病毒性肝炎患者两类免疫效应细胞的功能变化

为探讨病毒性肝炎患者体内细胞免疫功能的变化规律及相互关系。采用APAAP法、斑蝥皮泡法检测T细胞亚群、巨噬细胞吞噬率 (PR)及吞噬指数 (PI) ,并分析其相互关系。结果显示病毒性肝炎组CD3+ 细胞、CD4+ 细胞、CD4+ /CD8+ 比值降低、CD8+ 细胞升高 ,与对照组比较有显著差异 (P <0 0 1) ,各型病毒性肝炎组病人PR与CD4+ /CD8+ 比值正相关 ,其中CAH组相关系数r =0 76 4(P <0 0 5 )。病毒性肝炎患者T细胞及巨噬细胞免疫功能均降低 ,且密切相关。结果有助于了解病毒性肝炎患者免疫功能的整体变化 ,对病毒性肝炎的免疫学诊断及免疫功能调整有一定意义。

华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因的鉴定及其编码区序列克隆

目的 通过cDNA文库筛选识别华支睾吸虫新基因 ,并将所发现的华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白 (csTCTP)编码区克隆到原核表达质粒PGEX - 4T - 1和真核表达质粒 pcDNA3上 ,为进一步研究其功能奠定基础。 方法 将插入于 pBlue script质粒上的cDNA进行随机测序 ,在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析 ,识别华支睾吸虫新基因 ,并应用Motifsan、Scan prosite等程序对其进行结构域分析。根据PGEX - 4T - 1和pcDNA3上的克隆位点及所发现的csTCTPcDNA编码序列设计引物 ,进行PCR扩增 ,扩增产物回收纯化后克隆到原核表达载体PGEX4T - 1和真核表达载体 pcDNA3上。构建的PGEX4T- 1-csTCTP、pcDNA3-csTCTP重组表达质粒经PCR、双酶切及测序证实。 结果 发现华支睾吸虫新基因———csTCTP ,完整阅读框含 5 10个碱基 ,编码 16 9个氨基酸 ,理论分子量为 19 4 5 96Kd。序列分析表明 ,csTCTP编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性 ,Motifscan及Scanprosite程序发现推导的氨基酸序列具有TCTP保守的完整功能域以及两个典型的TCTP完整标签。所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符。结论 发现华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白基因 ,并成功构建原核和真核重组表达质粒。

华支睾吸虫表膜相关抗原重组表达载体的构建

目的 通过筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因 ,并构建 2 0 8kDa华支睾吸虫表膜相关抗原(CSTA2 0 8)重组表达载体 ,为进一步研究其功能及其应用奠定基础。方法 对华支睾吸虫cDNA文库进行筛选 ,通过NCBI和ExPasy网站的Blast程序进行序列比对 ,识别华支睾吸虫新基因 ,并应用Motifscan、NCBIConservedDo mainSearch等程序对其进行结构域分析。将所发现的华支睾吸虫表膜相关抗原基因编码区定向克隆到原核及真核表达载体PGEX - 4T - 1和PcDNA3上 ,构建的PGEX - 4T - 1-CSTA2 0 8、PcDNA3-CSTA2 0 8重组表达质粒经PCR、双酶切及测序证实。结果 发现华支睾吸虫表膜相关抗原基因 ,完整阅读框含 5 5 5个碱基 ,编码 184个氨基酸 ,理论分子量为 2 0 8kDa ,理论pI为 4 33。序列分析表明 ,华支睾吸虫CSTA2 0 8编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性 ,CSTA2 0 8具有完整的钙结合蛋白保守功能域。所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符。结论 发现华支睾吸虫表膜相关抗原基因 。

蛋白质组学研究及其在寄生虫学上的应用

蛋白质组学为寄生虫学的研究提供了新的研究手段。本文就蛋白质组学研究的主要技术 (双向电泳、生物质谱技术、图象分析、生物信息学等 )和内容 ,及其在寄生虫学研究中的现状和应用 (新药物靶、新药物的发现、疫苗候选分子的寻找等 )

全长cDNA文库的构建和新基因全长cDNA克隆的策略

基因全长cDNA克隆是研究基因功能的前提之一。新基因全长cDNA克隆的方法很多,目前比较可行且应用较多的主要是cDNA文库筛选。本文主要介绍了近年来比较常用的全长cDNA文库的构建及全长cDNA的克隆(包括“电子”基因克隆)的策略和方法及其进展。

