肺癌患者GSTT1多态性分布及其与15号染色体畸变的关系

目的分析肺癌患者与对照GSTT1基因型多态性分布差异,探讨GSTT1基因型多态性对15号染色体稳定性的影响以及该染色体与肺癌发生之间的关联。方法利用PCR技术分析了61例肺癌患者和46例对照的GSTT1基因型分布,以荧光原位杂交(FISH)技术分析了不同GSTT1基因型的14例肺癌患者和18例对照淋巴细胞15号染色体结构和数目畸变。结果GSTT1+基因型(+/+和+/0)和GSTT1缺失基因型(0/0)在肺癌患者和对照之间的分布无显著性差异;肺癌组GSTT1+基因型15号染色体结构畸变率显著高于对照组GSTT1+和GSTT10/0型(P<0.05),但肺癌组0/0基因型未表现这种关系;15号染色体非整倍体发生率在各组和各基因型之间未表现显著差异。结论GSTT1基因型多态性与肺癌风险、15号染色体的稳定性无显著相关,15号染色体结构畸变是肺癌的风险因素之一。

神经致幻型毒菌活性色胺类物质定性检测试纸的研制与应用

神经致幻型毒菌含有毒素———活性色胺类物质,包括光盖伞辛(Psilocin)、光盖伞素(Psilocybin)、Baeocystin和Norbaeocystin等。利用活性色胺与对-二甲基氨基苯甲醛发生专一性颜色反应的原理,研制了毒素定性检测试纸,并应用薄层层析(TLC)验证了试纸的检测效果。以金针菇为对照,对9种可疑野生毒菌进行了检测。结果2种发生紫色反应,4种发生红棕色反应,对照和另外3种样品没有发生颜色反应。TLC验证结果表明,发生颜色反应的样品都显示出斑点,其中发生紫色反应的样品含有光盖伞辛;而没有发生颜色反应的样品则没有显示斑点。研制的试纸可以用于神经致幻型毒菌所含毒素的初步定性检测,不发生颜色反应的样品确定不是毒菌,发生紫色颜色反应的样品是毒菌的可能性较大。

携带BRCA1突变的乳腺癌患者B-淋巴细胞株对辐射敏感性的初步研究

目的探索BRCA1+/-乳腺癌患者B淋巴细胞株对辐射诱变的敏感性,以期为建立肿瘤启动与进展机制研究的离体试验系统做一些初步的探索并提供信息。方法以60Co处理BRCA1+/-乳腺癌患者淋巴细胞株和正常人淋巴细胞株,在含细胞松弛素B的RPMI1640培养液中培养28小时,利用细胞质阻断微核分析(CBMN),评价二个细胞株对γ射线的敏感性。结果二个细胞株经辐射处理后,主要的基因组不稳定性指标即双核细胞微核率(MNedBNC)和核质桥率(NPB)均显著升高(P<0.01～0.05);比较二个细胞株的上述指标,没有发现二者间自发与辐射诱发遗传损伤程度的差异。结论受试BRCA1+/-淋巴细胞株对辐射诱变的敏感性没有显著改变,在本试验系统下,其基因组稳定性与对照细胞株无明显差异。

盘龙江全程及滇池水样对植物染色体损伤的比较

目的与方法 :本研究以蚕豆根尖微核作为染色体损伤的指标 ,检测和比较昆明盘龙江不同区段水与滇池水的遗传毒性及差异。 结果 :试验发现除昆明主要水源松花坝水库外 ,盘龙江不同区段水样诱发的微核率均与对照有极显著差异(P<0.001～0.01) ;诱发微核率最高的水样是附近具有大量工业污染排放的金太滩排灌站 ,沿河堤植物生长茂盛的地方污染有所减弱。 结论 :研究提示盘龙江水尤其中下游和滇池水体均存在对生物遗传物质有损伤作用的污染物 ,构成了对人居环境和人类健康的威胁 ,其不符合我国地面水环境质量标准(GHZB1-1999,GB3838-2002)对地面水的基本要求。显然 ,盘龙江水及滇池水存在令人担忧的隐患 ,进一步有效地治理 ,尤其加强对沿岸排污行为的管理 ,对于改善昆明人居环境和提高人民生活质量具有重要的意义。

云南重楼内生细菌的分离鉴定及系统发育树分析

利用云南文山采集的人工栽培和野生云南重楼Paris polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch)根茎,对其内生细菌进行了分离、纯化及鉴定。分离得到40和44株云南重楼内生细菌。经16S rDNA测序,在NCBI中比对,MEGA4建系统进化树,所得内生细菌分别鉴定为分属于6和8个属。其中,人工栽培云南重楼内生细菌中,芽孢杆菌属(Bacillus)和肠杆菌属(Enterobacter)分离频率分别为35%、27.5%,是其优势内生细菌群;野生云南重楼内生细菌中,芽孢杆菌属(Bacillus)和克雷伯氏菌属(Klebsiella)分离频率分别为36.4%、20.4%,是其优势内生细菌群。本研究结果体现了人工栽培和野生云南重楼内生细菌分布的差异及云南重楼根中内生细菌的多样性,也为后续重楼内生菌的多样性开发提供了理论和实验基础。

