血栓、止血试验在肿瘤疾病中的应用

目的:探讨止血凝血试验用于恶性肿瘤疾病的临床意义.方法:应用法国STA COMPACT止血凝血分析仪检测330例恶性肿瘤和14例良性肿瘤患者血浆4项指标(凝血酶原时间PT、活化部分凝血酶原时间APTT、纤维蛋白原Fib、凝血酶时间TT).结果:与正常人对照组比较,PT、APTT、Fib三项指标有明显差异的肿瘤是鼻咽癌、卵巢癌、肠癌、肺癌、肝癌、食管癌,二项指标有差异的是恶性淋巴瘤、乳腺癌、胃癌、宫颈癌、宫肌瘤、头颈部恶性肿瘤,而四项指标完全没有差异的是子宫体癌.值得注意的是凝血酶时间TT在330例恶性肿瘤、14例良性肿瘤中都与正常对照组没有差异.结论:PT、APTT、Fib可作为恶性肿瘤凝血像的检测指标.

肿瘤患者的HIV抗体检测结果分析

目的 探讨肿瘤患者的HIV感染情况。方法 应用ELISA法、PA法和EY法检测肿瘤患者血清HIV抗体。结果 共检测肿瘤病人29031例,查出6例HIV-1抗体阳性患者(门诊3例,住院3例),阳性率0．21‰。结论 对免疫功能低下的肿瘤患者常规检测HIV抗体是防止艾滋病的医源性传播、保障病人和医务人员的切身利益的有效方法。

流式细胞仪检测肝癌患者外周血淋巴细胞CD25

流式细胞术（flow cytometry,FCM)自70年代中期至今仍是研究细胞生物学等物质的重要技术，已被广泛应用于肿瘤学、免疫学、血液学、药物学等领域。它具有灵敏度高、准确性好、特异性强、重复性好的优点。本文总结了应用流式细胞仪检测353例肝癌患者外周血淋巴细胞CD4^+CD25^+、CD8^+CD25^+含量的结果，显示肝癌患者外周血淋巴细胞CD25^+CD4^+、CD25CD^8+的百分比低于正常参考值（P＜0．05），有显著性差异。

EDTA浓度对流式细胞仪检测Ki67含量的影响

乙二胺四乙酸(EDTA)可与血中钙离子结合成鳌合物,从而阻止血液凝固,我们在应用流式细胞仪检测实体肿瘤DNA和核增殖抗原Ki67时,在PBS加入适量的EDTA,可使单个细胞不易重新聚集,从而减少样品过滤过程中细胞的丢失,还可防止样品堵塞仪器.但EDTA的浓度过高是会直接使Ki67结果升高的,现检测报告如下.

流式细胞术检测卵巢恶性肿瘤DNA倍体、细胞周期及Ki67表达

目的：研究卵巢恶性肿瘤：DNA倍体、细胞周期及Ki67含量的表达，探讨其与病理类型，临床分期的关系。方法:采用流式细胞术(Flow cytometry FCM)对54例经病理细胞学确诊的卵巢恶性肿瘤手术新鲜标本进行DNA倍体、细胞周期(S期)、增殖核抗原(Ki67)的检测。结果：DNA异倍体总阳性率为55．6％，临床分I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的DNA异倍体阳性率分别是57．1％、80．0％、52．5％、50．0％。异倍体阳性率最高是浆液性腺癌(70．0％)，其次是粘液性腺癌(50．0％)，不能分类的腺癌(43．8％)。细胞周期(S期)二倍体组少于5％，明显低于异倍体组，有显著差异(P<0．05)。卵巢恶性肿瘤Ki67含量与正常人比较有显著差异。结论：卵巢恶性肿瘤DNA倍体的阳性率、细胞周期、Ki67表达三个指标在各临床分期组，三大病理类型组之间比较接近，只有异倍体阳性组的细胞周期明显高于二倍体组的细胞周期(P<0．05)。提示异倍体阳性的肿瘤细胞增殖比二倍体肿瘤活跃，但对预后的评价还需一段时间的随访观察。