正丁酸钠诱导人肝癌细胞表型分化的观察

目的 探讨ＳＢ对人肝癌细胞的诱导分化作用。方法 以０－２ｍｍｏｌＬ的ＳＢ作用于培养的人肝癌细胞ＧＨＣ－ ３，作用３０ 天后恢复正常培养，观察癌细胞表型的变化。结果 人肝癌细胞生长抑制；ＳＢ作用３０ 天细胞形态由多角型转变为棱形，ＣｏｎＡ凝集现象消失，琼脂集落形成率下降；染色体主流范围变窄，二倍体及亚二倍体比例升高；３Ｈ－ ＴｄＲ 掺入率、细胞ＤＮＡ含量下降与对照比较有显著差异（ Ｐ＜ ０－０１） ；并观察到，上述细胞再经不含ＳＢ 的正常培液继续培养三代后该细胞表型未发生明显改变。结论 人肝癌细胞在低剂量丁酸钠持续作用下，某些恶性表型可发生部分逆转，且这些改变在恢复正常培养后可保持相对稳定。

鼻咽癌患者及其患病风险者红细胞免疫功能研究

目的：探讨红细胞免疫在 Ｎ Ｐ Ｃ发病中的意义。方法：采用免疫粘附法检测了 Ｎ Ｐ Ｃ患者和不同滴度 Ｖ Ｃ Ａ－ Ｉｇ Ａ 者的红细胞免疫粘附功能、红细胞免疫调节因子活性。结果： Ｎ Ｐ Ｃ 患者的红细胞免疫粘附功能下降，红细胞免疫促进因子活性降低、抑制因子活性升高； Ｎ Ｐ Ｃ 患病风险者（ 高滴度 Ｖ Ｃ Ａ－ Ｉｇ Ａ 者） 的红细胞免疫粘附及其调节功能与 Ｎ Ｐ Ｃ患者的变化相似，只是程度不同；低滴度 Ｖ Ｃ Ａ－ Ｉｇ Ａ 者红细胞免疫粘附功能及促进因子活性未发生显著变化，但红细胞免疫抑制因子活性降低、红细胞免疫功能趋于抑制。结论：红细胞免疫功能的改变在 Ｎ Ｐ Ｃ发病机制中具有一定作用。

鼻咽癌患者T细胞、巨噬细胞及红细胞免疫功能研究

目的 探讨鼻咽癌患者体内多种免疫效应细胞功能的变化规律及其临床意义。方法 分别采用ＡＰＡＡＰ法、斑蝥皮泡法、免疫粘附法及酶免法检测了２９ 例鼻咽癌患者Ｔ细胞亚群、巨噬细胞吞噬率（ＰＲ）及吞噬指数（ＰＩ）、红细胞免疫粘附功能及血清ｓＩＬ２Ｒ水平，并分析其相互关系。结果 鼻咽癌组病人ＣＤ＋３ 细胞、ＣＤ＋４ 细胞、ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 比值降低、ＣＤ＋８ 细胞升高，与对照组比较有显著差异（Ｐ＜ ０．０１）；鼻咽癌患者ＰＲ与ＰＩ均显著低于对照组（Ｐ＜ ０．０１）；鼻咽癌组红细胞Ｃ３ｂ 受体花环率（Ｃ３ｂ ＲＲ）显著低于对照组（Ｐ＜ ０．０１），循环免疫复合物花环率（ＩＣＲ）则显著高于对照组（Ｐ＜ ０．０１）；鼻咽癌患者血清ｓＩＬ２Ｒ明显升高。Ⅲ期以上的鼻咽癌患者与Ⅱ期以下组比较上述免疫指标均有显著差异（Ｐ＜ ０．０１）。鼻咽癌组Ｃ３ｂ ＲＲ与ＰＲ及ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ ，ＰＲ与ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 正相关。ｓＩＬ２Ｒ与Ｃ３ｂＲＲ、ＰＲ及ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 均显著相关（Ｐ＜ ０．０５）。结论 鼻咽癌患者多种免疫效应细胞功能下降，并随病情进展，免疫功能进一步下降。

《免疫学及免疫学检验》“三维教学模式”的探索与实践

教学模式是教学组织、教学内容、教学方法、教学过程的总体概括。不同学科由于自身特点的不同,有自身的内在规律。因此,在教学内容、教学方法、教学手段等整个教学体系中也应该有与之相适应的教学规律。积极探索本学科的教学规律,对于提高教学质量,培养学生的综合素质均大有裨益。

