鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的胞嘧啶5-甲基转移酶基因结构及其序列分析

对鳜鱼传染性脾肾坏死病毒 (infectiousspleenandkidneynecrosisvirus,ISKNV)的胞嘧啶 5 -甲基转移酶(MTase)基因的结构及序列进行了分析。序列比较分析表明 ,ISKNVMTase编码区全长 6 84bp ,编码长 2 2 7个氨基酸的蛋白质 ,推测分子量为 2 5 85 5D。与一些细菌的MTase比较 ,ISKNVMTase也含有负责转移甲基的 4个保守区 ,但缺乏识别靶序列的保守区。比较ISKNV与其它 6种脊椎动物虹彩病毒的MTase序列并建立系统树 ,ISKNV显著不同于蛙病毒属和淋巴囊肿病毒属。 7种脊椎动物虹彩病毒MTase具有高度保守区 ,可以此设计引物用PCR方法鉴定脊椎动物虹彩病毒。

鳜传染性脾肾坏死病毒主衣壳蛋白基因结构及序列分析

分析了鳜传染性脾肾坏死病毒(infectiousspleenandkidneynecrosisvirus,ISKNV)的主衣壳蛋白(MCP)基因结构及其序列。对ISKNVDNAKpnIL酶切片段的序列分析结果发现,该序列中含有完整的MCP基因。ISKNVMCP基因完整读码框为1362bp,GC含量为56 24%,编码一个长为453aa、分子量为49 61kD、等电点为6 25的推定蛋白。结构分析发现,该基因具有启动子元件TATA框和CAAT基序。根据对虹彩病毒MCP系统进化树和脊椎动物虹彩病毒的生物学特性的分析比较发现,ISKNV、RSIV、SBIV、GIV和ALIV等在养殖海、淡水鱼类中引起其脾、肾、固有层和表皮细胞肿大的虹彩病毒,是独立于蛙病毒属和淋巴囊肿病毒属的又一新脊椎动物虹彩病毒类群。

重组C因子检测银杏叶提取物注射液细菌内毒素的方法学研究

目的:建立银杏叶提取物注射液的重组C因子细菌内毒素检测方法。方法:使用重组C因子法进行细菌内毒素方法学研究,并用鲎试剂动态显色法、家兔法对银杏叶提取物注射液进行对比研究。结果:金纳多注射液稀释至400倍及以下浓度进行试验,回收率均在《中国药典》规定的50%~200%范围内,符合药典规定,并与动态显色法和热原法结果一致。结论:本研究为重组C因子检测中药注射液细菌内毒素的方法学和标准的建立提供了实验依据。

鳜传染性脾肾坏死病毒ICR489基因序列分析

报道了鳜鱼传染性脾肾坏死病毒 (ISKNV)的ICR489基因结构及其序列分析。对ISKNVDNAKpnⅠB酶切片段的序列分析结果发现该序列中含有完整的ICR489基因。ISKNVICR489基因完整读码框为 10 11bp ,GC含量为 5 6 97% ,等电点为 6 82 ,编码一个长为 337aa、相对分子质量为 382 70的推定蛋白。结构分析发现该基因起始密码子上游具有启动子元件TATAbox,有反向重复序列可形成茎环 ,并有一段回文序列。ISKNV与其它 3种虹彩病毒 (FV3、RRV和LCDV_1)的ICR489基因氨基酸序列具有一定的同源性 ,但ISKNV与它们的同源性不高 。

鳜传染性脾肾坏死病毒p31基因结构及序列分析

报道了鳜传染性脾肾坏死病毒 (ISKNV)的p31基因结构及其序列分析。对ISKNVDNAHindIIIE酶切片段的序列分析结果发现该序列中含有完整的p31基因。ISKNVp31基因完整读码框为 6 75bp ,GC含量为 4 9.78% ,等电点为 7.6 1,编码一个长为 2 2 5aa、分子量为 2 5 .3kD的推定蛋白。结构分析发现该基因具有启动子元件TATAbox和CAATmotif,下游有反向重复序列可形成茎环 ,另外还有一段直接重复序列和二联体结构。ISKNV与其它 3种虹彩病毒 (包括FV3、LCDV - 1和EHNV)的p31基因氨基酸序列具有一定的同源性 ,但ISKNV与它们的同源性不高 。

一种蛙病毒的纯化和酶切分析

从患病虎纹蛙（Ｒａｎａ ｔｉｇｒｉｎａ ｒｕｇｕｌｏｓａ）蛾料中分离得到一种蛙病毒，感染鱼的 ＦＨＭ、ＣＯ、ＥＰＣ细胞，获得大量的病毒原料，分离纯化得到高纯度的病毒粒子，电镜下可见病毒粒子为二十面体，具囊膜，直径平均为 １２５ ｎｍ．抽提病毒核酸，对其基因组ＤＮＡ进行酶切分析，病毒基因组为双链ＤＮＡ分子，表现脊椎动物虹彩病毒基因组的特点即其胞晒唉 ５’端高度甲基化．以限制性内切酶 Ｘｂａ、ＢａｍＨＩ、ＨｉｎｄⅢ、ＫｐｎＩ和ＰｓｔＩ 酶切病毒基因组 ＤＮＡ，经电泳分离后，分别得到 １３、２５、６、１４、２２条清晰的酶切片段，并根据酶切片段算得基因组的大小超过 １００ ｋｂ．用 ＰＣＲ方法，得到这个病毒的主衣壳蛋白（ＭＣＰ）基因保守序列，与ＦＶ３相比，同源性达９８％．

鳜传染性脾肾坏死病毒核糖核酸酶III基因结构及序列分析

测定了鳜传染性脾肾坏死病毒 (ISKNV)核糖核酸酶III(RNaseIII)基因的核苷酸全序列。该基因完整读码框为 771bp ,GC含量为 5 2 .5 3% ,编码一个长为 2 5 6个氨基酸、分子量为 2 8.9kD的推定蛋白。其上下游序列各有一个TATAbox ,终止子下游有一段回文序列。与其它物种相比 ,ISKNV与虹彩病毒 (包括LCDV - 1和CIV)的核糖核酸酶III基因的氨基酸序列同源性较高 ,与酵母。

蛙病毒核糖核酸酶Ⅲ基因结构及其序列分析

对蛙病毒 (TFV)核糖核酸酶Ⅲ基因序列进行分析。TFV基因组中含有完整的核糖核酸酶Ⅲ基因序列 ,全长为 1113bp ,GC含量为 5 6 .6 3%。其推定蛋白质的分子量为 4 0 .4 7kD ,等电点为7.99。序列结构分析发现在编码区的下游有可形成茎环的反向重复序列和形成发夹结构的回文序列。与其它物种相比 ,TFV与虹彩病毒的LCDV 1和CIV的核糖核酸酶Ⅲ基因的氨基酸序列同源性较高 ,与酵母。