胃癌MKN-45细胞系的无血清培养技术及干细胞的制备

目的胃癌干细胞的制备困难一直是阻碍胃癌研究进展的主要因素。文中研究无血清培养基悬浮培养胃癌MKN-45细胞系技术,并根据胃癌干细胞(cancer stem cells,CSCs)的生物学标记筛选出该细胞系中的干细胞。方法 MKN-45细胞系在无血清培养基中培养8周后,取对数生长期的MKN-45细胞以Hoechst33342孵育后流式细胞仪(FACS)检测侧群细胞。当侧群细胞达约25%时,收集全部细胞微球体,加荧光标记的CD133和CD44单抗孵育后FACS筛选,选CDl33^+CD44^+细胞即为胃癌干细胞。结果胃癌MKN-45细胞系中约40%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖并形成自由飘浮的细胞球。双苯酰胺33342染色检测提示MKN-45细胞中侧群细胞含量为3.4%,而细胞球中侧群细胞细胞含量则明显增高,可达到26.9%;收集的侧群细胞通过FACS检测表面标记,MKN-45细胞CDl33^+CD44^+细胞含量为11.2%,而细胞球中CD133^+CD44^+细胞含量为90.3%。结论应用无血清培养基悬浮培养法能成功获得CSCs富集的肿瘤球,Hoechst33342及表面标记双重检测提取法可筛选出其中的CSCs,并可作为今后胃癌干细胞研究的实验基础。

微量不对称催化实验教学:手性半酯的合成

采用“有机酸-有机碱”协同共催化合成策略,实现了在温和反应条件下催化内消旋环状酸酐的不对称醇解,并通过柱前衍生化高效液相色谱法对所得手性半酯产物的对映体过量百分数(ee值)进行了测定。在该实验中融合了绿色化学发展理念等思政元素、无水无氧操作技术、薄层色谱喷雾显色、柱前衍生化、手性HPLC等多种教学理念、现代实验技术和测试表征方法,将一个涉及光学活性物质合成与ee值检测的前沿科研实验开发成为了一个适合本科教学环境的微型有机合成综合实验,同时还可以进行模块化拆分教学,满足于不同内容和不同学时的实验教学要求。