改良比色法在神经致幻型毒菌活性色胺类物质检测中的应用

改良了神经致幻型毒菌活性色胺类物质的比色检测方法。利用白灵菇子实体的稀醋酸提取液替代水作为空白对照,检测结果更为客观、准确;筛选到了不使用硫酸的显色剂配方,降低了操作过程中的危险性。探讨了改良的比色法在毒菌活性色胺类物质半定量和定量检测中的应用。结果表明,该方法可以用于毒菌总活性色胺类物质的半定量检测;结合薄层层析法,还可以用于特定毒素的定量检测。

叶酸缺乏对BRCA1突变淋巴细胞株染色体损伤效应的影响

背景与目的:评价叶酸缺乏在BRCAI突变乳腺癌患者淋巴细胞株(GM13705)微核诱发效应,探询能将遗传物质损伤减少到最低程度的叶酸浓度。材料与方法:在叶酸缺乏(6-240nmol/L)条件下离体培养GM13705细胞株,利用细胞质分裂阻断微核技术(CBMN),分析双核细胞中的微核率。结果:叶酸浓度在6 nmol/L、60 nmol/L和120 nmol/L时,双核细胞微核率高于240nmol/L及常规RPMI1640组,这3个测试组间未出现双核细胞微核率的显著差异;240 nmol/L和常规,RPMI1640组之间双核细胞微核率差异无统计学意义。结论:在本试验条件下,240 nmol/L的叶酸是该细胞株防范遗传损伤的最低浓度,具有BRCAI突变的基因组对叶酸缺乏的胁迫作用敏感性似乎高于正常细胞。

普通拟杆菌调控高血压小鼠小肠上皮细胞腺苷合成的机制探究

高血压是心血管疾病的主要危险因素,其分子和细胞机制仍有待阐明。大量研究显示,肠道内生菌调节血压稳态。前期实验室通过血浆代谢谱学测序发现了普通拟杆菌(Bacteroides vulgatus)可以增加高盐饮食高血压小鼠血浆中的腺苷含量,同时可能影响小鼠高血压进程。该研究首先验证B.vulgatus对血浆腺苷含量和高盐饮食小鼠血压的影响。随后,为了夯实谱学结果、寻找血浆中腺苷的来源并解析B.vulgatus促进腺苷合成的机制,研究对B.vulgatus灌胃小鼠机体合成腺苷的重要场所之一——小肠上皮细胞进行了基因表达谱分析。结果发现,B.vulgatus灌胃小鼠的小肠上皮细胞中一系列差异表达的基因与小鼠的核苷酸、能量、蛋白质等物质的代谢过程相关。从差异表达的基因中遴选了与腺苷合成紧密相关的基因,并验证了其蛋白质表达水平。结果发现,腺苷合成过程中的关键蛋白质CD39在B.vulgatus灌胃后的小鼠小肠上皮细胞中表达显著增加。更进一步,小鼠小肠上皮细胞中CD39表达的增加与小鼠血浆中腺苷含量呈正相关性。综上,B.vulgatus在调节高盐饮食小鼠的高血压进程中,升高了血浆腺苷的含量,并伴随着小肠上皮细胞CD39的表达上调,且二者存在相关性。该研究结果为阐明内生菌调节心血管健康的机理提供了一定的理论依据。

大豆皂苷对卵巢癌细胞耐药性的影响

目的筛选逆转卵巢癌细胞耐药性效果最佳的大豆皂苷,并研究其可能的作用机制。方法用4种常见大豆皂苷分别处理耐紫杉醇卵巢癌细胞A2780/PTX,通过检测细胞IC_(50)值,比较其耐药性变化,从中筛选出逆转耐药性效果最佳的大豆皂苷。应用蛋白免疫印迹和激光共聚焦法检测大豆皂苷处理后,A2780/PTX细胞中上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志性蛋白的表达情况;Transwell和划痕实验观察细胞迁移能力的变化。结果细胞活力检测结果显示,4种常见的大豆皂苷中,Ac逆转A2780/PTX细胞耐药性的效果最明显;且经大豆皂苷Ac处理48 h后,A2780/PTX细胞中的N-cadherin表达降低,Ecadherin表达升高,细胞的迁移能力降低。结论大豆皂苷Ac能有效降低A2780/PTX细胞的EMT进程,减弱细胞的迁移能力,逆转其耐药性。