临床免疫学“三维教学模式”的探索与实践

结合临床免疫的学科特点，在教学中实行“教学-临床-科研”相结合的三维教学模式，将知识的传授-知识的应用-知识的升华结合起来，有助于学生综合素质的提高，有助于创新性人才的培养。实践表明该教学模式可以提高学生的自学能力、思维能力、初步科研能力及分析解决问题的能力．

华支睾吸虫溶血磷脂酶基因的识别、克隆和序列分析

目的 筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因 ,并将所发现的华支睾吸虫溶血磷脂酶 (csLysoPLAH)基因编码区克隆到原核表达质粒PGEX 4T 1和真核表达质粒pcDNA3上 ,为进一步研究其功能奠定基础。 方法 对华支睾吸虫cDNA文库进行随机筛选并测序 ,在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析 ,识别华支睾吸虫新基因 ,并应用Motifsan、NCBIConservedDomainSearch等程序对其进行结构域分析。根据PGEX 4T 1和 pcDNA3上的克隆位点及所发现的csLysoPLAHcDNA编码序列设计引物 ,进行PCR扩增 ,扩增产物回收纯化后克隆到原核表达载体PGEX 4T 1和真核表达载体 pcDNA3上。构建的PGEX 4T 1 csLysoPLAH、pcDNA3 csLysoPLAH重组表达质粒经PCR、双酶切及测序证实。 结果 发现csLysoPLAH基因 ,完整阅读框含 70 8个碱基 ,编码 2 3 5个氨基酸 ,理论分子质量为 2 5 .2 62 8ku ,理论pI为6.0 3。序列分析表明 ,csLysoPLAH编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性 ,csLysoPLAH具有磷脂酶 /羧酸酯酶保守功能域和完整的脂酶保守功能域 ,并含有丝氨酸酯酶特征性的标签肽 (即GXSXG)。所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符。 结论 发现华支睾吸虫溶血磷脂酶基因 ,并成功构建原核和真核重组表达质粒。

正丁酸钠逆转人肝癌细胞恶性表型的动态观察

目的探讨正丁酸钠对人肝癌细胞恶性表型的逆转作用。方法以0．2mmol／L的正丁酸钠（sodiumbutyrate，SB）作用于培养的人肝癌细胞GHC－3，动态观察癌细胞生长、形态、ConA凝集性、琼脂集落形成率、染色体数目、DNA合成、DNA含量等表型的变化。结果SB作用7天，人肝癌细胞生长抑制；SB作用15天ConA凝集现象减弱；作用30天后细胞形态由多角型转变为棱形，细胞ConA凝集现象基本消失；经SB作用15天、30天、45天的细胞球脂集落形成率由对照组的4．54％下降为2．53％、1.45％、1．31％；SB作用30天、45天细胞3小时3H－TdR掺入率由2330．24士10．31cpm／105cells下降为1372．5123．41cpm／105cells和1136．23土17．23cpm／105cells，细胞DNA含量由198．511．18μg/107cells下降为134．78土0．53μg/107cells和104．78土0．53μg/107cells；均有显著差异（P＜0．01）。染色体主流范围变窄，二倍体比例逐渐升高而亚三倍体比例逐渐下降，三倍体消失。结论人肝癌细胞在正了酸钠持续作用下，某些恶性表型可发生进行性逆转。

端粒酶RNA反义寡核苷酸对人肺癌细胞端粒酶活性和细胞增殖的影响

目的 观察脂质体介导的端粒酶RNA反义寡核苷 (ASODN)对人肺癌细胞系端粒酶活性的作用及其对癌细胞增殖的影响。 方法 合成与人类端粒酶RNA模板区碱基序列互补的ASOND ,并用阳离子脂质体转染剂DO SPER介导 ,作用于人肺癌细胞系 ,空白组和正义寡脱氧核苷酸 (SODN)作为对照。用以PCR为基础的端粒重复序列扩增法 (TRAP)结合ELISA方法检测肺癌细胞的端粒酶活性。台盼蓝拒染法细胞计数、噻唑蓝 (MTT)试验观察癌细胞增殖情况。 结果 脂质体介导的抗端粒酶ASODN对肺癌细胞的端粒酶活性具有抑制作用 ;细胞计数和MTT试验显示肺癌细胞增殖速度明显减慢。 结论 针对端粒酶模板区的ASODN可显著抑制端粒酶活性和肺癌细胞的增殖 。

