根癌农杆菌介导致病疫霉转化体系的建立

为建立低成本、快速、高效的根癌农杆菌介导的致病疫霉转化体系，以菌株 HK0919为材料，从抗生素筛选浓度、共培养转膜方式、乙酰丁香酮（AS）浓度、共培养时间和共培养温度等方面对致病疫霉的转化体系进行了研究。综合各因素优化结果，建立的转化体系条件为：以1．0μg/mL的潮霉素B进行转化子筛选，采用玻璃纸作为共培养介质，AS浓度为200μmol/L，培养6 d，温度为22℃。在此条件下的转化效率为每106个游动孢子获得50～60个转化子。随机选取10个转化子，利用特异性引物对潮霉素抗性基因hph进行PCR扩增，转化子均能扩增出800 bp左右的预期条带；同时，利用根癌农杆菌vir基因特异引物对转化子进行 PCR扩增，排除了转化子被农杆菌污染所致的假阳性；转化子继代培养5代后，仍能在含潮霉素 B的黑麦培养基上生长。说明外源T DNA已成功整合到致病疫霉基因组中，并能稳定遗传。

2012年河北省围场县马铃薯晚疫病菌表型及基因型分析

对2012年采自河北省围场县永和栈、银窝沟、克勒沟、小苇子沟、扣花营5个地点的60株晚疫病菌测定了其交配型、甲霜灵抗性、mt DNA单倍型、SSR基因型,结果表明,60株晚疫病菌全部为A1交配型,甲霜灵高抗菌株58株,占96.67%;敏感菌株2株,占3.33%。采用以PCR方法为基础的mt DNA单倍型检测新方法共鉴定出ⅠR3、ⅡR3、ⅡR23种mt DNA单倍型。其中,ⅠR3单倍型为该群体的优势单倍型,占80.0%;ⅡR3、ⅡR2分别占18.3%、1.7%。同时,还利用具有多态性的8对引物测定了该群体的SSR基因型,共检测到18个等位基因、5种基因型。SSR聚类结果表明,SSR基因型与菌株对甲霜灵抗性有一定相关性,而与交配型和地理来源无相关性。围场县晚疫病菌群体结构比较单一,遗传多样性程度较低。

北方一作区马铃薯早疫病病菌群体SSR遗传结构分析

为明确北方一作区马铃薯早疫病病菌不同地理群体的遗传结构,利用5对简单重复序列(simple sequence repeat,简称SSR)引物对河北、黑龙江、辽宁、内蒙古和宁夏5个省(自治区)的74株马铃薯早疫病病菌进行遗传多样性分析。共检测出26个等位基因,45个基因型,每对引物的等位基因数为3～7个,平均为5. 2个。分析结果显示,5省(自治区)的早疫病病菌菌株群体之间相似度都很高,处于0. 900 6～0. 988 9之间。相较而言,河北群体和辽宁群体的亲缘关系较近,内蒙古群体和黑龙江群体的亲缘关系较近,宁夏群体单独为1个分支,表明SSR基因型与菌株的地理来源有相关性。研究还发现,在被测的45个基因型中,仅出现1次的基因型有37个,占82. 2%,说明群体遗传多样性高,推测是准性生殖和人类介导的基因流动共同作用的结果。