大豆皂甙对高盐饮食小鼠血压和肠道菌群的影响

目的:探究大豆皂甙通过影响肠道菌群对高盐引起的小鼠高血压的调控,并筛选起到稳定血压作用的目标肠道菌群,为新的功能食品和益生菌的开发提供科学依据。方法:15只健康成年雄性小鼠被随机分成3组:(1)喂食含0. 5%NaCl的饲料(正常饮食,NSD组);(2)喂食含8%NaCl的饲料(高盐饮食,HSD组);(3)喂食含8%NaCl的饲料,高盐饮食9w后,饮食中添加大豆皂甙Bb,持续3w (高盐饮食+大豆皂甙,HSD_SI组)。实验结束前,分别收集3组小鼠新鲜粪便,提取粪便总DNA,并对16s rDNA的V3-V4区进行高通量测序,微生物多样性分析和差异OTU比对。结果:大豆皂甙可以显著降低由高盐饮食诱导的小鼠血压升高。同时减少部分在高盐饮食过程中显著增加的OTU的丰度,这部分OTU中可能包含使机体血压升高的有害菌;另外使部分在高盐饮食过程中减少的OTU的丰度得到恢复和增加,这部分OTU中可能存在潜在的可以降低机体血压的益生菌。推论:大豆皂甙可能通过影响肠道菌群而调控血压。

镉诱导小鼠十二指肠上皮细胞损伤及机制

目的探讨在体和离体镉(Cd)暴露对小鼠十二指肠上皮细胞的损伤作用及其机制。方法①在体实验:C57BL/6小鼠连续30 d每天1次ig给予二氯化镉(CdCl2)10 mg·kg-1构建慢性Cd中毒模型;单次ig给予CdCl280 mg·kg-1构建急性Cd中毒模型,观察小鼠生存状况和生存率。分离培养急性和慢性Cd中毒小鼠的十二指肠上皮细胞,经E-钙黏蛋白免疫荧光鉴定为上皮细胞后,利用激光共聚焦显微镜检测细胞内Cd离子含量。②离体实验:分离培养正常C57BL/6小鼠的十二指肠上皮细胞,与CdCl22.5~100μmol·L-1共孵育24 h,CellTiter-Blue法检测细胞活力;与CdCl215μmol·L-1共孵育24 h,流式细胞术检测细胞周期;与CdCl230μmol·L-1共孵育3~12 h,Western印迹法检测细胞内活化的胱天蛋白酶3表达水平。结果①在体实验:与正常对照组相比,慢性Cd中毒小鼠活动状况正常,急性Cd中毒小鼠出现萎靡不振,进食减少和死亡现象,在急性Cd暴露第5天时,小鼠生存率降低至40%;急、慢性Cd中毒小鼠十二指肠上皮细胞Cd离子含量均显著增加(P<0.01)。②离体实验:CdCl2对体外培养的十二指肠上皮细胞活力具有抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)为(24.55±0.84)μmol·L-1。与细胞对照组相比,CdCl215μmol·L-1使十二指肠上皮细胞细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.05),且CdCl230μmol·L-1处理6,9和12 h后,十二指肠上皮细胞中活化的胱天蛋白酶3表达水平显著上升(P<0.05,P<0.01)。结论经消化道进入体内的Cd会被十二指肠上皮细胞吸收并对其造成损伤,其机制可能与细胞周期阻滞和胱天蛋白酶3介导的细胞凋亡有关。

五没食子酰葡萄糖靶向补体分子C1qa修复糖尿病小鼠主动脉内皮损伤的机制研究

糖尿病常伴随血管内皮损伤,显著加速血管病理进程,但其分子机制尚未阐明。已有报道证实,特殊的补体分子在血管损伤中扮演重要角色。该实验室既往研究发现,补体分子C1qa(Component 1,q Subcomponent,A chain)在糖尿病小鼠主动脉内皮层高表达,并且表达量随着心血管疾病的发展而增多。因此,该研究利用链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导糖尿病小鼠模型,并研究了C1qa分子的食源性抑制剂,即五没食子酰葡萄糖(1,2,3,4,6-O-pentagalloylglucose,PGG)对糖尿病血管内皮的修复作用。结果表明,外源C1qa刺激会显著增加血管内皮的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,同时降低主动脉内皮依赖性舒张功能。相似地,糖尿病模型中,血管内皮C1qa的高含量伴随着ROS的过量合成,主动脉血管段的内皮依赖性舒张显著降低。而PGG灌胃3周后,糖尿病小鼠血糖下降至15.36 mmol/L,主动脉内皮C1qa表达量显著降低,ROS生成量减少了52.41%,血管内皮舒张率由47.06%升到68.41%。同时,NADPH氧化酶(NOX_(2)/NOX_(4))通路表达下调,提示ROS生成的关键通路被抑制,血管内皮氧化应激损伤显著减轻。因此,活性分子PGG靶向抑制C1qa,有利于修复糖尿病小鼠主动脉内皮损伤。