正丁酸钠对人肝癌细胞的生物学效应

探讨正丁酸钠对人肝癌细胞的生物学效应。方法：以１ｍｍｏｌ／Ｌ的ＳＢ的作用于培养的人肝癌细胞，观察肝癌细胞某些生物学行为的变化，结果：在ＳＢ作用下，人肝癌细胞生长抑制，细胞形态改变，ＣｏｎＡ凝集现象消失，琼脂集落形成率下降，染色体主流范围变突，二倍体及亚二倍体比例升高，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入率、细胞ＤＮＡ含量下降与对照比较有显著差异，结论：人肝癌细胞在丁酸钠作用下，某些恶性生物学行为可发生部分逆性。

我院检验系97届毕业操作考试回顾与思考

医学检验教育的目的是培养具有扎实理论知识与熟练操作技能的医学检验人才．因此．操作技能是衡量教学质量的一项重要指标。我院高度重视对学生毕业前的考核工作，分别就毕业论文、基础理论、操作技能三个方面进行考核。如此既对几年的教学效果进行了总结．又为今后的教学提出了努力方向。本文旨在对我院97届毕业操作考试情况进行分析，

鼻咽癌患者及患病风险者红细胞免疫调节因子活性与T细胞亚群的关系

目的探讨鼻咽癌患者及其患病风险者体内红细胞免疫调节功能与T细胞亚群的相互关系。方法检测了鼻咽癌患者和不同滴度IgA／VCA者的红细胞免疫调节促进因子及抑制因子活性、T细胞亚群的变化并分析其相互关系。结果鼻咽癌患者红细胞免疫促进因子的活性降低、抑制因子活性升高，T细胞亚群失衡；鼻咽癌患病风险者（高滴度IgA／VCA者）的红细胞免疫调节因子活性及T细胞亚群与鼻咽癌患者的变化相似，只是程度不同；低滴度IgA／VCA者的T细胞亚群、红细胞免疫促进因子活性未发生显著变化，但红细胞免疫抑制因子活性升高；红细胞免疫调节因子活性的改变与T细胞亚群的变化相关。结论红细胞免疫调节功能和/或T细胞免疫功能的改变及其相互作用在NPC发病机制中具有一定的作用。

华支睾吸虫3-磷酸甘油酸激酶基因的扩增、克隆及表达

目的 构建编码华支睾吸虫 3 磷酸甘油酸激酶基因的原核表达载体 ,并分析其在大肠埃希菌中的表达。 方法 用Trizol法从华支睾吸虫 3 成虫体内提取总RNA ,并将其反转录成cDNA。根据华支睾吸虫磷酸甘油酸激酶的已知基因 ,利用DNAclub和PCRdesign软件设计合成一对特异引物 ,从合成的cDNA中 ,用PCR技术扩增出目的片段。将目的片段和原核表达载体同时双酶切后连接 ,重组体转入JM10 9大肠埃希菌 ,用双酶切、PCR和测序筛选阳性克隆。挑选 1个阳性菌落 ,用异丙基 β D 硫代半乳糖苷诱导表达 ,表达产物进行十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)鉴定。 结果 用逆转录 聚合酶链反应技术扩增出 1条 12 48bp大小的片段 ,PCR产物测序鉴定正确 ;转化后得到 10个克隆 ,双酶切、PCR扩增鉴定 ,其中 6个为阳性克隆 ;表达产物用SDS PAGE鉴定 ,在相对分子质量 70 0 0 0处有 1条与理论预测的融合蛋白大小相一致的特异条带。 结论 成功构建重组原核表达载体pGEX 4T 1 PGK 。

华支睾吸虫cDNA表达文库的构建及初步筛选

目的 构建华支睾吸虫cDNA表达文库 ,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础。 方法 提取华支睾吸虫总RNA ;用Clontech公司SMARTTMcDNA文库构建试剂盒操作方法 ,进行反转录合成双链cDNA ;PCR产物纯化后 ,进行SfiI酶切 ;用ChromaSpin 40 0柱将酶切产物进行分级分离 ,回收 0 .4～ 4kb的组分 ,并与λTriplEx2载体连接、体外蛋白包装 ,产生未扩增文库 ;检测未扩增文库滴度和重组效率后 ,进行文库的扩增 ,并测定扩增文库的滴度及鉴定。 结果 未扩增文库滴度达 7.5× 10 7pfu/ml ,扩增文库滴度达 2 .7× 10 8pfu/ml ;用载体两端的引物进行PCR鉴定 ,显示 :所选噬菌体中均含有重组的cDNA ,大小在 5 0 0bp以上。 结论 已成功地获得一高质量的华支睾吸虫cD