噬菌体显示法克隆RNA结合蛋白cDNA——表达文库的构建

试图用噬菌体显示法 (phagedisplay)克隆编码与人白细胞介素 6核转录因子的 3′非翻译区(NF IL63′UTR)特异结合的蛋白的cDNA .构建了回复系RR细胞的cDNA的噬粒 ( phagemid)表达文库 ,并设法除去了cDNA的大部分终止密码子 .鉴定表明 ,该文库中含有各种大小的cDNA插入片段 ,并能够表达外源cDNA 。

胰蛋白酶的高压灭菌

胰蛋白酶在酸性条件下经过高压灭菌， 仍有活力． 在细胞培养中， 以这种方法对胰蛋白酶消毒比常规的过滤除菌更加简便， 经济，

克隆颜色鉴定结合5-氟乳清酸负筛提高三杂交系统筛库效率

酵母三杂交系统是新近发展起来的一个分析RNA结合蛋白的有力工具, 然而在利用该系统筛库过程中, 常会遇到大量假阳性克隆. 将克隆颜色鉴定与5-氟乳清酸负性筛选相结合, 运用到酵母三杂交系统的筛库过程中, 极大地提高了筛库的效率和对假阳性克隆的鉴别, 并已实现了对重要的RNA结合蛋白的筛选. 这一改进将大大方便该系统在分析RNA与蛋白的相互作用中的运用.