用D101大孔吸附树脂富集仙茅中苯甲酸酯类酚苷的工艺研究

目的:研究用D101大孔吸附树脂富集仙茅中苯甲酸酯类酚苷的纯化工艺。方法:以仙茅苷乙和仙茅苷的吸附量和解吸附率为指标,考察了D101大孔吸附树脂对仙茅中苯甲酸酯类酚苷的静态和动态吸附及解吸附性能。结果:D101大孔吸附树脂富集仙茅中苯甲酸酯类酚苷的最佳工艺条件如下:吸附时间为8h,药液pH值为6,洗脱溶剂pH值为8,上样吸附和洗脱均在室温下进行,药液中苯甲酸酯类酚苷浓度为0.22mg/ml为最佳上样浓度,吸附流速为2.5Bv/h,洗脱溶剂为30%乙醇,洗脱剂用量为12Bv,二次纯化样品中苯甲酸酯类酚苷浓度为0.17mg/ml。结论:本纯化工艺简单、稳定,能将仙茅中仙茅苷和仙茅苷乙的总含量从0.022%的平均含量提高到1.60%,经二次纯化含量能达到5.08%。

天然药物中植物雌激素样化学成分的研究进展

植物雌激素是一类存在于植物中,能与机体的雌激素受体结合,产生雌激素样作用的非甾体类化合物。根据化学结构,可将植物雌激素分为异黄酮类、香豆素类、木脂素类及其他结构类型的化合物。植物雌激素为选择性雌激素受体调节剂,对乳腺癌,前列腺癌,心血管疾病,更年期综合征和骨质疏松症等具有确切的治疗作用,但对子宫和乳腺等雌激素受体阳性的其他组织器官不会产生刺激增生等副作用。长期暴露或过量使用植物雌激素对雄性生殖系统和胎儿的造血功能有一定的影响。植物雌激素生物活性的评价标准、不良反应、作用机制等需要进一步探讨。该文综述了植物雌激素的植物来源、化学结构、药理作用和安全性等最新研究进展,以为其深入研究和合理利用提供依据。

中药方剂防治骨质疏松症的研究概况

中药方剂具有疗效好、副作用小、作用全面、适合长期服用等优势,已广泛应用于骨质疏松的防治。经典方来源于古代医书记载,疗效确切,临床上通过辨证施治,可随证对处方进行加减化裁;经验方来源于医师多年临床经验,处方组成相对固定,各自具有自身的特点,适用于特定证候类型的骨质疏松症;中成药的处方、剂型固定,服用方便,可单独使用,或与化学药物配伍使用。中药方剂防治骨质疏松症具有独特的优势,但尚有许多不足,应从整体、器官、组织、细胞和分子水平上系统研究其作用机制和特点。

仙茅苯甲酸酯类酚苷对维甲酸致大鼠骨质疏松症的影响

目的探讨仙茅苯甲酸酯类酚苷对维甲酸致大鼠骨质疏松症的作用。方法 3月龄SD雌性大鼠灌胃给予70 mg·kg-1·d-1的维甲酸造模2周,造模结束后给予雌二醇(E2,1 mg·kg-1)、淫羊藿总黄酮(TF,100 mg·kg-1)、仙茅苯甲酸酯类总酚苷(COP,6,18和54 mg·kg-1)、仙茅乙醇提取物(COE,3 000 mg·kg-1)4周。利用双能X线骨密度仪测右侧股骨的骨密度;全自动生化分析仪测定血清和尿液中Ca、P、肌酐(creatinine,Cr)含量及碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的活性。以Elisa试剂盒测定血清中骨钙素(BGP)和脱氧吡啶啉(DPD)的水平。结果 SD雌性大鼠灌胃给予70mg·kg-1·d-1的维甲酸2周可显著降低大鼠股骨的骨密度,增加尿液中Ca与肌酐的比值和血清抗酒石酸酸性磷酸酶的活性。雌二醇、淫羊藿总黄酮和仙茅苯甲酸酯类总酚苷不仅可显著增加维甲酸骨质疏松大鼠的骨密度,降低尿液中Ca与肌酐的比值和抗酒石酸酸性磷酸酶活性,抑制骨吸收;还可调节维甲酸模型大鼠血清中骨钙素的水平,增加碱性磷酸酶的活性,促进骨形成。结论仙茅苯甲酸酯类酚苷可通过抑制骨吸收、增加骨形成减少维甲酸骨质疏松大鼠的骨丢失。