流式细胞仪的保养和常见故障的排除

提出流式细胞仪应用过程中的日常保养和常见故障的排除方法，探讨仪器质量控制的措施。

T淋巴细胞核仁形成区嗜银蛋白(Ag-NORs)检测对恶性肿瘤临床意义的探讨

目的 探讨T淋巴细胞核仁形成区嗜银蛋白 (Ag NORs)在恶性肿瘤诊断及疗效观察中的临床价值。方法 制作银染T淋巴细胞涂片 ,显微镜下选取转化良好的T淋巴细胞 ,利用KL型肿瘤免疫图像分析系统检测其Ag NORs含量 (Ag NORs面积与细胞核面积的比值 ,即I /S % )。结果 检测 6 6例正常人、117例恶性肿瘤患者和 2 5例良性肿瘤患者 ,发现 :(1)正常人的T淋巴细胞Ag NORs含量与良性肿瘤患者和恶性肿瘤患者均有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,其均值分别为 :7.0 9± 0 .79、6 .31± 0 .75、5 .4 4± 1.13。 (2 )正常人和良性肿瘤患者的T淋巴细胞AgNORs含量与鼻咽癌、食管癌、乳腺癌、肝癌患者之间有显著性差异(P <0 .0 5 )。鼻咽癌、食管癌、乳腺癌、肝癌患者T淋巴细胞AgNORs检测的阳性率分别为 6 2 .86 %、71.4 3%、6 6 .6 7%、70 %。 (3)观察 6 7例鼻咽癌患者放疗过程的不同阶段 ,发现放疗中和放疗结束患者的T淋巴细胞Ag NORs均值分别为 4 .38± 1.16和 4 .16± 1.2 7,较放疗前 (均值 5 .5 5± 1.2 0 )低 ,但放疗一年后有所上升 (均值 5 .75± 0 .4 8)。 (4)观察 2 8例食管癌患者的不同治疗阶段 (术前、术后七天和术后一月 ) ,发现其T淋巴细胞AgNORs值没有显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,分别为 :5 .2 3± 1.16、5 .11±

胸腔镜手术与小切口开胸肺切除术后细胞因子反应的随机对照研究

背景与目的:细胞因子在诱导急性期炎症反应及免疫反应中起重要作用,能否通过微创入路手术减少细胞因子的释放,减轻术后急性期反应和免疫抑制是肿瘤外科治疗关心的问题。本研究希望通过前瞻性随机对照研究,比较电视辅助胸腔镜手术(video-assisted thoracoscopic surgery,VATS)与小切口开胸(minimal incision thoracotomy,MIT)肺切除术治疗临床早期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),对比两种术式术后的细胞因子水平。方法:从2004年3月～2006年12月有47例CT提示为临床早期NSCLC、肿物直径≤6cm、符合入组条件的患者被随机分为VATS组(24例)和MIT组(23例),VATS组有2例患者因术中不能控制的出血和胸膜广泛粘连转为开胸手术而被剔除,MIT组1例因术中输血被剔除。使用流式微球分析技术(cytometric bead array,CBA)测定两组患者术前、术后4、24、48h血浆中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白介素-2(interleukin-2,IL-2)、IL-4、IL-6和IL-10的浓度。结果:术后两组患者TNF-α、IL-2和IL-4的血浆浓度均较低,差异无统计学意义。术后4h两组患者IL-6和IL-10均达峰值浓度。其中IL-6峰值浓度VATS组(91.0±63.9)ng/L,MIT组(84.2±53.1)ng/L,IL-10峰值浓度VATS组(12.6±8.1)ng/L,MIT组(16.3±11.2)ng/L,两组间差异无统计学意义(P=0.732和P=0.235)。重复测量数据的方差分析显示两组间4个时间点IL-6和IL-10的浓度差异均无统计学意义(F=0.143,P=0.708和F=0.000,P=0.996)。结论:胸腔镜手术和小切口开胸肺切除术后患者细胞因子反应无差异,其临床意义有待进一步研究。

叠氮甲基蒽醌衍生物诱导KB细胞及其耐药株细胞的凋亡

目的 研究大黄素的蒽醌衍生物 6 叠氮甲基 1 羟基 3, 8 二甲氧基 9, 10 蒽醌 (AMAD 10)抑制KB细胞及其耐药株KBv200的生长和诱导细胞凋亡的作用。方法 细胞毒用MTT法测定;细胞内活性氧(ROS)和线粒体跨膜电位(ΔΨm)分别用DCFH DA和DiOC6荧光探针标记,流式细胞仪检测;AnnexinV染色和DNA琼脂糖凝胶电泳检测AMAD诱导凋亡作用。结果 AMAD浓度依赖性抑制KB和KBv200细胞的生长和引起活性氧明显增加,并能引起两种细胞ΔΨm时间依赖性的降低,AMAD可浓度依赖性地诱导两种细胞凋亡。结论 AMAD体外显著抑制KB及其耐药株KBv200的生长,这可能与其引起细胞内ROS增加、使ΔΨm降低,从而诱导细胞凋亡有关。

