微镜下观察Cas9-RNP@MMs的颗粒形态。激光共聚焦荧光显微镜成像分析细胞对Cas9-RNP@MMs的内吞情况。采用MTT法检测Cas9-RNP@MMs生物相容性。通过qPCR和Western blot检测NLRP3表达,来验证Cas9-RNP@MMs敲低NLRP3基因的效果。结果采用巨噬细胞细胞膜制备的Cas9-RNP@MMs平均粒径约为216 nm;激光共聚焦荧光显微镜下,Cas9-RNP@MMs能成功被RAW246.7细胞摄取;MTT检测结果显示Cas9-RNP@MMs处理的小鼠巨噬细胞RAW246.7具有良好的生物相容性;qPCR和Western blot检测显示,有两条NLRP3特异的向导RNA(sgRNA)通过Cas9-RNP@MMs介导,有良好的敲低NLRP3基因表达的效果。结论利用仿生纳米粒成功制备了内腔载有Cas9-RNP复合物的纳米级囊泡Cas9-RNP@MMs,Cas9-RNP@MMs具有良好的生物相容性并且可以被RAW246.7细胞高效内吞;含有NLRP3特异的sgRNA的Cas9-RNP@MMs能够特异性敲低NLRP3基因表达。

褪黑素减轻高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的机制

目的探究褪黑素(MLT)对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的影响及其可能的分子机制。方法培养HUVEC并分为3组:对照组、模型组和治疗组。对照组用葡萄糖浓度为5.5 mmol/L的DMEM培养基处理,模型组用高糖(葡萄糖浓度为30 mmol/L)的DMEM培养基处理,治疗组用含有100μmol/L MLT的高糖DMEM培养基处理。MTT法检测高糖及MLT对HUVEC增殖的影响,试剂盒法测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量,流式细胞术检测活性氧(ROS)的生成,Hoechst 33342/PI双染检测细胞凋亡和坏死情况,Western blot检测高糖及MLT对HUVEC内质网应激和细胞焦亡相关蛋白表达的影响。结果与对照组相比,模型组的细胞增殖水平下降;细胞培养上清液中LDH释放量增加;HUVEC中ROS生成增加;双染试验显示,蓝色荧光和红色荧光增加,GRP78、ATF4、CHOP、IRE1α、PERK、ATF6α、NLRP3、cleaved caspase-1、IL-1β蛋白表达量增加。与模型组相比,治疗组的细胞增殖水平升高;细胞培养上清液中LDH释放量减少;HUVEC中ROS生成减少;双染试验中蓝色荧光和红色荧光减少,GRP78、ATF4、CHOP、IRE1α、PERK、ATF6α、NLRP3、cleaved caspase-1、IL-1β蛋白表达量减少。结论MLT可以减轻高糖诱导的HUVEC损伤,其机制可能与调控内质网应激和细胞焦亡有关。

兽用灭活疫苗浓缩纯化工艺浅谈

兽用疫苗在畜禽疾病防控中发挥重要作用，通过接种疫苗机体产生抗体保护动物不受特定传染病感染和传播。随着兽用疫苗市场竞争加剧，兽用疫苗生产企业高度重视质量提升，疫苗分离纯化技术提高疫苗效力降低副反应的有效手段之一。本文对兽用疫苗浓缩纯化工艺及技术应用进行探究。