HPLC法测定二仙汤提取物中抗骨质疏松有效成分的含量

目的：建立测定二仙汤提取物中抗骨质疏松有效成分淫羊藿黄酮、盐酸小檗碱和知母皂苷含量的方法。方法：淫羊藿苷和盐酸小檗碱采用高效液相色谱法,色谱柱为Diamonsil C18,流动相分别为甲醇-1%醋酸（60∶40,V/V）和甲醇-乙腈-0.3%三乙胺水溶液（20∶10∶70,V/V/V,磷酸调节p H=4.0）,检测波长分别为270 nm和340 nm,柱温分别为30℃和25℃,进样量均为20μl,流速均为1.0 ml/min。知母皂苷采用紫外-可见分光光度法测定,皂苷类成分用盐酸水解后,以菝葜皂苷元为对照品,与香草醛显色后,在（590±2）nm波长下检测。结果：淫羊藿苷、盐酸小檗碱、知母皂苷质量浓度分别在40.00-90.00、5.00-35.00、8.00-40.00μg/ml范围内具有良好的线性关系（r=0.999 8、0.999 9、0.999 5）;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均〈2%;平均加样回收率分别为101.43%、99.55%、101.30%,RSD分别为1.26%、1.93%、1.55%（n=6）。结论：本方法简便、重复性和稳定性良好,适用于二仙汤提取物的质量控制。

基于FoxO1通路探讨仙茅苷对H2O2诱导成骨细胞氧化损伤的保护作用及机制

目的探讨仙茅苷(Curculigoside)对H_2O_2诱导成骨细胞氧化损伤的保护作用及机制。方法采用H_2O_2(0.3 mmol·L^(-1))处理MC3T3-E1成骨细胞建立细胞氧化损伤模型,并以阳性对照药氮乙酰半胱氨酸(NAC,2.5 mmol·L^(-1))和不同浓度仙茅苷(10^(-6)、10^(-7)、10^(-8)mol·L^(-1))进行干预。采用MTT法检测成骨细胞的增殖情况;磷酸苯二钠法(p-PNPP-Na)法测定成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色法观察成骨细胞的骨矿化结节形成情况;ELISA法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力;流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)和线粒体膜电位;Western Blot法检测细胞叉形头转录因子1(FoxO1)和SOD-2的蛋白表达水平;免疫荧光组织化学法检测FoxO1、活化转录因子4(ATF4)、β-连环蛋白(β-catenin)在细胞核中的表达。结果与空白对照组比较,模型组成骨细胞在H_2O_2处理36~72 h后,MC3T3-E1细胞的增殖受到显著抑制(P<0.001);成骨细胞活力及ALP活性均明显降低(P<0.05),细胞形成的骨矿化结节的数量和面积明显减少;SOD活性明显降低(P<0.05),CAT活性明显增加(P<0.05);ROS水平增加,线粒体膜电位降低,总FoxO1a、SOD-2蛋白表达下调,FoxO1a在细胞核内的表达下调,在细胞质中的表达上调,在细胞核与细胞质表达的比例降低,但差异没有统计学意义(P>0.05);细胞核中FoxO1a、β-catenin、ATF4表达量升高。与模型组比较,阳性药组和不同浓度仙茅苷组的成骨细胞活力及ALP活性均明显上调(P<0.05),且细胞骨矿化结节的数量和面积明显增加;阳性药组及仙茅苷10^(-6)mol·L^(-1)组的细胞SOD活性明显增加(P<0.05),仙茅苷10^(-6)mol·L^(-1)组细胞的CAT活性明显增加(P<0.05);10^(-7)mol·L^(-1)仙茅苷组细胞的ROS水平明显降低(P<0.05);仙茅苷10^(-8)mol·L^(-1)组的线粒体膜电位明显升高(P<0.05);阳性对照组和10-6mol·L^(-1)仙茅苷组的细胞总FoxO1a蛋白表达明显上调(P<0.05);各给药组细胞的SOD-2蛋白表达均明显上调(P<0.05);10^(-6)mol·L^(-1)仙茅苷组细胞FoxO1a在细胞核与细胞质表达的比值明显升高(P<0.05);10^(-6)mol·L^(-1)仙茅苷组细胞的FoxO1a、ATF4在细胞核的表达上调,β-catenin在细胞核的表达没有明显变化。结论仙茅苷能够保护H_2O_2对MC3T3-E1成骨细胞的氧化损伤,可能与其增加FoxO1在细胞核内的表达,增强FoxO1a与ATF4相互作用,以及增强SOD及CAT活性有关。