喉咽鳞癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞活性分析

背景与目的:T淋巴细胞亚群及NK细胞是主要的细胞免疫形式,通过对两者的研究可以了解细胞免疫在肿瘤发生、发展的作用。喉咽鳞癌患者可能存在一定程度的细胞免疫缺陷,本研究是通过检测外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性,了解喉咽鳞癌患者的细胞免疫功能。方法:用流式细胞仪对78例喉咽鳞癌患者的外周血进行T淋巴细胞亚群及NK细胞活性的检测,并取20例非肿瘤患者的外周血作为对照组。结果:喉咽鳞癌患者组较非肿瘤患者组CD4淋巴亚群、CD4/CD8比值下降,CD8淋巴亚群升高;NK细胞活性下降。T3～4组较T1～2组、N+组较N0组都有CD4淋巴亚群、CD4/CD8比值下降;NK细胞活性下降。中低分化组CD4淋巴亚群、CD4/CD8比值下降(均P<0.05)。结论:喉咽鳞癌患者CD4T淋巴细胞亚群及NK细胞活性受到抑制,细胞免疫功能降低;检查外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性有助于喉咽鳞癌患者的细胞免疫功能监测。

112例淋巴系统恶性肿瘤骨髓免疫表型分析

背景与目的:淋巴细胞白血病和淋巴瘤骨髓侵犯的诊断以细胞形态学为基础,而免疫分型可通过获得肿瘤细胞分化和发育阶段的信息使淋巴系统恶性肿瘤的诊断更为准确,为临床合理治疗和预后判断提供重要的科学依据。本研究应用多参数流式细胞术(flow cytometry,FCM)探讨淋巴细胞白血病和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)骨髓侵犯的免疫表型特点。方法:收集112例病理确诊NHL并伴骨髓侵犯和淋巴细胞白血病患者的骨髓标本。应用FCM检测肿瘤细胞的免疫表型。结果:45例前驱B淋巴母细胞白血病/淋巴瘤(precursor B lymphoblastic lymphoma/leukemia,B-ALL/LBL)主要表达CD19、CD10、TdT、CD34、HLA-DR和CD20;32例前驱T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤(precursor T lymphoblastic lymphoma/leukemia,T-ALL/LBL)主要表达胞内CD3(cytoplasmicCD3,CyCD3)、CD7、CD5、TdT、膜表面CD3(surfaceCD3,sCD3)和HLA-DR。77例前驱淋巴细胞肿瘤中,28例(36%)有髓系抗原CD13、CD33的表达;9例(20%)B-ALL/LBL病例有CD20与CD34共同表达,28例(87.5%)T-ALL/LBL病例有CyCD3与TdT共同表达。成熟淋巴细胞肿瘤35例,其中17例慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤主要表达CD19、CD20、CD5和HLA-DR,并有CD19与CD5共同表达。4例弥漫大B细胞性淋巴瘤主要表达CD19、CD20、CD10和HLA-DR。3例伯基特淋巴瘤主要表达CD19、CD10、CD20、SIgM。1例套细胞淋巴瘤表达CD5、CD19、CD20、HLA-DR。5例外周T细胞淋巴瘤(PTCL)主要表达sCD3、CD5、CD7、CD4或CD8。1例间变性大细胞淋巴瘤主要表达sCD3、HLA-DR。4例NK/T细胞肿瘤表达CD56、HLA-DR,也表达CD7或CD4或CD8。成熟淋巴细胞肿瘤不表达早期抗原如CD34、TdT。成熟淋巴细胞肿瘤可伴有髓系抗原CD13、CD33的表达。结论:淋巴系统恶性肿瘤侵犯骨髓采用形态学结合FCM免疫学分型可获得T、B细胞来源、肿瘤细胞分化阶段和异常抗原表达等参数,有助于临床诊断和微小残留病灶的检测。

Nm23-H1/NDPK-A基因在大肠杆菌中的高效表达及产物纯化的研究

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增人二磷酸核苷激酶Ａ亚基（ＮＤＰＫ－Ａ）基因，即ｎｍ２３－Ｈ１／ＮＤＰＫ－Ｋ基因的编码序列，经序列分析后，定向克隆于表达质粒载体ｐＢＶ２２０，在大肠杆菌ＤＨ５α中高效表达出重组人ＮＤＰＫ－Ａ．表达产物为可溶性的非融合蛋白，占菌体总蛋白４２％．斑点ＥＬＩＳＡ法鉴定表明表达产物与ＮＤＰＫ－Ａ标准抗血清呈阳性反应．以ＤＥＡＥ纤维素弱阴离子交换层析、ＣｉｂａｃｒｏｎＢｌｕｅ染料亲和层析结合高效液相排阻色谱技术纯化ｒＮＤＰＫ－Ａ，得纯度为９６．７％的目标蛋白．以反相高效液相色谱法进行酶活性分析，表明纯化的ｒＮＤＰＫ－Ａ能催化ＡＴＰ＋ＵＤＰ＝ＡＤＰ＋ＵＴＰ的反应，比活性为８００Ｕ／ｍｇ蛋白．

KBv200裸鼠移植瘤模型的建立及其耐药特性的探讨

目的 建立一种人多药抗药性 (MDR)细胞株的裸鼠移植瘤模型并探讨其MDR特性 ,为筛选MDR逆转剂进行体内逆转MDR的研究提供模型。方法 按SPF级动物常规饲养裸鼠 ,鼠腋窝皮下接种 1× 10 7个细胞 ,观察成瘤率及生长特性 ,并比较裸鼠体内细胞与原代细胞耐药特性。细胞毒测定采用MTT法。P糖蛋白 (Pgp)的测定采用流式细胞仪法。结果 KBv2 0 0裸鼠移植瘤的成瘤率为 10 0 % ;在本研究的饲养条件下 ,19d瘤重可达 1 0～ 2 5 g ,平均 (2 1±0 4) g。原代及裸鼠体内KBv2 0 0对长春新碱 (VCR)的IC50分别为 1 479和 1 472 μmol·L-1,两者比较差异无显著性(P >0 0 5 )。原代及裸鼠体内KBv2 0 0的Pgp的表达率分别为 92 1%、91 9% ,二者差异无显著性 ;二者荧光强度亦未见明显改变 ,即Pgp表达量未见改变。 结论 以KBv2 0 0细胞所建立的裸鼠移植瘤模型 ,成瘤率高 ,在实验期间 15～ 2 0d内仍保持其MDR的特性 ,可提供做为MDR研究的体内模型。

番荔枝内酯单体89-2实验治疗KBv200及KB细胞移植瘤的作用(英文)

目的 番荔枝内酯单体 89 2是自阿蒂莫耶番荔枝植物分离获得。本研究旨在探讨 89 2对MDR肿瘤的实验治疗作用。方法 以MTT法测定细胞毒 ;KBv2 0 0及KB细胞裸鼠移植瘤模型研究 89 2对MDR肿瘤的实验治疗作用 ;以Fura 2 AM法测定P 糖蛋白 (P gp)功能。结果 89 2对KBv2 0 0及KB细胞的IC50 分别为 4 8 7和 6 4 6nmol·L- 1(P >0 0 5 )。 89 2对KB及KBv2 0 0细胞裸鼠移植瘤具有相似的剂量依赖性抑制作用 ,而毒性可以耐受。 89 2剂量依赖性地增加KBv2 0 0细胞的Fura 2积累。结论 89 2体内外均抑制KB和KBv2 0 0细胞生长 。

癌症患者痰培养常见菌谱及其耐药性分析

背景与目的:有些癌症患者并非死于癌症本身,而是死于手术、化疗、放疗、介入治疗后合并感染。本研究主要探讨癌症患者痰培养所得病原菌的分布及其耐药状况。方法:回顾性分析955例癌症患者医院感染痰培养感染病原菌的临床资料,采用WHONET-5软件对相关资料进行统计学处理。结果:感染菌检出率:真菌为43.4%,以白色假丝酵母菌为主;革兰氏阳性(G+)球菌为31.2%,以凝固酶阴性葡萄球菌为主;革兰氏阴性(G-)杆菌为25.4%,以铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌为主。药敏试验结果提示:真菌对两性霉素B敏感,对唑类抗菌药物呈耐药性。G+球菌对万古霉素高度敏感,对苯唑西林、青霉素、红霉素等耐药率很高。G-杆菌对亚胺培南高度敏感,对一代、二代头孢菌素、氨苄西林、哌拉西林等有较高的耐药性。结论:癌症患者院内感染痰培养显示,常见菌谱为真菌、G+球菌和G-杆菌,临床用药应依据药敏试验结果合理使用抗生素。

多参数流式细胞术在淋巴细胞白血病和非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯诊断的应用

背景与目的:骨髓形态学检查可诊断淋巴细胞白血病,结合淋巴结活检可诊断非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)侵犯骨髓,但形态学仅是初步的诊断,采用免疫分型而获得肿瘤细胞来源及发育阶段的资料是目前诊治淋巴系统恶性肿瘤所必需的。本研究探讨多参数流式细胞术(flow cytometry,FCM)在淋巴细胞白血病、NHL骨髓侵犯的诊断和免疫分型方面的应用价值。方法:取初治白血病患者骨髓标本11例和NHL患者骨髓侵犯的骨髓标本41例,以及2例分别表现为巨大纵隔肿块和腹部巨大肿块的患者因无法取得病理标本而取骨髓检测的骨髓标本2例。采用B细胞系列抗体、T细胞系列抗体、粒细胞系列抗体,按常规行FCM免 疫表型检测,CD45结合两个系列单抗或阶段特异性单抗进行三色免疫荧光染色,CD45/SSC设门后可将骨髓细胞清晰地分出成熟细胞和幼稚细胞群,然后行FSC、SSC、McAb1-FITC、McAb2-PE、CD45-Cychrome五参数分析。结果:11例白血病患者骨髓形态学经FCM的免疫分型获得进一步确诊和分型。41例NHL骨髓侵犯标本免疫表型与其淋巴结病理免疫组化相符合的为80.5％(33/41),不相符的有19.5％(8/41),结合临床、病理、骨髓形态学诊断和骨髓FCM的结果,最终获得明确诊断。2例分别为巨大纵隔肿块和腹块的患者仅靠骨髓形态学和骨髓FCM?

239株革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

检测超广谱β-内酰胺酶(extendedspectrumβ-lactamases,ESBLs)在革兰阴性杆菌中的表达及耐药特点,为临床积累经验。方法:应用双纸片协同试验和确证试验对239株革兰阴性杆菌进行ESBLs检测,同时分析药敏结果。结果:239株革兰阴性杆菌中ESBLs的检出率为20.5%(49/239),其中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、其他菌种的检出率分别为23.3%(21/90)、33.3%(8/24)、16.0%(20/125)。产ESBLs的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌菌株对青霉素类、第三代头孢菌素、β-内酰胺酶抑制药、β-内酰胺类、氨基糖苷类的耐药率分别为100%,57%～95%、19%～71%、0～90%、38%～90%,其中耐药率最低的为β-内酰胺类的亚胺培南-西司他丁(0)、β-内酰胺酶抑制药的哌拉西林-三唑巴坦(19%)和氨基糖苷类的阿米卡星(38%)。结论:不仅大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌可产ESBLs,其他革兰阴性杆菌也可产ESBLs;对产ESBLs的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌感染的治疗可首选亚胺培南-西司他丁。

恶性肿瘤患者真菌感染的检测及耐药性分析──附233株检测报告

目的：了解恶性肿瘤患者医院真菌感染情况及其耐药性：方法：用法国产CANDIFAST鉴定、药物敏感试验（二合一）诊断板对来自12种恶性肿瘤患者的1669份送检标本进行病原菌检测，并对其结果进行分析：结果：1669份标本共检出病原菌768株，其中假丝酵母菌（念珠菌）233株，白色假丝酵母菌占66％：尿液、胸腔积液或腹水、痰、脓性分泌物、咽拭子、粪便、血液、静脉插管尖端、阴道拭子等9种标本的假丝酵母菌检出构成比分别为40％、37％、36％、28％、26％、21％、10％、2／4、1／8。ICU、化学治疗病区、手术科和放射治疗科送检标本的假丝酵母菌检出构成比分别为40％、31％、21％、20％，以ICU的检出构成比最高：超过59岁组的假丝酵母菌检出构成比（35％）高于31-59岁组及31岁以下组（27％、21％），P=0．012-0．002：12种肿瘤病人间的假丝酵母菌检出率比较差异不大：药物敏感试验显示假丝酵母菌对两性霉素B、制霉菌素、氟胞嘧啶的耐药率最低（0～5％），对益康唑的耐药率较高（19％～68％），其中克柔假丝酵母菌对氟康唑的耐药率为9／9：结论：恶性肿瘤患者的真菌感染以白色假丝酵母菌为主：高龄、病情重、接受化学治疗等易导致肿瘤患者发生真菌感染：鉴于不同种类的假丝酵母菌对抗真菌药物的耐药性不同，、临床上更应重视对真菌的鉴定和体外的药物敏感试验。

妇科肿瘤患者常见感染的病原体及药敏分析

[目的]了解妇科肿瘤住院患者感染的菌群分布及耐药特点。[方法]分析1997年～2001年妇科肿瘤住院患者送检标本中细菌种类和耐药情况。[结果]131例病例中 ,93例有2～4种易感因素。共获得209个菌株 ,其中G+菌、G-菌各16种 ,真菌10种。常见的菌有表面葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希氏菌和热带念珠球菌。无论阳性球菌还是阴性杆菌 ,都有较高的耐药率 (50 %～100% )。[结论]妇科肿瘤患者有许多易感因素 ,菌种多 ,耐药严重 ,应合理应用抗菌素 ,以免造成严重后果。